国家高技术研究发展计划(2001AA212171)
- 作品数：6 被引量：115H指数：4
- 相关作者：方肇寅郑丽舒谢华萍章青吕红霞更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心中国农业科学院生物技术研究所首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划World Health Organization更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒介导人FL与GM-CSF联合抗肿瘤免疫基因治疗实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的:研究腺病毒介导人F lt3 ligand(hFL)与GM-CSF在体内外的表达、体外生物学活性,体内扩增小鼠脾脏DCs及抑制小鼠EL-4淋巴瘤的效应。方法:应用AdEasy系统,将hFL和hGM-CSF DNA重组到穿梭质粒的两个独立转录单位上,得到重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF。采用ELISA、W estern b lot法测定重组腺病毒介导的hFL和hGM-CSF在体内外的表达情况。MTT法测定hFL和hGM-CSF刺激细胞增殖的生物学活性。利用流式细胞分析技术研究重组腺病毒对小鼠脾脏树突状细胞(DCs)的扩增情况。在移植EL-4淋巴瘤的小鼠皮下注射4次重组腺病毒(每次5×109pfu),研究其抑制肿瘤生长的功能。结果:构建得到含有双基因的重组腺病毒Ad-hFL-hGM-CSF,并在体内、外高效共表达hFL和hGM-CSF。hFL对小鼠骨髓有核细胞,hGM-CSF对TF1细胞,均有明显的刺激增殖作用。Ad-hFL-hGM-CSF显著扩增小鼠脾脏DCs至正常值的50倍。抑瘤实验中,Ad-hFL-hGM-CSF使小鼠EL-4淋巴瘤生长延慢,瘤体比对照组明显减小,抑瘤率为30%,P<0.05。病理切片显示,Ad-hFL-hGM-CSF治疗组肿瘤细胞间隙有大量淋巴细胞浸润。结论:腺病毒介导hFL和hGM-CSF在小鼠体内显著扩增脾脏DCs,并可抑制EL-4淋巴瘤的生长。
- 张艳丽魏义举王亚栋邓艳春苏林刘长征杨克恭陈松森
- 关键词：HFL腺病毒免疫基因治疗
- 长春地区儿童轮状病毒性胃肠炎的研究被引量：5
- 2007年
- 目的:了解长春地区儿童胃肠炎轮状病毒感染情况。方法:用PAGE和/或ELISA及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增方法对2006年长春市儿童医院住院胃肠炎患儿粪便标本进行检测,并对临床资料进行分析。结果:儿童胃肠炎轮状病毒检出率54.01%,轮状病毒感染97.13%发生于2岁以下儿童。G3型为79.63%,G1型为5.56%,未分型为14.81%。轮状病毒G3型为2006年长春地区轮状病毒流行优势株,每年寒冷季节流行(11月到次年3月)。结论:轮状病毒是长春地区儿童重症腹泻的主要原因。
- 王承训孙利炜刘愉赵艳玲邓琳菲方肇寅
- 关键词：儿童轮状病毒胃肠炎
- 北京友谊医院1998～2001年轮状病毒哨点监测分析被引量：32
- 2003年
- 目的 了解 5岁以下儿童中以医院为基础的轮状病毒流行情况。方法 按WHO轮状病毒监测的通用方法 (CID 98)进行 ,轮状病毒检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 /酶联免疫吸附试验(ELISA)。毒株分型用ELISA/逆转录聚合酶链反应。结果 从 1998年 4月至 2 0 0 1年 3月收集的4 84份腹泻患儿粪便标本中 ,检出阳性标本 12 3份 ,总的轮状病毒感染检出率为 2 5 .4 % ,住院和门诊患儿检出率分别是 31.6 %和 2 7.3% ,而在轮状病毒流行季节 ,则可以引起高达 4 6 .2 %急性腹泻住院率。腹泻患儿发病呈现两个明显的季节高峰 :一个由细菌性痢疾引起的夏季 (6～ 9月 )发病高峰 ,另一个是轮状病毒感染腹泻造成的秋冬季 (10～ 12月 )发病高峰。轮状病毒感染 96 .8%发生于 3岁以下幼儿 ,主要在 6～ 11月龄 (38.2 % )和 1～ 2岁 (2 8.5 % )年龄组 ,轮状病毒感染率在 6～ 35月龄年龄段最高。流行的轮状病毒G血清型依次为G1(5 5 .3% )、G2 (2 6 .8% )、G3(9.8% )和G4 (0 .8% ) ,没有发现G9型 ,10份 (8.1% )标本未能分型 ,混合感染 (0 .8% )罕见。结论 轮状病毒腹泻是北京市儿童的重要传染病 ,开发应用安全有效的轮状病毒疫苗将对减轻轮状病毒疾病负担有重要作用。
- 童志礼马莉章菁侯安存郑丽舒金宗平谢华萍马兰张丽杰Ivanoff BGlass RIBresee JSJIANG XiKilgore PE方肇寅
- 关键词：轮状病毒哨点监测腹泻
- 河北省卢龙县1999～2001年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究被引量：54
- 2003年
- 目的 研究河北省卢龙县 5岁以下婴幼儿杯状病毒腹泻的流行特点。方法 应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测人类杯状病毒 (HuCVs)。部分阳性标本的PCR产物经克隆测序 ,结合参考毒株相应的核苷酸序列进行进化分析。利用住院腹泻患者粪便样本中HuCVs的检出率 ,估计HuCVs腹泻住院率。结果 HuCVs检出率为 31.6 % ,住院患者HuCVs阳性率为 17.5 % ,主要分布在 3～ 17月龄婴幼儿 ,发病主要集中在冬季。 11株测序病毒之间的核苷酸序列同源性为 5 5 .1%～ 10 0 % ,均属于诺瓦克病毒 (NLV)GⅡ遗传组。卢龙县 2 0 0 0年HuCVs流行株为NLVGⅡ 4和GⅡ 7,2 0 0 1年为NLVGⅡ 3和GⅡ 7。初步估计HuCVs腹泻患者住院率为 3.6‰。结论 河北省卢龙县婴幼儿中存在不同基因型杯状病毒感染 ,以NLVGⅡ组毒株为主 ,其疾病负担仅次于轮状病毒。
- 吕红霞方肇寅谢华萍唐景裕胡海宽郑丽舒叶青章青ZHONG Wei-minJIANG Xi
- 关键词：婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学
- 大豆24kDa油体蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2005年
- 分别构建了含全长大豆24 kDa油体蛋白基因、与大肠杆菌热敏毒素B亚基和定居因子CS6 B亚基基因以串联方式融合的全长大豆24 kDa油体蛋白基因、缺失N端74个氨基酸编码序列的油体蛋白基因及缺失C端152个氨基酸编码序列油体蛋白基因等4个大肠杆菌表达载体。除N端缺失的油体蛋白基因外,其它3个载体的IPTG诱导表达产物对E.coli生长表现出明显的抑制作用,菌液浓度与对照菌株相比,至少降低了3倍;而N端缺失了222个编码核苷酸的油体蛋白基因则对宿主细菌细胞的生长繁殖不再表现有任何毒性。进一步通过SDS-PAGE和Western印迹反应检测各表达载体的IPTG诱导表达产物时发现,仅有N端缺失的24 kDa油体蛋白基因片段在宿主细胞BL21(DE3)和Rosseta(DE3)中有重组油体蛋白积累。
- 徐妙云刘德虎李刚强
- 关键词：大豆亚基IPTG大肠杆菌表达生长繁殖WESTERN印迹
