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禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：20: 2007年; 为建立禽呼肠孤病毒（ARV）实时荧光定量RT-PCR检测方法，将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体，重组质粒经筛选、鉴定、SalⅠ单酶切，得到线性化转录模板DNA，将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板，用于标准曲线的制定。根据S1基因σC结构蛋白基因保守区域序列设计了1对特异性引物，以体外转录的RNA作为标准品，应用SYBRGreenI染料法建立了检测ARV的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。特异性、敏感性和重复性试验结果表明，制作的标准曲线定量浓度范围宽，比常规的RT-PCR敏感1×10^3倍，可检测到5．2×10^2个拷贝的标准品RNA，与NDV、IBDV、MG均不反应；从攻毒鸡的关节组织中可以检测到病毒，病毒含量为1×10^5～1×10^7个拷贝／μL.表明，建立的实时荧光定量RT-PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点，可用于ARV的检测。; 童桂香谢芝勋黄琦文艳玲谢丽基庞耀珊刘加波邓显文; 关键词：禽呼肠孤病毒体外转录 SYBR 荧光定量RT-PCR

禽呼肠孤病毒δNS和P17非结构蛋白作为ELISA鉴别诊断抗原的研究: 采用已构建好的PGEX-4T-1-δNS和PGEX-4T-1-P17质粒,原核表达了禽呼肠孤病毒(ARV)的两个非结构蛋白δNS和P17,将这两个蛋白进行包涵体纯化后作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最...; 谢芝勋秦春香谢丽基刘加波庞耀珊邓显文谢志勤; 关键词：禽呼肠孤病毒原核表达间接ELISA; 文献传递

利用σ3和σ2重组蛋白检测禽呼肠孤病毒抗体ELISA的建立被引量：9: 2009年; 将纯化好的两个ARV结构蛋白σ3和σ2作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9.5、12.0μg/mL;一抗血清的稀释度为1∶200;HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1∶5000,初步建立了能检测ARV抗体的σ3-ELISA、σ2-ELISA以及σ3、σ2两个蛋白同时包被的σ3-σ2-ELISA检测方法。分别用上述3种方法对制备的ARV SPF鸡阳性血清进行检测,结果阳性检出率分别为90.91%、69.70%和100%。表明σ3-σ2-ELISA方法在ARV抗体检测方面具有较高的敏感性。; 秦春香谢芝勋谢丽基刘加波庞耀珊邓显文谢志勤; 关键词：禽呼肠孤病毒结构蛋白间接ELISA

禽呼肠孤病毒分离株σ2蛋白基因克隆及序列分析被引量：1: 2010年; 为了解禽呼肠孤病毒(ARV)广西分离株与常用疫苗株在基因水平上的差异,将从广西某鸡场分离获得的2株ARV(R1、R2)分离株的σ2蛋白基因经RT-PCR扩增后,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α,重组质粒经PCR、双酶切鉴定及序列分析。结果表明,2株ARV分离株的σ2蛋白基因已成功克隆到质粒载体上;经序列分析发现,2株ARV分离株与ARV标准株S1133的核苷酸同源性分别高达99.2%和99.3%,其推导的氨基酸同源性分别高达98.1%和98.4%;两分离株间的核苷酸同源性为99.7%,其推导的氨基酸同源性为98.5%,具有很高的同源性。; 谢志勤谢芝勋邓显文宋杨温娟刘加波庞耀珊谢丽基蓝如束张振荣黄海强; 关键词：禽呼肠孤病毒分离株

一种酵母细胞生长现象的实时单细胞拉曼光谱观察被引量：10: 2007年; 用拉曼镊子观察单个即发活性干酵母(Saccharomy cescerevisiae)细胞在2.0%葡萄糖溶液中的活化过程,收集其拉曼光谱。结果发现,在某一批次的产品中,酵母细胞的1364cm-1峰强度随着细胞的活化而显著增加,531cm-1、652cm-1、1053cm-1等源自葡萄糖或葡萄糖基的信号峰也会随细胞的生长而增强,随后增强的还有1432cm-1、1448cm-1、1561cm-1等源自脂类物质的峰,而源自蛋白质及脂类的1000cm-1、1445cm-1、1655cm-1等峰的信号强度基本不变,酵母细胞代谢活跃的标志峰1603cm-1也基本不变。该批次产品中,10次实验有7次观察到上述现象,而在别的批次产品中并没有观察到该现象。用单细胞拉曼光谱实时记录了这一特殊的生长现象。; 王桂文姚辉璐彭立新何碧娟黎永青; 关键词：面包酵母拉曼光谱单细胞分析

禽呼肠孤病毒感染禽和疫苗免疫禽ELISA鉴别方法的建立: 采用已构建好的PGEX-4T-1-δNS和PGEX-4T-1-P17质粒,原核表达了禽呼肠孤病毒(ARV)的两个非结构蛋白δNS和P17,将这两个蛋白进行包涵体纯化后作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最...; 谢芝勋秦春香谢丽基刘加波庞耀珊邓显文谢志勤; 关键词：禽呼肠孤病毒原核表达间接ELISA; 文献传递

禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立: 为建立禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法,将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,SalⅠ单酶切得到线性化转录模板DNA,体外转录出RNA,梯度稀释作为阳性模板,用于标准曲线的制定...; 童桂香谢芝勋黄琦文艳玲谢丽基庞耀珊刘加波邓显文; 关键词：禽呼肠孤病毒体外转录荧光定量RT-PCR; 文献传递

禽呼肠孤病毒δ3和δ2重组蛋白作为ELISA检测抗原的研究: 将纯化好的两个ARV结构蛋白δ和δ作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9.5μg/mL和12.0μg/mL;一抗血清的稀释度为1:200;HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1:5000。...; 秦春香谢芝勋谢丽基刘加波庞耀珊邓显文谢志勤; 关键词：禽呼肠孤病毒结构蛋白间接ELISA; 文献传递

禽呼肠病毒3个编码蛋白的基因密码子偏爱性分析被引量：2: 2007年; 应用EMBOSS的CHIPS和CUSP程序对禽呼肠病毒(ARV)3个编码蛋白的基因密码子偏爱性进行分析,其结果与大肠埃希菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比较。结果显示,ARVσC、ARVσB和ARVσNS的Nc(Effective number of condons)值为56.689、56.457和51.532。3种蛋白的部分编码密码子使用频率有较大的差异,其与大肠埃希菌、酵母及人的密码子偏爱性也有不同,表明ARVσC和ARVσNS的密码子与原核生物及人的相差较大,其表达系统选择在酵母较为合适,而ARVσB的密码子与原核生物较近,其表达系统选择在大肠埃希菌较为合适。; 谢丽基谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文; 关键词：禽呼肠病毒密码子

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广西壮族自治区自然科学基金(0542034)