国家自然科学基金(30471768C03030307)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：候宜徐松柏许侃赵刚于洪泉更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技厅科研基金吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学哲学宗教更多>>
- VEGF基因修饰兔骨髓间充质干细胞的研究(英文)被引量：5
- 2008年
- 背景：血管内皮生长因子的应用是组织工程组织血管化的有效手段。但是,血管内皮生长因子价格昂贵,并且半衰期非常短,很难在体内保持有效的作用浓度。故本实验将其转入组织工程的种子细胞——骨髓间充质干细胞中,使骨髓间充质干细胞能够有效地分泌血管内皮生长因子,从而达到促进血管生成的目的。目的：探讨应用人血管内皮生长因子165进行基因修饰的可行性,为血管化组织工程组织的构建及缺血性疾病的治疗奠定实验基础。设计：观察对比实验。单位：吉林大学第一医院和吉林大学再生医学科学研究所。材料：实验于2003-06/2004-08在吉林大学再生医学科学研究所吉林大学重点实验室（生物安全实验室二级）完成。健康新西兰大耳白兔由吉林大学实验动物中心提供。4.0～5.0月龄,体质量215～315kg,雌雄兼用,实验过程中对动物处置均在麻醉状态、无菌条件下完成,符合动物伦理学标准。实验药品及试剂：HamF12培养基（GIBCO公司）,噻唑蓝（MTT）（Sigma公司）,pLXSN-KDRp-VEGF165与pcDNA3.0载体由本实验室自备,ELISA检测试剂盒（深圳晶美生物公司）,感受态大肠杆菌DH5α、限制性内切酶BamHⅠ、XhoⅠ、HandⅢ、EcoRⅠ和标准DNA分子（Promega公司）。方法：分离、培养新西兰大白兔骨髓间充质干细胞。构建并鉴定pcDNA3.0-VEGF165真核表达载体,利用脂质体介导其转染骨髓间充质干细胞,采用ELISA方法检测转基因骨髓间充质干细胞的人血管内皮生长因子蛋白表达,MTT法检测转基因骨髓间充质干细胞表达物对血管内皮细胞增殖活性的影响,设单纯培养骨髓间充质干细胞及pcDNA3.0转染骨髓间充质干细胞组为对照组。主要观察指标：①重组质粒双酶切和基因测序分析。②ABC-ELISA法观察质粒转染后的骨髓间充质干细胞的人血管内皮细胞生长因子蛋白表达。③通过MTT法检测人�
- 徐松柏赵刚赵红光许侃于洪泉候宜
- 关键词：骨髓间充质干细胞血管内皮生长因子基因转染骨髓祖代细胞
- 血管内皮生长因子基因在兔骨髓间充质干细胞中的转染和表达被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨应用人血管内皮生长因子165(hVEGF165)进行基因修饰的可行性,为血管化组织工程组织的构建及缺血性疾病的治疗奠定实验基础。方法:构建pcDNA3.0-VEGF165真核表达载体,利用脂质体介导转染兔骨髓间充质干细胞(MSCs),ELISA方法检测转基因MSCs的hVEGF蛋白表达情况,MTT法检测转基因MSCs表达物对血管内皮细胞增殖活性的影响,设单纯培养MSCs及pcDNA3.0转染MSCs组为对照组。结果:成功构建hVEGF真核表达载体,并成功地将其转入MSCs中;MSCs细胞在转染pcDNA3.0-VEGF165质粒24、48和72 h后,其培养上清中hVEGF蛋白表达量均较对照组显著升高(P<0.05),至G418筛选后12代,转基因MSCs培养上清中仍有hVEGF蛋白的表达,含2%、4%、8%、16%和32%转基因细胞培养上清的培养液均明显增加血管内皮细胞的增殖率,与对照组比较,差异均具有显著性(P<0.05)。结论:hVEGF165基因成功地转染至MSCs中,并可进行有效地表达。
- 徐松柏赵刚许侃候宜于洪泉崔阳
- 关键词：内皮生长因子基因转染骨髓祖代细胞
- 转基因组织工程骨体内移植修复颅骨缺损的实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的采用血管内皮生长因子（VEGF）转基因组织工程骨对兔颅骨缺损模型进行修复，对转基因技术在颅骨组织工程方面的应用进行初步探讨。方法建立兔颅骨缺损模型，以转基因MSCs与成骨诱导后的MSCs混合作为种子细胞构建的组织工程骨进行移植修复，以单纯组织工程骨为对照。通过血生化检查、组织学观察、X线检查以及组织学评分等指标来判断修复效果。结果转基因组织工程骨较单纯组织工程骨成骨细胞生长、增殖、血管形成更活跃，其成骨能力明显增强。结论VEGF转基因组织工程骨能加快修复区的骨形成，可望为临床大块颅骨缺损修复提供有效方法。
- 徐松柏赵刚许侃候宜于洪泉崔阳
- 关键词：血管内皮生长因子基因转染骨髓祖代细胞
