国家自然科学基金(30770605)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 大鼠脑梗死模型中移植转基因骨髓间充质干细胞后131I-FIAU的生物分布和基因表达的实验研究
- 目的检测经不同途径移植细胞后大鼠脑梗死模型中~(131)I-FIAU的生物分布及脑组织中TK基因的表达,为利用核素报告基因显像无创性监测细胞移植治疗脑梗死提供实验依据。方法制备携带TK-IRES-BDNF基因的腺病毒重组...
- 吴涛安锐郎军涛
- 131I-FIAU／TK报告基因系统监测大鼠脑梗死模型中移植细胞的研究被引量：3
- 2011年
- 目的检测经不同途径移植骨髓间充质干细胞后大鼠脑梗死模型中131I一氟一碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU）的生物分布及脑组织中胸苷激酶（TK）基因的表达，为核素报告基因显像无创性监测细胞移植治疗脑梗死提供实验依据。方法制备携带TK一内部核糖体连接位点一脑源性神经生长因子（IRES—BDNF）基因的腺病毒重组体Ad5一TK—IRES—BDNF一增强型绿色荧光蛋白（EGFP）；线栓法制作大鼠脑梗死模型；将转基因的干细胞分别通过脑实质、侧脑室、颈动脉和尾静脉注射人大鼠脑梗死模型中，以正常大鼠为对照组；Iodogen固相氧化法标记氟·阿糖呋喃基尿嘧啶（FAU）后进行生物分布研究，计算％ID／g；采用实时定量PCR和Westernblot定量分析TK基因的表达；数据分析采用独立样本t检验、单因素方差分析及Pearson相关分析。结果原位移植组梗死侧脑组织中的％ID／g为0．124±0．013，明显高于侧脑室移植组（0．052±0．004）、颈动脉移植组（0．061±0．002）、尾静脉移植组（0．059±0．005）和对照组（0．005±0．001），差异有统计学意义（t=2．913～5．652，P均〈0．05），其他移植细胞组组间差异无统计学意义（￡=0．694—1．448，P均〉0．05）。所有移植细胞组内两侧脑组织％ID／g的差异有统计学意义（f=9．004～15．734，P均〈0．05），而对照组两侧间差异无统计学意义（t=1．511，P=0．182）。此外，原位移植组梗死侧脑组织中TK基因的表达高于其他各组，差异有统计学意义（t=7．482～12．371，P均〈0．05）；且脑组织TK基因表达的相对量与％ID／g呈正相关（r=0．971，P〈0．001）；脑组织内TK／[3一actin的比值与％ID／g呈正相关（r=0．899，P：0．002）。结论原位注射是治疗脑梗死的最佳细胞移植途径；选择适当示踪剂，可利用PET或SPECT进行无创性活体监测细胞移植治疗脑梗死�
- 吴涛安锐张斌青孙逊郎军涛
- 关键词：碘放射性同位素
- 大鼠脑梗死模型中移植转基因骨髓间充质干细胞后的放射自显影研究
- 目的通过放射自显影方法验证活体报告基因显像的可行性,获得最佳的显像条件,并且采用荧光显微镜间接监测细胞移植后的存活情况。方法线栓法制备大鼠脑梗死模型,Iodogen固相氧化法标记FAU,于立体定位仪上进行细胞原位移植,麻...
- 吴涛安锐郎军涛
- 分子影像报告基因系统的研究进展
- 2010年
- 分子影像报告基因系统的应用使基因治疗从实验阶段逐渐走向了临床应用，为无创性监测治疗基因的表达及进行定量分析提供了方法学技术。目前研究最多、最成熟的仍是放射性核素报告基因系统，近年来磁共振报告基因系统和光学报告基因系统的兴起和发展，极大地丰富和完善了分子影像报告基因系统的内容，并且在与应用化学和分子生物学等多学科交叉合作的基础上，涌现出了很多新型的修饰或改良的报告基因和分子探针。该文主要概述各类报告基因系统的优缺点和发展趋势。
- 吴涛安锐
- 关键词：基因分子探针分子影像技术
- 重组质粒pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达
- 2010年
- 目的体外构建携带报告基因胸腺嘧啶核苷激酶(TK)和治疗基因脑源性神经营养因子(BDNF)的重组质粒载体pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF,并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达。方法采用密度梯度离心法分离获得BMSCs,进行细胞免疫化学鉴定;应用PCR技术获得HSV1-TK、内部核糖体进入位点(IRES)、BDNF的cD-NA序列,酶切后依次插入到pcDNA3.1的多克隆位点(MSC)中,酶切和序列分析鉴定;脂质体介导重组质粒pcD-NA3.1-TK-IRES-BDNF转染BMSCs,RT-PCR和Western blot检测其目的基因表达。结果重组质粒pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF经酶切和序列分析鉴定与预期设计一致;RT-PCR和Western blot检测证实TK和BDNF在IRES介导下可同时表达。结论成功构建重组质粒pcDNA3.1-TK-IRES-BDNF并在BMSCs中有效表达,为下一步核素活体示踪转基因BMSCs治疗脑血管疾病奠定了实验基础。
- 张斌青安锐吴涛孙逊
- 关键词：骨髓间充质干细胞报告基因
- 腺病毒载体携带HSV1-TK报告基因感染BMSCs后摄取^(131)I-FIAU的实验研究被引量：2
- 2010年
- 用内部核糖体进入序列(IRES)将报告基因单纯疱疹I型病毒胸苷激酶(HSV1-TK)和治疗基因脑源性神经营养因子(BDNF)连接,双启动子法将TK-IRES-BDNF与增强绿色荧光蛋白(EGFP)包装到重组腺病毒载体中,得到Ad5-TK-IRES-BDNF-EGFP,扩增、纯化、测定病毒滴度;以感染复数(MOI)为0、50、100、150、200、250感染体外培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs),以重组腺病毒Ad5-EGFP为无效对照病毒。荧光显微镜下观察感染细胞的绿色荧光细胞阳性率。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测感染细胞增殖能力。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)诱导感染细胞向神经元细胞分化,显微镜下观察细胞形态变化。实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)和2-△△CT法分析两目的基因的相对表达量(CT)。观察感染细胞对131I-FIAU的摄取情况。重组腺病毒Ad5-TK-IRES-BDNF-EGFP在MOI为150可高效感染BMSCs,感染细胞存活率>98%,且保持良好的神经元细胞诱导分化能力。RQ-PCR检测两目的基因随着腺病毒MOI增加表达增强,且TK和BNDF两基因的表达有良好的线性相关(r=0.973,P<0.05,n=3)。在前3h可见感染目的基因组细胞对131I-FIAU的摄取程度与时间呈正相关,3h感染目的基因组对131I-FIAU摄取率可达(31.42±0.46)%(n=3),随后增加不明显。各点感染目的基因组摄取率均显著高于对照组(t=23.06–173.83,P<0.05,n=3)。重组腺病毒载体能高效、低毒感染BMSCs,IRES介导两目的基因表达有良好的线性相关。本研究表明感染目的基因细胞可有效介导HSV1-TK摄取131I-FIAU,为后续放射性核素报告基因活体显像示踪转基因BMSCs治疗脑梗死提供了细胞水平依据。
- 张斌青吴涛孙逊安锐
- 关键词：报告基因基因治疗腺病毒
