国家教育部博士点基金(20050114001)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
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- bax基因siRNA序列的筛选及其对铝致神经胶质瘤细胞凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的应用RNA干扰技术降低促凋亡基因bax的表达,以阻抑铝诱导的神经胶质瘤细胞凋亡。方法设计了3对阻抑bax基因表达的siRNA序列,对神经胶质瘤细胞进行了转染,根据不同siRNA序列在不同转染剂量、不同转染时间的细胞活力,找到bax siRNA转染的最佳转染剂量和最适转染时间。依据RNA干扰前后bax基因的表达变化筛检出最有效的siRNA序列。用荧光染色法、荧光定量PCR法和免疫组织化学染色法分别检测其转染效率、对基因表达的干扰效率及对蛋白表达的阻抑效应。结果最有效的针对bax基因的siRNA序列为siRNA1,该序列的转染效率>90%,对bax基因表达的干扰效率为62.3%,最佳转染后检测点为转染后72h,最适转染剂量为20nmol/L。结论阻抑bax基因表达的siRNA序列能有效干扰bax基因和蛋白的表达,降低凋亡率。
- 张勤丽石樱桃牛侨
- 关键词：BAX铝凋亡神经胶质细胞
- bak基因干扰在铝致SH—SY5Y细胞凋亡中的作用
- 2008年
- 目的以铝致神经母细胞瘤细胞（SH—SY5Y）为模型，研究用RNA干扰的方法阻抑bak基因的表达，找到其最优的序列、最适的转染浓度和转染时间，以减少铝引起的神经细胞凋亡。方法将三对bak基因小干扰RNA（siRNA）序列用不同浓度铝染毒细胞，分别测定不同的siRNA序列、不同的转染浓度及不同的转染时间对细胞活力的影响。用荧光染色法计数转染效率，用荧光定量PCR法检测干扰效率，用免疫组织化学染色法测定阻抑Bak蛋白表达效果。最后，用选定的bak siRNAl作用于染铝后的神经瘤细胞，并检测其对细胞的凋亡率及坏死率的影响。结果siRNAI序列为最有效的序列，最适转染浓度为10nmol／L，最适作用时间为转染后24h。siRNA的转染效率〉90％，最大干扰效率为57．76％，并表现了对Bak蛋白表达的明显的阻抑效应。bak siRNAI作用于染铝后的神经瘤细胞，可以明显降低细胞的凋亡率，但对细胞的坏死率的影响并不明显。结论凋亡是铝致SH-SY5Y细胞死亡的重要途径，针对bak基因，用化学法合成siRNA并将其导人神经细胞，可以有效降低bak基因和Bak蛋白的表达，提高细胞活力和降低细胞的凋亡率，为预防及治疗铝诱导的神经细胞凋亡及神经退行性变的发生发展提供理论依据。
- 张勤丽牛侨牛丕业
- 关键词：BAK基因RNA干扰铝细胞凋亡
- 程序性坏死参与铝致神经母细胞瘤细胞死亡机制被引量：7
- 2008年
- 目的探讨程序性坏死(necroptosis)在铝致神经细胞死亡中的作用,以完善铝致神经细胞死亡的机制研究。方法用4mmol·L-1AlCl3·6H2O染毒神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y制作铝致神经细胞死亡模型,用RNA干扰技术(RNAi)抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3基因的表达;用程序性坏死的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1)抑制程序性坏死的产生。检测不同处理、处理后不同时间点细胞的活力变化,荧光定量PCR法检测RNAi效率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率及坏死率改变,免疫组织化学法检测蛋白表达量的差异。结果通过细胞活力在不同小干扰RNA(siRNA)序列、不同转染剂量、不同作用时间点的变化,找到其最适转染浓度为10nmol·L-1,最适作用时间为转染后48h。通过RNAi抑制caspase 3基因表达的差异,筛选出最有效序列为caspase 3 siRNA1序列;荧光染色并观察计数表明caspase 3 siRNA的转染效率为93.0%,其干扰效率为63.0%,对caspase3蛋白表达有显著的阻抑效应。Caspase 3 siRNA单独作用于染铝SH-SY5Y细胞,可以显著提高细胞活力,降低其凋亡率;Nec-1单独作用于染铝SH-SY5Y细胞可以显著提高其细胞活力,降低细胞坏死率;共同作用在染铝SH-SY5Y细胞时两者有增强作用,可以显著提高细胞活力,并同时降低SH-SY5Y细胞的凋亡率及坏死率。结论在铝致神经细胞死亡的机制中,除了传统上认为的凋亡和坏死途径外,还有程序性坏死的存在。
- 张勤丽牛侨张玲王亮
- 关键词：程序性坏死半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3细胞死亡
- 程序性坏死在铝致神经母细胞瘤细胞SH－SY5Y死亡中的作用被引量：4
- 2009年
- 目的探讨程序性坏死是否存在于铝诱导的神经母细胞瘤细胞SH—SY5Y的死亡途径中。方法培养SH—SY5Y细胞，并用4mmol／L AlCl3·6H2O染毒制作铝致神经细胞死亡模型，按加入Nec-1剂量不同分别设对照组（0μmol／L）和30、60、90μmol／L组，检测SH-SY5Y细胞的活力、线粒体膜电位、活性氧含量及细胞的凋亡率和坏死率等。结果研究表明，加入Nec-1可以显著改善染铝后的细胞坏死样形态学改变。流式细胞仪检测结果表明，加入不同剂量的Nec-1（30、60、90μmol／L）后其细胞活力分别为0．58±0．03、0．68±0．04、1．03±0．17，与对照组（0．28±0．05）相比，差异有统计学意义（t值分别为3．25、3．36、4．56，P值均〈0．05）。Annexin V—PI双染法测定结果显示，不同剂量Nec-1（30、60、90μmol／L）作用后坏死率分别为10．40％±0．64％、5．43％±0．68％、6．28％±0．35％，与对照组（16．46％±0．54％）相比，差异有统计学意义（t值分别为3．62、7．32、6．96，P值均〈0．05），可以明显降低SH-SY5Y细胞的坏死率，但其作用后SH—SY5Y细胞凋亡率分别为7．66％±0．53％、5．68％±0．41％、4．13％±0．41％，与对照组（8．68％±0．36％）相比，差异无统计学意义（F=6．33，P=0．11）。加入不同剂量Nec-1（30、60、90μmol／L）后，其线粒体膜电位分别为49．42±5．96、84．79±6．86、95．51±7．01，60、90μmol／L剂量组与对照组（67．54±6．36）相比，差异有统计学意义（t值分别为3．21、4．01，P值均〈0．05）。但加入不同剂量的Nec-1（30、60、90μmol／L）后其活性氧含量分别为52．79±2．36、54．68±1．91、59．23±2．96，对照组为54．07±3．32，各组间差异无统计学意义（F=5．26，P=0．19）。结论用程序性坏死的特异阻断剂Nec-1可以有效阻断铝致SH—SY5Y细胞的死亡通路，提示程序性坏死是导致铝神经毒�
- 牛侨张勤丽郑金平刘承芸王亮
- 关键词：细胞死亡铝程序性坏死神经母细胞瘤
