黑龙江省自然科学基金(ZJY0701)
- 作品数：8 被引量：55H指数：5
- 相关作者：曲章义王迎晨魏凤香张鸿彦袁晓辉更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学附属第二医院东北林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 人呼吸道腺病毒通用特异检测试剂的研究及应用被引量：1
- 2008年
- 目的建立一种特异性强、灵敏度高、操作简便的呼吸道腺病毒检测方法，为临床呼吸道腺病毒通用特异诊断试剂的研发奠定实验基础。方法用生物信息学软件DNAMAN5．2．2、GeneRunner3．05、BLAST对GenBank中已收录的10个型别人呼吸道腺病毒核酸全序列进行比对分析，找m高度保守序列，设计5对腺病毒通用特异引物，同时确保PCR产物具有型别特异性。用NP-40裂解法制备模板，对引物的有效性、特异性及灵敏忡进行验证．并应用于64例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本的检测，阳性标本的PCR产物直接测序鉴定血清型．将阳性标本接种HeLa细胞，光镜下观察细胞病变，电镜下观察病毒形态。结果BLAST结果表明，5对引物与其他病毒、细菌及人类基因组等无高度同源性，是腺病毒特异性引物。用5对引物扩增人3型腺病毒DNA，均出现阳性目的条带，但不能检测呼吸道合胞病毒和柯萨奇病毒，验证了引物的有效性和腺病毒特异性。模板稀释、病毒稀释均可检测到10。梯度，说明引物具有较高的灵敏性，同时验证了NP-40裂解法的稳定性。64例临床咽拭子标本巾检测出2例阳性标本，阳性率为3．13％（2／64）。阳性标本接种HeLa细胞，光镜下可见细胞变圆、聚集成葡萄串状、脱落等腺病毒所致细胞病变，电镜下可见细胞核内有典型的品格状排列的腺病毒颗粒。PCR产物测序结果表明，2株病毒均为B组腺病毒。结论成功设计了腺病毒通用的、特异的，同时扩增产物又具有腺病毒型别特异性的引物。用该引物建立的PCR方法检测呼吸道标本中的腺病毒DNA具有灵敏和特异的特点，适用于临床常规诊断腺病毒感染。
- 陈晶曲章义魏凤香张鸿彦王鹏王迎晨姜海英
- 关键词：聚合酶链反应
- 人3型腺病毒六邻体蛋白同源建模及其进化轨迹分析被引量：9
- 2009年
- 用同源建模方法构建了人3型腺病毒六邻体完整的空间结构,对此结构模型的合理性进行检验,并通过基于多重序列比对的进化轨迹分析发现,不同型别的人腺病毒六邻体型特异性序列主要存在于六邻体的塔区上,结合二级结构分析,预测位于六邻体塔区表面的几个环区是型特异性中和表位的所在区域.
- 袁晓辉曲章义吴晓敏王迎晨魏凤香张鸿彦刘蕾杨志伟
- 关键词：同源建模中和表位
- 通用引物PCR研究进展被引量：3
- 2008年
- 通用引物PCR是应用与不同序列的保守区互补的通用引物,来进行PCR扩增,它能够高通量地对相关微生物或其亚型进行检测与鉴定分型,是一种简便、快速、灵敏、特异的鉴定分型方法,目前广泛应用于病毒、细菌、支原体及真菌等微生物的检测与鉴定。
- 袁晓辉曲章义王迎晨陈晶曲章义（审校）
- 关键词：聚合酶链反应DNA引物保守序列蛋白质亚型临床实验室技术
- 进化树指导的腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模被引量：5
- 2011年
- 为实现对人腺病毒六邻体家族蛋白进行快速准确的结构建模,发展了一种新的基于进化树的预测蛋白质家族中一系列分子三维空间结构的快速建模方法.首先利用邻接法对7株D亚属人腺病毒的六邻体序列构建了基于距离的进化树,并根据进化树所提供的信息确定最佳六邻体家族蛋白渐进式建模路径,然后利用Modeler与Charmm程序实现六邻体家族蛋白的快速建模.新的建模方法与传统方法相比,需要的计算量大大减少,经过结构评估以及与传统方法建模所得到的结构进行比较,证实基于进化树的快速建模结果是可靠的.人腺病毒六邻体家族蛋白的快速建模对于实现快速高通量的表位预测及开发多价人腺病毒疫苗与腺病毒分型诊断试剂都具有重大的意义.
- 袁晓辉王迎晨曲章义任家毅王靖飞郭莹莹王雅贤华东吴晓敏杨志伟高虹
- 关键词：同源建模进化树人腺病毒
- 人腺病毒五邻体基因重组质粒的构建及鉴定被引量：8
- 2009年
- 目的构建腺病毒五邻体基因重组表达质粒。方法通过PCR方法扩增获得腺病毒五邻体基因的完整序列,将此片段定向克隆到pQE30载体的多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用酶切鉴定方法与核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性。结果用PCR法获得了人腺病毒的五邻体基因,将该基因正确地重组到表达质粒pQE30中,构建出腺病毒五邻体基因重组表达质粒pQE30-penton。结论构建腺病毒五邻体基因重组表达质粒pQE30-penton。
- 姜海英曲章义张鸿彦王鹏王迎晨
- 关键词：腺病毒重组质粒
- 肉桂醛抗腺病毒作用研究被引量：14
- 2011年
- 目的:研究肉桂醛抗腺病毒(ADV)作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和病毒增殖抑制实验观测肉桂醛抗ADV作用;免疫荧光法检测肉桂醛对ADV六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果:(1)MTT和病毒增殖抑制实验结果表明肉桂醛在3种作用方式(除细胞保护作用方式)下能够增强宿主细胞存活率,降低病毒滴度,且细胞存活率与药物浓度呈正相关,肉桂醛对宿主细胞无保护作用,不能阻断病毒进入细胞。(2)肉桂醛(除细胞保护作用方式)组与病毒组比较hexon蛋白的表达明显降低(P<0.05)。结论:肉桂醛有抗ADV作用,但却对宿主细胞无保护作用,肉桂醛抗ADV作用可能与调节hexon蛋白的表达有关。
- 刘蕾曲章义王淑秋魏凤香高虹
- 关键词：腺病毒肉桂醛
