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缺氧所致海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸2B受体和PTEN基因的表达: 2010年; 目的探讨OGD缺氧损伤后大鼠海马神经元NR2B受体和抑癌基因PTEN的表达量,以及NR2B与PTEN是否有生理性相互作用关系,为研究PTEN基因在脑缺血中的保护作用机制奠定基础。方法建立海马神经元体外OGD损伤模型,采用细胞比色分析(colorimetric assay)法和Western blotting检测神经元NR2B含量,RT-PCR和Western blotting测定PTEN基因的mRNA和蛋白表达水平,免疫沉淀和Western blotting研究NR2B与PTEN的相互作用。结果细胞比色分析和Western blotting结果显示神经元有大量NR2B表达,OGD损伤72h后NR2B含量表达量明显减少(P<0.05);Western blotting和RT-PCR结果显示OGD损伤后PTEN表达量略有下降但尚无统计学意义(P>0.05),免疫沉淀显示PTEN与NR2B在物理上连接形成复合物。结论海马神经元膜表面NR2B含量丰富,PTEN基因在海马神经元里有表达,OGD缺氧损伤再灌注引起NR2B受体和PTEN基因表达量下降,PTEN与NR2B有生理性相互作用。; 陈力学刘宝松周冀英桂蓓邵阳; 关键词：PTEN基因 OGD

下调PTEN对血管性痴呆大鼠海马神经元CREB的调节作用被引量：3: 2010年; 目的探讨PTEN基因对血管性痴呆大鼠海马神经元CREB表达的影响机制。方法 30只大鼠随机分为正常组、AdR-siPTEN干预组、AdRFP阴性对照组,海马CA1区局部注射AdR-siPTEN腺病毒后2 d,采用双侧颈总动脉永久性结扎(2-VO)法建立血管性痴呆模型,4 w后应用HE染色检测神经元的损伤,RT-PCR和免疫组织化学检测CA1区Akt、CREB mRNA的表达。结果海马部位有PTEN基因红色荧光蛋白表达,并有PTEN基因的mRNA表达量明显下降(P<0.01);HE染色显示,AdR-siPTEN组海马神经元损伤和变性程度明显轻于AdRFP阴性对照组大鼠;RT-PCR和免疫组化染色结果显示,与AdRFP组相比,AdR-siPTEN治疗组CA1区Akt、CREB的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论下调PTEN基因可通过Akt增加CREB的表达,从而改善血管性痴呆大鼠神经元突触可塑性,达到减轻神经元损伤、提高学习记忆和神经保护的目的。; 韦永琼陈力学周冀英曾照芳申崇标黄道超崔智威; 关键词：血管性痴呆突触可塑性

NR2B在硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛中的表达变化所起作用的研究被引量：1: 2009年; 目的:探讨在硝酸甘油(Nitroglycerin,NTG)诱导大鼠偏头痛中NMDA受体NR2B亚基的作用。方法:通过皮下注射硝酸甘油构建偏头痛大鼠模型,采用RT-PCR、免疫组织化学法检测三叉神经节中NR2B的表达变化。结果:偏头痛大鼠三叉神经节NR2B的mRNA和蛋白表达量较对照组明显升高(P<0.05)。结论:NR2B通过神经传导可在偏头痛发病中起到重要作用。; 申崇标曾照芳; 关键词：NMDA NO

下调PTEN基因对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用研究: 2010年; 目的探讨下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)对全脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的保护作用。方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组(转染脂质体)、pshGFP组(转染pshGFP质粒)、pshRNApten治疗组(转染pshRNApten质粒),每组20只,各组分别于再灌注后3d(6只)、7d(7只)、14d(7只)三个时间点进行观察。正常对照组与pshGFP组分别注射脂质体与pshGFP质粒,pshRNApten治疗组于海马局部注射pshRNApten质粒。注射2d后,采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。利用RT-PCR和免疫组化法检测海马神经元PTEN基因的表达;采用HE和Nissl染色检测神经元损伤情况;采用TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果 pshRNApten治疗组海马神经元PTEN基因的mRNA和蛋白表达量均较正常对照组明显下降(P<0.05)。pshRNApten治疗组海马神经元损伤和变性程度均明显轻于pshGFP组大鼠,海马TUNEL染色阳性细胞数也明显少于psh-GFP组大鼠(P<0.05)。结论下调PTEN能有效缓解由缺血再灌注所致的神经元损伤。; 申崇标陈力学刘宝松周冀英曾照芳邵阳; 关键词：再灌注神经元

构建和鉴定PTEN基因的shRNA重组腺病毒表达载体被引量：3: 2009年; 目的构建PTEN特异性shRNA重组腺病毒表达载体,为应用基因沉默技术进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定基础。方法将前期构建的PTENshRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含PTEN基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌。pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、病毒滴度测定及Westernblotting检测受感染海马神经元细胞内PTEN蛋白的表达。结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-U6-shRNA包被成功,受腺病毒感染海马神经元细胞内PTEN蛋白表达明显降低。结论成功构建了PTEN基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-shRNA,为应用基因沉默技术研究PTEN对缺血性脑损伤后的神经保护作用奠定了基础。; 韦永琼曾照芳陈力学; 关键词：PTEN基因 RNA干扰腺病毒

下调PTEN基因对缺氧损伤后海马神经元NR2B受体调控机制研究被引量：2: 2010年; 目的:探讨用RNAi干扰技术下调第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)对缺氧损伤引起的神经元NR2B受体表达调控机制。方法:建立海马神经元培养缺氧缺糖(Oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤模型,转染shRNAspten-GFP质粒,采用细胞比色分析(Colorimetric assay)法观察神经元膜表面NR2B含量,RT-PCR测定NR2B受体的mRNA的表达,采用Fura2-AM法测定胞内Ca2+浓度,AlamarBlue进行神经元活力分析。结果:shRNAspten-GFP能成功转染到神经元中;细胞比色法显示神经元膜表面有大量NR2B表达,与PshGFP对照组相比shRNAspten治疗组NR2B含量明显降低(P<0.05),RT-PCR测定结果与细胞比色法结果基本一致;OGD损伤组比正常组胞内Ca2+浓度显著升高(P<0.05),转染PTEN基因后胞内Ca2+浓度比PshGFP对照组明显降低(P<0.05);无关对照PshGFP组神经元活力较正常对照组和治疗组均有显著下降(P<0.05)。结论:下调PTEN基因可降低NR2B的表达,阻断Ca2+内流,增加细胞活力,从而保护神经元损伤。; 陈力学刘宝松石少权周冀英桂蓓邵阳; 关键词：PTEN

偏头痛患者脑脊液的蛋白质组学研究被引量：2: 2010年; 目的分析偏头痛患者脑脊液蛋白质谱,筛选并鉴定与偏头痛密切相关的生物标志物。方法实验设两组,偏头痛组(n=25):包括有先兆偏头痛5例,无先兆偏头痛20例。对照组(n=20):眩晕或周围神经病患者20例。收集两组患者的脑脊液,先用丙酮沉淀法提取脑脊液中的蛋白质,之后用固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)寻找在两组中差异表达的蛋白质点。再用液相色谱串联质谱(LC/MS-MS)技术对差异蛋白质点进行鉴定,最后采用Western blotting对显著差异蛋白进行半定量,验证质谱结果。结果偏头痛组脑脊液2D-PAGE图谱与对照组存在差异,成功筛选并鉴定出9种10个差异蛋白质点,其中表达下调的为转甲状腺素蛋白(TTR)、色素框同源物6(CBX6)、凝集素前体(AGRN)、序列相似家族3成员C前体(FAM3C)、神经元正五聚蛋白受体(NPR)、皮离蛋白2(DCD)、白蛋白(ALB);表达上调的为连接桥粒斑珠蛋白(JUP)和H2A组蛋白家族,成员J(H2AFJ)。Western blotting证实,偏头痛组脑脊液NPR水平(0.3351±0.0275)与对照组(0.8854±0.0957)相比有所降低(P<0.01)。结论鉴定出的9种差异蛋白有可能成为诊断偏头痛的特异性标志物。; 李琴周冀英陈力学谭戈; 关键词：偏头痛脑脊髓液

血管性痴呆大鼠行为学及海马CA1区CREB改变的研究被引量：7: 2010年; 目的:观察缺血性痴呆(VD)大鼠神经行为学及海马CREB的改变,并探讨两者间的关系。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎(2 vessels obstruction,2-VO)法建立血管性痴呆模型,8周后采用Morriss水迷宫实验测试大鼠记忆行为,海马HE染色检测神经元损伤,PCR及免疫组化检测海马CAl区CREB表达的变化。结果:模型组与正常组相比,大鼠认知功和神经元损伤程度明显,海马区CREB表达也明显降低(P<0.01)。结论:2-VO法成功制作了缺血性痴呆大鼠模型。模型大鼠脑内海马区CREB水平明显下降,其空间学习记忆障碍可能与海马区CREB表达下降有关。; 韦永琼曾照芳陈力学申崇标; 关键词：血管性痴呆 CREB 海马CAL区水迷宫

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重庆市自然科学基金(2007BB5287)

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