西安市科技计划项目(GG05159)
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- 相关机构：西安交通大学西安交通大学口腔医院更多>>
- 发文基金：西安市科技计划项目陕西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA的基因克隆和序列分析
- 2006年
- 目的:扩增牙龈卟啉菌蛋白酶rgpA催化结构域(rgpAcd)的基因片断并作鉴定。方法:利用PCR方法,克隆牙龈卟啉菌rgpAcd基因,并将基因片断插入pMD18-TVector,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定。结果:克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列一致。结论:成功克隆了牙龈卟啉菌rgpAcd的基因,为体外表达其活性蛋白奠定了基础。
- 许静李昂苟建重许援朝饶国洲谢红帼
- 关键词：蛋白酶克隆核苷酸序列分析牙龈卟啉菌基因克隆催化结构域限制性酶切
- 牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化被引量：6
- 2010年
- 目的克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因,构建原核表达载体,诱导其在大肠杆菌中融合表达,并鉴定、纯化其表达产物。方法克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因,构建表达载体pET15b-FimA,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyS感受态细胞;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,以抗6×HisTag单克隆抗体为一抗,Western blot鉴定、Co2+柱亲和层析纯化融合蛋白。结果克隆的FimA基因序列及插入表达载体中的FimA序列均与GenBank数据库中的序列呈现100%同源性;IPTG诱导后Western blot鉴定4.1×104处有目的蛋白表达;Co2+柱亲和层析法获得纯化的高浓度FimA蛋白。结论本实验成功构建了牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA基因的原核表达载体pET15b-FimA,并在大肠杆菌中获得成功表达和纯化,为进一步制备牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白单克隆抗体和研制开发预防牙周炎的亚单位蛋白疫苗奠定了实验基础。
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- 关键词：牙龈卟啉单胞菌
- 牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的克隆牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),并将其置于大肠杆菌中作融合表达。方法利用PCR技术,克隆GAPDH,插入克隆载体pMD18-T中得到克隆重组子pMD18-T-GAPDH。克隆重组子与表达载体pET-32a双酶切后连接构建表达质粒pET-32a-GAPDH。重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,以不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果核酸序列测定与分析表明:表达重组子pET-32a-GAPDH与NCBI核酸数据库中收录的GAPDH序列同源性达99.802%;在最佳浓度的IPTG诱导下,GAPDH可高效表达。结论本实验成功克隆了牙龈卟啉单胞菌GAPDH基因,并在大肠杆菌中表达了GAPDH蛋白,为后续实验研究GAPDH的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础。
- 李昂徐红艳石建峰朱春晖饶国洲苟建重
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌3-磷酸甘油醛脱氢酶原核表达
