广州市医药卫生科技项目(2009-YB-017)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：李书华曾山崎徐波肖焕擎黄桂填更多>>
- 相关机构：广州市第一人民医院广州医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定
- 2011年
- 目的：构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法：根据GenBank中的HTERT启动子（HTERTp）序列设计引物，以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板，PCR扩增HTERTp，并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中，构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG—HTERTp；NK4 cDNA酶切并回收克隆至pSG—HTERTp载体中，构建成pSG—HTERTp／pA—NK4穿梭质粒，脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒；噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒；RT-PCR检测NK4基因的转录；Western Blot检测NK4蛋白的表达。结果：成功构建出成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒，滴度为4．5×10^9空斑形成单位（pfu）／mL，且PCR扩增及western bolt电泳均呈阳性表达。结论：成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒，为进一步研究NK4基因的作用机制打下实验基础。
- 黄桂填肖焕擎曾山崎徐波蔡文松李书华
- 关键词：NK4基因腺病毒
- 人端粒酶反转录酶启动子调控NK4基因靶向治疗结肠癌的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的 构建人端粒酶反转录酶（HTERT）启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统,探讨NK4基因对结肠癌生长、侵袭转移的抑制作用.方法 以Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体感染结肠癌细胞HTC116,分别以RT-PCR方法和Western blot检测细胞内NK4基因mRNA及蛋白表达量：MTT和体外侵袭实验观察NK4对结肠癌细胞增殖及侵袭转移能力的抑制作用.建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察重组腺病毒Ad HTERTp-NK4对裸鼠结肠癌移植瘤生长的影响.结果 Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体感染HCT116细胞后,HCT116细胞内NK4 mRNA及蛋白表达水平明显增高：Ad HTERTp-NK4重组腺病毒感染后,HCT116细胞生长抑制率和侵袭抑制率分别为47.14%和40.63%,与Ad HTERTp-GFP（空载体）组（2.75%和2.31%）比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.局部注射Ad HTERTp-NK4重组腺病毒载体后,结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型肿瘤生长受抑,抑瘤率为47.3%,与空载体组（4.6%）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 HTERT启动子调控NK4基因靶向治疗系统可有效抑制结肠癌的增殖及侵袭转移,在结肠癌的基因治疗具有较好的应用前景.
- 徐波肖焕擎曾山崎黄桂填刘振邦钱跃军李书华
- 关键词：结肠肿瘤
