青岛市科技发展计划项目(09-1-1-25-nsh)
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
- 相关作者：李南南陈鹏更多>>
- 相关机构：大连医科大学山东省眼科研究所更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ca^(2+)参与骨髓间充质干细胞存活增殖及向肝细胞的诱导分化被引量：2
- 2013年
- 背景:骨髓间充质干细胞增殖和分化中的具体机制仍不清楚,Ca2+信号、骨髓间充质干细胞增殖与分化信号如何协调和交叉成复杂信号网络等问题仍有待研究阐明。目的:探讨细胞内Ca2+在骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导分化过程中的作用。方法:用全骨髓贴壁法从大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞后进行纯化和扩增,并加入肝细胞生长因子诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化,应用流式细胞技术分别检测肝细胞生长因子诱导分化骨髓间充质干细胞和对照骨髓间充质干细胞内游离[Ca2+]i。将不同浓度的尼莫地平加入肝细胞生长因子诱导的骨髓间充质干细胞(肝细胞生长因子组)培养液中进行干预后分为3组:肝细胞生长因子+尼莫地平10 mg/L组、肝细胞生长因子+尼莫地平50 mg/L组、肝细胞生长因子+尼莫地平100 mg/L组,在倒置相差显微镜下观察细胞生长情况并用免疫细胞化学法检测AAT的表达;并用RT-PCR检测对照组和尼莫地平干预组钙调蛋白mRNA的表达,免疫印迹法检测上述各组磷酸化ERK的表达。结果与结论:①加入肝细胞生长因子诱导分化的骨髓间充质干细胞内[Ca2+]i显著高于对照组(P<0.05)。②加入较大剂量的尼莫地平干预后,未见分化细胞且骨髓间充质干细胞的生长状态差;肝细胞生长因子+尼莫地平各组表达AAT的阳性细胞很少。③与对照组比较,肝细胞生长因子组和肝细胞生长因子+尼莫地平10 mg/L组钙调蛋白mRNA表达显著增加了(P<0.05),肝细胞生长因子+尼莫地平50 mg/L组、肝细胞生长因子+尼莫地平100 mg/L组与对照组比较组间差异无显著性意义(P>0.05)。说明Ca2+不仅参与细胞因子诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的定向分化,而且也参与维持骨髓间充质干细胞的存活和增殖。
- 焦淑贤胡彬赵林刘晓华冯智慧
- 关键词：干细胞骨髓干细胞骨髓间充质干细胞CA2+肝细胞生长因子ERK
- 全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性被引量：16
- 2011年
- 背景:培养出生长状态良好、数量足够多的大鼠骨髓间充质干细胞是其作为种子细胞在组织工程等领域广泛应用的重要前提。目的:寻求快捷有效的大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件,观察培养的间充质干细胞生物学特性。方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,贴壁筛选法进行纯化,倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长特征,免疫荧光分析细胞骨架,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测其表面标记。结果与结论:分离培养的细胞呈长梭形或多边形;细胞生长曲线呈S形;微丝免疫荧光染色结果显示,培养的骨髓间充质干细胞具有良好的细胞骨架系统。第3代骨髓间充质干细胞CD29、CD44、CD71、CD90均呈阳性表达,而CD13、CD34、CD45、CD133呈阴性。提示,经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学和细胞表面标志物表达方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为骨髓间充质干细胞,其第3代活性最佳,可用于后续实验。
- 赵林冯智慧焦淑贤李南南
- 关键词：骨髓间充质干细胞生物学特性
- 与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50对血管内皮细胞增殖、迁移及成管能力的影响
- 2014年
- 目的探讨与膜-细胞骨架连接蛋白家族结合的磷酸化蛋白50(EBP50)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内Akt1磷酸化水平、细胞分泌明胶酶的活性以及细胞骨架表达和分布的影响,阐明其影响人血管内皮细胞增殖、迁移及成管的分子机制。方法构建EBP50的真核重组表达载体,将重组质粒分别稳定转染HUVEC细胞系,经Western blot法验证后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;应用划痕法检测细胞的迁移能力;应用Matrigel法检测细胞的成管能力;应用Western blot检测EBP50对Akt1磷酸化水平的影响;应用明胶酶谱法检测HUVEC细胞分泌的明胶酶活性;应用免疫荧光观察细胞骨架的分布。结果转染的外源性EBP50 cDNA片段已整合到基因组中;与对照组细胞比较,EBP50能显著抑制细胞的增殖、迁移及成管能力,并且EBP50明显下调Akt1的磷酸化水平(t=2.98,P<0.01);同时使HUVEC分泌的MMP2活性下降,并影响血管内皮细胞内细胞骨架的分布。结论EBP50可以抑制HUVEC细胞的增殖、迁移及成管,其机制可能与调整Akt1的磷酸化水平、调节细胞分泌明胶酶的活性及影响微丝细胞骨架分布有关。
- 冯智慧赵林刘晓华焦淑贤陈鹏
- 关键词：内皮细胞细胞增殖迁移
