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蝙蝠病毒研究进展: 蝙蝠作为世界上哺乳动物中的第二大类,因其能携带多种人兽共患病毒而在病原生态学上具有重要的意义。蝙蝠种类多、分布广,具有长距离飞翔能力,这些特性使得蝙蝠易于将病毒传播给人类和其他动物,同时蝙蝠冬眠、种群数量大,使得蝙蝠可以...; 何彪涂长春; 关键词：蝙蝠; 文献传递

新城疫病毒V蛋白研究进展: 2013年; 近年来,新城疫病毒(NDV)的感染及致病宿主范围呈现不断扩大的趋势。新城疫病毒V蛋白在病毒抑制干扰素信号转导、防止细胞凋亡的发生、改变宿主细胞周期、阻断双链RNA信号转导和抑制干扰素的生物合成等各种宿主逃逸机制中起着重要作用,并在病毒的致病性和宿主嗜性等方面也发挥了重要作用。基于对新城疫病毒V蛋白研究的深入,论文对新城疫病毒V蛋白的分子特性及其功能性研究做一简要概述。; 阎富龙鲁会军金宁一赵权; 关键词：新城疫病毒

SV40 LT抗原介导的蝙蝠胎儿肾细胞永生化被引量：1: 2014年; 蝙蝠是许多新发人兽共患病病毒的自然储存宿主,由于缺乏蝙蝠细胞系,只能利用其他哺乳动物细胞系来分离蝙蝠病毒,因此成功分离的几率较低。为建立稳定的蝙蝠细胞系,本研究利用胰酶消化法培养东亚水鼠耳蝠(Myotis petax)的胎儿原代肾细胞。利用重组逆转录病毒转导法将SV40 LT抗原基因转导入蝙蝠胎儿原代肾细胞,经嘌呤霉素筛选获得LT基因整合和表达的阳性细胞,并进行连续传代培养。RT-PCR和western blot检测表明转导的细胞中有SV40 LT基因的整合和表达。转导细胞在软琼脂中培养不能够形成克隆,表明其未发生癌性转化。对第33代的转导细胞进行单细胞克隆,获得了3个衍生的细胞系,其中Mp-Ki03细胞系已培养至第60代。病毒感染试验表明蝙蝠西江病毒和蝙蝠轮状病毒均可以感染该转导细胞系。本研究通过SV40 LT抗原建立了永生化的蝙蝠胎儿肾细胞系,并且该细胞系对蝙蝠病毒易感,对分离与鉴定蝙蝠病毒以及研究病毒感染蝙蝠细胞的机制具有重要的作用。; 张思春杨凡力余乐何彪涂长春; 关键词：蝙蝠肾细胞 SV40 永生化

新城疫病毒NP和P基因辅助质粒的构建及鉴定被引量：6: 2014年; 目的构建新城疫病毒JL02/2000株P和NP基因真核表达质粒,并在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。方法根据新城疫病毒(JL02/2000毒株)的全基因组中的NP、P基因分别设计引物,应用RT-PCR方法扩增NP基因和P基因,将扩增的NP基因和P基因片段连接到pMD18-T载体上,限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ酶切鉴定确认后回收目的条带,分别插入到真核表达载体pCI上,经测序确认pCI-NP、pCI-P辅助质粒的构建。将pCI-NP、pCI-P转染BHK-21细胞,两次换液,72h后回收细胞,经RT-PCR检测NP和P基因片段。结果构建的辅助质粒pCI-NP和pCI-P经双酶切和测序鉴定到目的片段。pCI-NP、pCI-P转染后,RT-PCR检测到NP和P基因片段。结论新城疫病毒pCI-NP、pCI-P辅助质粒构建成功,pCI-NP、pCI-P可在BHK-21细胞中表达,为该病毒的反向遗传操作系统的建立奠定了基础。; 陈兴阎富龙徐一鸣赵权肖朋朋郭海宁靖杰辛舒鲁会军金宁一; 关键词：新城疫病毒 NP基因 P基因

细粒棘球绦虫G1型Eg95基因的原核表达及蛋白鉴定被引量：2: 2013年; 根据GenBank发表的细粒棘球绦虫G1型Eg95序列合成Eg95抗原基因(HM345604.1),设计并合成一对引物,采用PCR技术扩增Eg95抗原基因,亚克隆到pET-28a原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达重组蛋白。经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,Eg95抗原蛋白可以在大肠埃希菌中高效表达,表达重组蛋白的分子质量约为16.5ku。Western blot结果表明,该蛋白可与阳性血清发生特异反应,具有很好的反应原性。; 徐丹曹利利魏峰曹利利魏峰杨美英张莹光; 关键词：细粒棘球绦虫 EG95 原核表达 BLOT分析

犬瘟热病毒M蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备: 2014年; 目的对犬瘟热病毒(CDV)弱毒株M基因进行克隆及原核表达,并制备鼠抗CDV M蛋白多克隆抗体。方法针对犬瘟热病毒弱毒株(CDV-LP)的M基因序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,扩增产物克隆至表达载体pET-30a(+)并转化至宿主菌BL21(DE3),在0.4mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化的M蛋白免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后采血,分离血清,制备鼠抗CDV M蛋白多克隆抗体。结果通过RT-PCR成功扩增出大小为1 014bp的CDV M基因,构建的重组质粒pET-30a(+)-M在大肠埃希菌中诱导表达出分子质量单位为43ku的重组M蛋白,与预期值相符;重组蛋白主要以包涵体形式表达,Western blot检测显示M重组蛋白能被抗CDV多克隆抗体识别;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应。结论本研究成功构建了pET-30a(+)-M并表达了CDV M蛋白,制备了鼠多克隆抗体,为建立CDV M蛋白的ELISA抗原检测方法,鉴定表达M蛋白的重组杆状病毒奠定了基础。; 虞一聪闫飞虎王铁成王化磊郑学星赵永坤黄耕杨松涛高玉伟冯娜夏咸柱; 关键词：犬瘟热病毒原核表达 M蛋白 WESTERN BLOT 多克隆抗体

甘肃省首例实验室确诊犬狂犬病疫情流行病学分析被引量：8: 2017年; 采用荧光抗体试验(FAT)对甘肃省1只疑似狂犬病伤人犬进行实验室诊断,结果为狂犬病病毒阳性,流行毒株命名为GSHSD14。采用PCR方法扩增该毒株全长G基因,并上传GenBank(序列号为KT221103)。该毒株与2011年分离自陕西的犬源毒株ShaanxiRa007同源性最高,为99.8%,氨基酸同源性为99.4%。系统进化分析结果表明该毒株属于亚洲1群,同时提示甘肃省狂犬病病例是犬狂犬病流行为主的疫区传播结果,而非临近省份野生动物狂犬病溢出所致。; 许炜迪刘世基李文婧于明洋涂忠忠涂长春张富林冯烨; 关键词：流行病学

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国家重点基础研究发展计划(2012CB722501)