上海市自然科学基金(10ZR1401700)
- 作品数：3 被引量：14H指数：2
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- 镉对人胚胎神经干细胞增殖抑制及对金属硫蛋白各亚型的诱导表达
- 2015年
- [目的]探讨镉对人胚胎神经干细胞增殖能力的影响和对金属硫蛋白(MT)各亚型的诱导表达。[方法]以0、1.25、2.5、5μmol/L氯化镉(Cd Cl2)染毒人胚胎神经干细胞24 h后,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞活力,5-乙炔基-2′脱氧尿苷(Ed U)法测定细胞增殖能力,分光光度法测定培养上清中乳酸脱氢酶活性(LDH),应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测镉对人胚胎神经干细胞MT 10个亚型的m RNA表达的影响。[结果]与对照组相比,浓度为2.5、5μmol/L Cd Cl2染毒组细胞活力明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);且细胞相对存活率与Cd Cl2浓度呈负相关(r=-0.98,P<0.01)。1.25μmol/L及以上镉可明显抑制DNA的复制(P<0.05),且细胞增殖与Cd Cl2浓度对数值呈负相关(r=-0.91,P<0.01)。与对照组相比,各染毒组细胞培养上清中LDH水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且细胞培养上清中LDH水平与Cd Cl2浓度呈正相关(r=0.97,P<0.01)。与对照组相比,MT基因各亚型的m RNA表达水平随着Cd Cl2染毒浓度的升高而升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。[结论]镉可引起人神经胚胎干细胞自我更新功能的抑制,表现为细胞活力和增殖能力的下降,细胞培养液中LDH含量的上升,细胞MT基因各亚型m RNA表达水平的明显升高。
- 王新金窦婷婷吕文常秀丽周志俊
- 关键词：镉人胚胎神经干细胞细胞增殖金属硫蛋白神经发育毒性
- 百草枯对人胚胎神经干细胞分化过程中Wnt通路分子表达的影响被引量：9
- 2013年
- [目的]通过对神经干细胞Wnt信号通路中关键分子β-catenin/DVL2基因表达的研究,探讨百草枯对分化中的神经干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。[方法]以人胚胎神经干细胞为研究对象,观察体外诱导分化情况,并采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度百草枯对细胞活力的影响,选取未观察到细胞毒性的浓度为0.10、1.00、10.00μmol/L的百草枯染毒,在分化2、4、8、12d利用实时荧光定量多链聚合反应技术检测Wnt信号通路关键分子β-catenin和DVL2 mRNA的表达情况。[结果]百草枯在100.00μmol/L时可明显抑制细胞活力(P<0.01)。百草枯在神经干细胞分化期2、8、12d明显下调β-catenin mRNA的表达,除10.00μmol/L染毒组在分化期8d以外,其余各剂量组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。百草枯在神经干细胞分化期2、12d DVL2 mRNA的表达明显下调,除0.10μmol/L染毒组在分化期12d该基因mRNA表达升高外,其余各剂量组与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01);在分化期4dDVL2 mRNA的表达明显上升,各剂量组与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。[结论]百草枯抑制Wnt信号通路中关键分子β-catenin和DVL2基因mRNA的表达,最终可影响神经干细胞的分化过程。
- 窦婷婷常秀丽吕文周志俊
- 关键词：神经干细胞百草枯分化WNT通路
- 百草枯对体外培养小鼠胚胎神经干细胞增殖的影响被引量：8
- 2011年
- [目的]观察百草枯(paraquat,PQ)对体外培养小鼠胚胎神经干细胞增殖活力的影响。[方法]取10.5d小鼠胚胎进行体外神经干细胞原代培养,对培养细胞进行形态学观察、特异性蛋白质免疫细胞化学染色鉴定;用终浓度为0.00、0.10、1.00、10.00、100.00、1000.00μmol/L的PQ处理神经干细胞24h后,采用阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒检测法(AlamarBlue法)测定细胞相对存活率,分析不同浓度PQ对神经干细胞增殖的影响。用终浓度为0.00、0.10、1.00、10.00、50.00、100.00μmol/L的PQ处理神经干细胞24h后,用活性氧荧光定量法(DCFH-DA法)检测细胞内活性氧(ROS)水平。[结果]免疫细胞化学检测结果显示,培养的细胞可以表达神经干细胞(NSCs)特异性蛋白;经诱导分化后的细胞可以表达神经细胞特异性蛋白;AlamarBlue法检测结果表明,与对照组相比,当PQ≥100.00μmol/L时,细胞存活率明显降低;并伴随染毒浓度的升高而进一步降低(P<0.05)。ROS检测结果表明,与对照组相比,当PQ≥10.00μmol/L时,细胞内ROS水平明显提高。[结论]培养的神经细胞具备神经干细胞的基本特征;PQ可引起细胞内ROS水平的升高,并抑制神经干细胞的增殖,且存在剂量依赖性。
- 吕文常秀丽吴庆周志俊
- 关键词：神经干细胞百草枯增殖
