国家现代农业产业技术体系建设项目(CARS-22-SYZ10)
- 作品数：5 被引量：19H指数：1
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- 柞蚕真菌蛋白酶抑制剂基因CP8的克隆与表达分析被引量：1
- 2015年
- 蛋白酶抑制剂在昆虫免疫中发挥着重要的作用。首次克隆获得了一个柞蚕真菌蛋白酶抑制剂基因ApCP8的开放阅读框(ORF)序列。该基因的ORF序列全长318 bp,编码了一个由106个氨基酸组成的蛋白(包括19个氨基酸的信号肽)。预测蛋白的等电点和分子量大小分别为9.05和11.3 kD。序列分析和进化树构建结果表明,ApCP8与已知的几种昆虫相应蛋白具有很高的同源性,且与印度柞蚕的CP8聚在同一进化分支上。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)结果表明,ApCP8主要在柞蚕脂肪体中高表达;且ApCP8在被白僵菌诱导的初期高表达,推测其可能参与了柞蚕抗真菌的免疫反应。同时,利用pET-32a(+)载体对ApCP8进行了原核表达,并对重组表达蛋白进行了纯化和抗体制备。本研究将为进一步探索ApCP8的抗真菌功能奠定前期基础。
- 钱岑王芳李胜刘朝良
- 关键词：柞蚕克隆原核表达RT-QPCR
- 柞蚕肠道菌群分析及产酶菌的筛选与鉴定被引量：18
- 2011年
- 【目的】研究柞蚕肠道菌群结构及产酶菌,探寻具有新的生理功能的微生物,用于研制微生态制剂,以提高柞蚕生产的叶丝转化率及抗病能力。【方法】采用培养法分离柞树叶饲喂的5龄柞蚕幼虫肠道细菌,通过生理生化特性结合16S rDNA系统发育分析,对其肠道细菌群落类型进行鉴定,采用筛选培养基筛选产纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶的菌株。【结果】获得的柞蚕肠道菌有芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌,其中以芽孢杆菌为主要菌群。芽孢杆菌是肠道菌中产纤维素酶、蛋白酶的主要菌群;葡萄球菌产蛋白酶能力较弱;肠杆菌不产酶。【结论】柞蚕肠道菌与家蚕肠道菌群结构相似,筛选出的产酶菌活性较高,可以制备微生态制剂用于蚕业生产。
- 邹昌瑞魏国清刘朝良朱保建王在贵杨文静
- 关键词：柞蚕肠道菌菌群结构
- 柳蚕小热休克蛋白20.8基因的克隆与表达分析被引量：1
- 2015年
- 小热休克蛋白(SHSPs)是从细菌到哺乳动物中广泛存在的一类热应急蛋白质,可调控蛋白的折叠和保护有机体免受外界压力。克隆获得了一个柳蚕shsp的开放阅读框(ORF)序列。该基因cDNA序列全长561bp,编码了一个由186个氨基酸组成的蛋白。预测蛋白分子质量20.8ku,等电点为5.98,故命名为As-SHSP20.8。序列分析和进化树构建结果表明,As-shsp20.8与已知的昆虫shsps家族具有很高的同源性,且与家蚕的shsp20.8聚在同一进化分支上。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)结果表明,As-shsp20.8在柳蚕的各组织中均有分布,但在脂肪体中表达量最高;且As-shsp20.8可被大肠杆菌和白僵菌诱导高表达,推测其可能参与了柳蚕的免疫反应。同时,利用pET-28a(+)载体对As-shsp20.8进行了原核表达,并对重组表达蛋白进行了纯化和抗体制备。将为进一步探索As-SHSP20.8的免疫功能奠定前期基础。
- 钱岑王芳李胜刘朝良
- 关键词：柳蚕克隆原核表达免疫刺激RT-QPCR
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂20的表达特征分析
- 2015年
- 【目的】原核表达家蚕Bombyx mori丝氨酸蛋白酶抑制剂20(Serine proteinase inhibitor 20,Bm Serpin-20),分析Bm Serpin-20基因和蛋白组织表达分布特点,以及不同外源病原物刺激家蚕后Bm Serpin-20基因的表达模式。【方法】利用p ET-28a表达载体在大肠杆菌Transetta(DE3)中融合表达Bm Serpin-20蛋白,利用纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用实时定量PCR技术及Western blot方法分别分析Bm Serpin-20基因和蛋白的组织表达水平,以及病原物免疫刺激后的表达模式。【结果】在大肠杆菌中正确表达和纯化了融合Bm Serpin-20蛋白,并制备了多克隆抗体;Bm Serpin-20基因和蛋白在脂肪体、中肠、血细胞、马氏管、表皮、睾丸、卵巢中均有表达,且在表皮中表达量最高;家蚕5龄幼虫经核型多角体病毒(Nuclear polyhedrosis viruses)、藤黄微球菌Micrococcus luteus、大肠杆菌Escherichia coli、白僵菌Beauveria bassiana处理后,Bm Serpin-20基因表达量先下调而后上调,但不同病原物在不同时间的影响不尽相同。【结论】研究了Bm Serpin-20基因和蛋白的表达模式,为下一步研究其在家蚕免疫系统中的作用奠定了基础。
- 张学义于皓张小娟朱保建魏国清钱岑刘朝良王磊
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂
- 蚕业资源综合利用本科课程教学探讨
- 2015年
- 蚕业资源综合利用课程是蚕学专业的重要专业课之一,针对该课程的教学现状,从教学内容、教学理念、教学模式和考核评价方式等多个方面和角度对该课程的教学现状进行了分析和探索,以期改善该门课程的教学质量,充分发挥该课程的特色。
- 钱岑刘朝良王磊朱保建
- 关键词：教学内容教学理念教学模式
