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热休克蛋白水平与突变亨廷顿蛋白聚积和毒性的关系研究: 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是分子伴侣的一大家族,是一类能帮助新合成的多肽链正确折叠或纠正错误折叠而维持蛋白质正确构象的蛋白质。亨廷顿病(Huntington’s disease,HD)是一...; 叶翠芳黄珊珊章宏峰汪薇曦张亦农李和; 关键词：亨廷顿病亨廷顿蛋白热休克蛋白; 文献传递

胰岛素抑制突变亨廷顿蛋白的聚积和毒性: 2008年; 目的:探讨胰岛素对细胞内突变亨廷顿蛋白(Huntingtin,htt)聚集物形成及其细胞毒性的影响。方法:利用脂质体转染法在培养的Hela细胞和HEK293细胞瞬时或稳定转染编码正常或突变htt的氨基末端片段的cDNA,检测不同浓度胰岛素刺激对细胞内突变htt聚集物形成以及细胞活力的影响。结果:在瞬时转染的Hela细胞和稳定转染的HEK293细胞中,含20个谷氨酰胺重复序列(20Q)的正常htt氨基末端片段弥散分布在胞浆内,而含150个谷氨酰胺重复序列(150Q)的突变htt氨基末端片段在多数细胞胞浆或核内形成聚集物。150Q的Hela和HEK293细胞经一定浓度的胰岛素刺激后聚集物的形成显著减少,细胞活力也明显提高。而胰岛素的刺激对20Q的细胞内正常htt的表达以及细胞活力无明显影响。结论:胰岛素能有效抑制细胞内突变htt聚集物的形成及其细胞毒性。; 叶翠芳李和刘思何小波邹玮; 关键词：亨廷顿病亨廷顿蛋白胰岛素毒性

热休克蛋白40和热休克蛋白70抑制N2a细胞内突变亨廷顿蛋白聚积和毒性: 2009年; 目的研究热休克蛋白40（HSP40）和热休克蛋白70（HSP70）对N2a细胞内突变亨廷顿蛋白（htt）聚集物形成和毒性的影响。方法应用荧光显微镜术和免疫印迹技术检测单独或共同过表达HSP40和HSP70对N2a细胞内转染的突变htt（含有150个谷氨酰胺重复数,150Q）聚集物形成的影响;应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析细胞活力和比色法检测细胞内活性氧（ROS）含量。结果单独过表达HSP40或HSP70,尤其是共同过表达HSP40和HSP70显著减少150Q htt在N2a细胞内的聚积,各组含有聚集物的细胞为（n=1 000）：仅表达150Q htt组约50%,过表达HSP40组约12%,过表达HSP70组约15%,共同过表达HSP40和HSP70组约5%。MTT分析结果显示,单独尤其是共同过表达HSP40和HSP70能显著增加150Q细胞的活力（P＆lt;0.01,n=3）,同时减少ROS产生（P＆lt;0.01,n=3）。结论HSP40和HSP70通过抑制细胞内突变htt聚积以及减少氧化应激而增加150Q N2a细胞活力。; 叶翠芳李和; 关键词：亨廷顿蛋白热休克蛋白70 免疫印迹四甲基偶氮唑盐 N2A细胞

动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性方法的建立: 2009年; 目的建立一种动态检测活细胞内泛素-蛋白酶体系统活性的方法。方法将表达绿色荧光蛋白(GFP)或红色荧光蛋白(DsRed_2)的质粒分别改建为表达带有内泛素-蛋白酶体系统降解信号CL1的GFP或DsRed_2的pGFP^u或pDsRed_2~u质粒,然后转染HEK293细胞,通过G418筛选得到稳定表达GFP^u或DsRed_2~u的细胞系。在蛋白酶体抑制剂N-Acetyl-Leu-Leu-Norleu-al(ALLN)处理GFP^u或DsRed_2~u细胞后,应用免疫印记技术检测细胞内GFP或DsRed_2含量的变化,应用荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜技术观察GFP或DsRed_2荧光强度的变化。结果ALLN处理能使GFP^u和DsRed_2~u细胞内GFP和DsRed_2含量明显增加,荧光强度显著增强,并呈现明显的剂量/时间-效应关系。结论本文成功地建立了检测内泛素-蛋白酶体系统活性的方法,该方法能有效地对活细胞的内泛素-蛋白酶体系统活性进行实时动态检测。; 章宏峰张亦农汪薇曦贺军李和; 关键词：绿色荧光蛋白红色荧光蛋白蛋白酶体抑制剂

热休克蛋白水平与突变亨廷顿蛋白聚积和毒性的关系研究: 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是分子伴侣的一大家族,是一类能帮助新合成的多肽链正确折叠或纠正错误折叠而维持蛋白质正确构象的蛋白质。亨廷顿病 (Huntington’s disease,HD)是...; 叶翠芳黄珊珊章宏峰汪薇曦张亦农李和; 文献传递

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国家自然科学基金(30430260)