国家自然科学基金(30370663)
- 作品数：7 被引量：34H指数：4
- 相关作者：周巧玲王衍慧刘抗寒杨敬华彭卫生更多>>
- 相关机构：中南大学广州市第一人民医院鹿儿岛大学更多>>
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- 硝苯地平对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制的探讨被引量：4
- 2007年
- 目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）在糖尿病肾病（DN）发病中的作用以及钙离子拮抗剂硝苯地平对肾脏保护作用的机制。方法大鼠随机分为3组：健康对照（N）组、DN组和硝苯地平治疗（T）组，每组10只。采用链脲菌素诱发DN大鼠模型，治疗组以硝苯地平控释片15mg·kg^-1·d^-1干预治疗，治疗第2周和4周，检测大鼠平均动脉压（MAP）、尿蛋白量（24h）、Scr水平；用免疫组化和Western印迹方法检测大鼠肾脏VEGF、MMP-9、TIMP-1的蛋白表达水平；RT-PCR法检测VEGF、MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果与N组比较，DN组大鼠尿蛋白量、Scr水平和MAP均显著上升[分别为（78．87±17．62）比（6．30±1．91）mg／24h、（203．88±18．08）比（84．98±10．09）μmol／L、（141．1±8．7）比（99．8±3．8）mmHg，P均〈0．05]；肾组织VEGF、MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达增强（P〈0．05），且MMP-9／TIMP-1比值明显下降（P〈0．05）。与DN组比较，T组尿蛋白量（24h）[（58．35±10．48）mg]、Scr水平[（165．81±15．86）μmol／L]和MAP[（102．6±4．4）mmHg]均显著下降（P均〈0．05）；肾组织VEGF表达下调（P〈0．05），MMP-9、TIMP-1mRNA和其蛋白表达水平显著增高（分别P〈0．05和P〈0．01），MMP-9／TIMP-1比值显著升高（P〈0．05）。DN大鼠肾组织VEGF mRNA水平与尿蛋白量（24h）呈正相关（r=0．748，P〈0．05），与MMP-9／TIMP-1的比值呈负相关（r=-0．711，P〈0．05）。结论VEGF、MMP-9和TIMP-1可能参与了DN的发病过程，硝苯地平可能通过影响VEGF、MMP-9及TIMP-1的表达而实现对肾脏的保护作用。
- 周巧玲王衍慧刘抗寒杨敬华彭卫生敖翔
- 关键词：糖尿病肾病血管内皮生长因子类基质金属蛋白酶类金属蛋白酶1组织抑制剂钙通道阻滞药
- 高糖对人类肾小球系膜细胞PKC及MMPs/TIMPs的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:研究体外高糖环境下人类肾小球系膜细胞(NHMC)中PKC激活或使用PKC抑制剂干预后MMP2,9/TIMP1,2的表达,探讨PKC与MMPs/TIMPs信号转导在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法:将NHMC分4组:N组(对照组,5mmol/L葡萄糖);H组(高糖组,30mmol/L葡萄糖);P组(抑制剂组,30mmol/L葡萄糖+10-5mol/L白屈菜红碱);M组(甘露醇组,5mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇)。分别于上述4种不同成分培养基中进行细胞培养,第24,48,72h用MTT法测定NHMC增殖;并于培养后第24,48h收集细胞,抽提mRNA及蛋白质,用ELISA方法测定胞膜、胞核蛋白质PKC活性。用RT-PCR和Western印迹方法检测MMP2,9,TIMP1,2mRNA和蛋白质的表达。结果:高糖组细胞膜和胞核部分的PKC活性较对照组明显升高(P<0.01),MMP2,9,TIMP1,2mRNA及蛋白质的表达较对照组明显上升(P<0.01);而MMP-9/TIMP-1,MMP-2/TIMP-2比值较对照组明显下降(P<0.05)。高糖加PKC抑制剂白屈菜红碱后,MMP2,9,TIMP1mRNA及蛋白质表达较对照组明显升高(P<0.01),但MMP9/TIMP1,MMP2/TIMP2比值较高糖组明显升高(分别P<0.05,P<0.01)。PKC活性与MMP-2/TIMP-2及MMP-9/TIMP-1的蛋白质比值均呈负相关(分别r=-0.651,r=-0.702,均P<0.05)。结论:高糖可刺激人类肾小球系膜细胞PKC活化,在DN中PKC活化与MMP2,9/TIMP1,2的表达水平有密切关系。
- 杨敬华周巧玲王衍慧刘抗寒张军
- 关键词：蛋白激酶C金属蛋白酶组织抑制物系膜细胞
- 肝素对人类系膜细胞金属基质蛋白酶1、3表达的影响及其肾保护作用被引量：6
- 2005年
- 目的通过体外高糖(HG)刺激下培养正常人类系膜细胞(NHMC),观察NHMC的增殖同时金属基质蛋白酶(MMP1和MMP3)表达状况及肝素对MMP1和MMP3表达的影响。探讨MMP1和MMP3在DN发病中的作用及肝素对DN的肾保护作用机制。方法将正常人类系膜细胞在高糖或低糖的培养基中进行体外细胞培养并用含有不同肝素浓度的培养液进行干预实验,观察高糖和不同肝素浓度对NHMC增殖的影响;用Westernblotting方法测定高糖对MMP1和MMP3表达的影响及其肝素的干预作用。结果HG刺激NHMC增殖为1.93倍而LG则为1.60倍。当肝素浓度仅为50μg/mL时NHMC增殖开始受到抑制且随着剂量的递增NHMC增殖抑制更明显。HG可刺激NHMC增殖同时使MMP1和MMP3表达;在HG中加入肝素后NHMC中MMP1和MMP3出现高表达。结论高糖能刺激正常人类系膜细胞增殖;肝素具有抑制系膜细胞增殖的作用。高糖在刺激NHMC增殖同时使MMP1和MMP3表达,而肝素在高糖状态下使NHMC中MMP1和MMP3出现高表达。这可能是肝素抗凝作用外的肾脏保护作用机制。
- 周巧玲张阳德保元裕一郎野崎刚
- 关键词：肝素系膜细胞金属基质蛋白酶肾脏保护
- 离子拮抗剂对糖尿病肾病大鼠血管内皮生长因子表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨钙离子拮抗剂拜新同对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及其在DN发病机制中的作用。方法将15只雄性Wistar大鼠按体质量、月龄随机趋组分为正常对照组(n=5)、DN组(n=5)和拜新同组(n=5)。DN组和拜新同采用STZ诱导复制DN模型大鼠,拜新同组DN模型大鼠给予拜新同15 mg/(kg·d)灌胃,1次/d。4周后应用免疫组织化学法分别测定3组大鼠肾脏组织VEGF表达水平、VEGF mRNA表达水平及血清肌酐含量。结果4周后免疫组织化学法测定结果显示DN组VEGF表达水平显著高于拜新同组和正常对照组(P<0.05);RT-PCR显示DN组VEGF mRNA表达水平显著高于正常对照组和拜新同组,差别有统计学意义(P<0.05);DN组血清肌酐含量显著高于正常对照组和拜新同组(P<0.05);DN组大鼠肾脏VEGF mRNA表达水平与血清肌酐量呈明显正相关(r=0.82,P<0.001)。结论 VEGF参与大鼠糖尿病肾病发生、发展的病生理过程;钙离子拮抗剂拜新同对VEGF介导的糖尿病肾病有一定的保护作用。
- 王衍慧周巧玲黄玉宇
- 关键词：糖尿病肾病钙离子拮抗剂
- 缬沙坦联合阿托伐他汀治疗早期糖尿病肾病临床对照研究被引量：6
- 2013年
- 目的 探讨缬沙坦联合阿托伐他汀治疗早期糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）的临床疗效及安全性.方法 本院收治的87例早期DN患者随机分为对照组45例和试验组42例.对照组给予缬沙坦80mg/d口服,试验组在对照组的基础上给予阿托伐他汀20mg/d口服.治疗16周后,比较两组患者血清肌酐（Scr）、血清丙二醛（MDA）、C反应蛋白（CRP）、尿蛋白排泄率（UAER）及肾小球滤过率（GFR）等各项临床指标情况及不良反应有无差别.结果 81例患者完成既定治疗方案并获随访,治疗后两组患者血清肌Ser、MDA、CRP及UAER较治疗前均明显下降（P＜0.05）；但试验组下降更为显著（P＜0.05）；治疗后两组患者GFR无明显变化（P＞0.05）；两组患者血清CRP下降水平与UAER下降水平呈正相关（rspearson=0.61,P＜0.05）.两组患者治疗期间不良反应发生率无明显差别（P＞0.05）.结论 缬沙坦联合阿托伐他汀治疗早期DN的临床疗效均优于单用缬沙坦,且联合应用不增加患者不良反应发生风险.
- 王衍慧周巧玲黄玉宇
- 关键词：糖尿病肾病
- 金属基质蛋白酶9及其组织抑制物1在肾组织中的表达和调控被引量：8
- 2007年
- 目的:观察STZ鼠肾组织及高糖状态下正常人类系膜细胞(NHMC)中金属基质蛋白酶9(MMP-9)、金属基质蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)表达状况及磷酸肌酸激酶(PKC)抑制剂对其表达的影响,探讨糖尿病肾病(DN)时PKC抑制剂在细胞外基质降解中的作用。方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、DN模型组、PKC抑制剂组。PKC抑制剂组采用根皮素10mg/(kg.d)混悬液灌胃进行干预。第8周处死大鼠(每组6只)。检测24h尿蛋白定量、血肌酐水平。用免疫组化方法检测肾脏组织MMP-9、TIMP-1的表达。用ELISA方法检测肾脏组织PKC活性。体外实验,将NHMC置37℃,5%CO2培养箱中进行培养。并将NHMC分为N组(对照组):糖浓度5mmol/L,H组(高糖组):糖浓度30mmol/L,P组(高糖加PKC抑制剂):糖浓度30mmol/L加chelery thrine chloride 10-5mmol/L,M组(甘露醇组):甘露醇30mmol/L。于培养24、48、72h后用MTT法测定细胞增值。采用ELISA方法检测四组PKC活性。分别用RT-PCR及Western Blot检测各组MMP-9、TIMP-1mRNA及蛋白表达。结果:DN模型组尿蛋白排泄明显增加(P<0.01),血肌酐上升(P<0.05),PKC活性明显增高,MMP-9和TIMP-1出现表达,MMP-9/TIMP-1比值降低。PKC抑制剂干预后其尿蛋白排泄明显减少,血肌酐水平降低,PKC活性下降,MMP-9、TIMP-1表达上调,其MMP-9/TIMP-1比值增高。体外实验中,高糖能促进NHMC增殖,且NHMC的增殖状况随时间的递增而明显增加。高糖(30mmol/L)能增加系膜细胞PKC的活性,MMP-9、TIMP-1较高表达,MMP-9/TIMP-1比值降低。而PKC抑制剂使PKC的活性降低同时,MMP-9、TIMP-1表达上调,MMP-9/TIMP-1比值增高。结论:高糖可诱导PKC活性,PKC抑制剂能使MMP-9、TIMP-1表达上调,MMP-9/TIMP-1表达比值升高,推测PKC的活性状况可影响DN细胞外基质降解过程。
- 周巧玲杨敬华彭卫生王衍慧刘抗寒
- 关键词：糖尿病肾病金属基质蛋白酶9
- 高糖对系膜细胞金属蛋白酶表达的影响及肝素的干预作用被引量：3
- 2004年
- 目的：研究高糖对正常人类系膜细胞(NHMC)增殖及金属蛋白酶2(MMP2)和金属蛋白酶。(MMP9)表达的影响及肝素对其的干预作用。方法：NHMC在含和(或)小含肝索的高糖培养基中培养，以正常糖培养基作对照。采用WST-1法测定NHMC增殖状况；用western Blot技术分析MMP2、MMP9表达情况。结果：高糖组NHMC增殖明显高于对照组，二组问有显著性差异(P<0.05)。用肝素十预后，高糖组肝素浓度为50μg/ml时，NHMC增殖开始受到抑制，且随着肝素浓度递增，NHMC增殖抑制更明显(肝素50～400μg／ml各浓度组与未加肝素组比较，均P<0．05或P<0.01)。而对照组肝素浓度为200μg／ml时，NHMC增殖才出现抑制(肝素200～40μg／ml组与未加肝素组比较，均P<0.05)。另外，高糖与对照组NHMC均有一定量MMP2、MMP9表达，加入肝素后MMP2、MMP9出现高表达，特别是在高糖组尤为明显。结论：肝素能抑制高糖刺激下NHMC增殖并能使体外NHMC中的MMP2、MMP9出现高表达，推测MMPs町能参与了高糖状态下NHMC的细胞外基质的降解过程并且肝素有肾保护作用。
- 周巧玲保元裕一郎塚本 雅俊野畸刚曾我部 笃原田幸治有馬 晖勝
- 关键词：高糖系膜细胞金属蛋白酶肝素
