博士科研启动基金(2006SMK03)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 阿米洛利对PGCL3细胞增殖的抑制作用及其机制被引量：3
- 2010年
- 目的:研究阿米洛利对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法:人肺癌细胞PGCL3经阿米洛利处理后用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测药物对PGCL3细胞周期的影响;Western blot检测药物对细胞的CyclinB1蛋白表达和细胞分裂周期基因25B(cell divide cycle 25B,Cdc25B)蛋白活性的影响。结果:PGCL3细胞经阿米洛利处理后,时间和剂量依赖性抑制细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期,下调CyclinB1蛋白表达,降低Cdc25B蛋白活性。结论:阿米洛利对PGCL3细胞的增殖具有抑制作用,其作用机制与抑制细胞周期相关蛋白的表达和活性有关。
- 徐彬 施静雯 毛建文徐彬施静雯毛建文
- 关键词：肺肿瘤阿米洛利PGCL3增殖
- bFGF基因转染对血管内皮细胞迁移的影响及机制被引量：6
- 2010年
- 目的研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移能力的影响,并探讨其可能机制。方法通过基因亚克隆构建真核表达载体pcDNA3.1-bFGF,利用脂质体介导将bFGF基因导入HUVECs内,通过RT-PCR和ELISA法检测基因的表达;bFGF基因转染后的HUVECs通过Transwell小室法检测其迁移能力的变化;W estern blot法检测转染后的细胞Raf-1、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)和黏着斑激酶(FAK)蛋白表达变化。结果成功构建了表达载体pcDNA3.1-bFGF,该载体转染HUVECs后,bFGF mRNA和蛋白均显著增加。转染bFGF基因可使HUVECs的体外迁移能力增强,上调ERK2和FAK蛋白的表达,但对Raf-1蛋白表达无影响。结论bFGF基因转染能促进血管内皮细胞的迁移,其作用机制可能与上调ERK2和FAK蛋白表达有关。
- 徐彬武晓英林桂先毛建文
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子基因转染血管内皮细胞迁移
- 阿米洛利对高转移肺癌细胞侵袭能力和uPA系统的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:观察阿米洛利对人高转移肺癌细胞PGCL3体外侵袭能力和尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogenactivator,uPA)系统的影响。方法:不同浓度(25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)的阿米洛利作用于PGCL3细胞6h后,用Transwell小室法检测对细胞侵袭能力和运动能力的影响。阿米洛利作用24h后,用发色底物法检测对细胞分泌的uPA和纤溶酶原激活物抑制剂-1(Dlasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)活性的变化。RT-PCR检测阿米洛利对细胞uPA、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)和PAI-1 mRNA表达的影响。Western blot检测阿米洛利对细胞uPA、细胞外调节蛋白激酶2(extracellular regulated proteinkinase 2,ERK2)和ras蛋白表达情况的影响。结果:侵袭实验和运动实验结果均显示,经阿米洛利处理后,穿膜细胞数明显减少,在100μmol/L时,对侵袭和运动的抑制率分别为(37.7±4.1)%和(64.9±4.9)%,与对照组相比具有显著性差异(P<0.01)。同时,细胞分泌的uPA和PAI-1活性降低,当浓度达到100μmol/L时,差异具有统计学意义(P<0.05)。从25μmol/L开始,阿米洛利就可显著抑制PAI-1 mRNA的表达,当达100μmol/L时可明显下调uPAmRNA的表达,但各浓度对uPAR mRNA的表达均无影响。随着阿米洛利浓度的增加,uPA蛋白表达量逐渐减少,但对ras和ERK2蛋白表达量无明显影响。结论:阿米洛利能够抑制高转移肺癌细胞PGCL3的侵袭和运动,其作用机制与抑制uPA和PAI-1的活性和表达有关,有成为抗肿瘤转移药物的潜力。
- 徐彬施静雯毛建文
- 关键词：阿米洛利肺癌尿激酶型纤溶酶原激活物
- 二甲基阿米洛利对人肺癌细胞增殖及细胞周期相关蛋白的影响
- 2010年
- 目的研究二甲基阿米洛利(dimethyl amiloride,DMA)对人高转移巨细胞肺癌细胞PGCL3增殖的作用及对细胞周期相关蛋白的影响。方法不同浓度的DMA作用于PGCL3细胞,用MTT法检测对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DMA对PGCL3细胞周期的影响;Westernblot检测DMA对细胞p21、cyclinA、细胞周期依赖激酶2(cell cycle depend on kinas e2,CDK2)、cyclinB1和细胞分裂周期基因25B(cell divide cycle 25B,Cdc25B)蛋白表达以及CDK2和Cdc25B蛋白活性的影响。结果DMA可抑制PGCL3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。DMA阻滞细胞于G2/M期和S期,上调p21蛋白表达,下调cyclinB1蛋白表达,降低CDK2和Cdc25B蛋白活性,但对cyclinA、CDK2和Cdc25B蛋白表达水平无影响。结论DMA可抑制人肺癌细胞增殖,并改变某些细胞周期相关蛋白的表达和活性,这可能是其抑制肿瘤的机制之一。
- 徐彬施静雯毛建文
- 关键词：肺癌细胞增殖细胞周期
- 碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响
- 2011年
- 背景:已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可抑制血管内皮细胞凋亡。目的:构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢(H2O2)诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组(转染pcDNA3.1)、过氧化氢组(转染pcDNA3.1+H2O2)和bFGF转染+过氧化氢组(转染pcDNA3.1-bFGF-GFP+H2O2),流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论:成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加(P<0.01),而bFGF转染+过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低(P<0.01)。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。
- 徐彬林桂先武晓英毛建文
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子血管内皮细胞凋亡BAX蛋白
