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国家自然科学基金(31070079)
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赵宇华
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Bacillus sp.C3细胞色素P450CYP102A16酶活性研究
2012年
通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp.C3细胞色素P450CYP102A16蛋白;以CYP102A16纯酶为研究对象,系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离子等对该酶活性及其稳定性的影响;用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)消减法测定CYP102A16的酶活性.结果表明:CYP102A16的最适反应温度为35℃,最适反应pH为6.5-7.5,该酶在45℃以下、pH5.0~10.0的范围内稳定;CYP102A16能完全耐受20%二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、30%甲醇、10%乙醇和20%丙酮,经10%乙腈、正丙醇和异丙醇处理后残余酶活性在45%以上,经10%正丁醇处理几乎失活;添加低质量浓度氯代十六烷基吡啶(cetylpyridine chloride,CPC)(0.003-0.02g/L)和聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)(0.1-0.2g/L)可使CYP102A16酶活性分别提高40%和60%左右,而添加低质量浓度十二烷基硫酸钠(sodiumdodecyl sulphate,SDS)(O.004-0.008g/L)对该酶活性无显著影响;1-20mmol/L K^+、20-50mmol/L Na^+、0.05mmol/L Cd^2+对CYP102A16酶活性表现出轻微的促进效应,NH4^+、Ca^2+、Mg^2+、Fe^3+、CO^2+、Mn^2+、Zn^2+、Cu^2+和乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid.EDTA)均能不同程度地抑制CYP102A16的活性,在离子浓度为1-100mmol/L时抑制效应表现为Ca^2+〉Mg^2+〉NH^4+〉EDTA,抑制作用的大小总体上与离子浓度呈正相关.
李泽莉
丁海涛
杨玉义
陈雪娇
赵宇华
周启发
关键词:
细胞色素P450
酶活性
二苯醚降解菌鞘氨醇单胞菌DZ-3的分离及其降解特性
2015年
通过选择性富集从浙江上虞污水处理厂的活性污泥中分离获得2株细菌DZ-3和CZ-3。DZ-3能够以二苯醚为唯一碳源进行生长,CZ-3不能对二苯醚进行降解,但CZ-3和DZ-3的混合培养物能极大地提高对二苯醚的降解效率。对这2株菌进行16SrDNA鉴定,分别隶属于鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)以及苍白杆菌属(Ochrobactrumsp.)。无机盐降解实验表明,DZ-3在6d内对初始质量浓度为835 mg/L的二苯醚的降解率为71%,而混合细菌以2∶3比例接种在4d内的降解率为90%。通过人工神经网络的方法分析无机盐中金属离子对二苯醚降解效率的影响表明,Mg2+对降解的影响最大。在土壤中的降解实验表明,混合细菌在6d内对土壤中二苯醚的降解率能够达到98%。
冯琢
王晟
白娜玲
赵宇华
关键词:
二苯醚
降解细菌
降解率
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