黑龙江省普通高等学校新世纪优秀人才培养计划(1251-NCET-005)
- 作品数：4 被引量：14H指数：3
- 相关作者：赵凯孙立新周东坡刘丹王旋更多>>
- 相关机构：黑龙江大学黑龙江省农业科学院教育部更多>>
- 发文基金：黑龙江省普通高等学校新世纪优秀人才培养计划国家自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 高产紫杉醇菌株的诱变选育及其差异表达基因消减cDNA文库的构建被引量：8
- 2011年
- 【目的】选育高产紫杉醇菌株,并构建选育到的高产紫杉醇菌株与出发菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库。【方法】分别采用硫酸二乙酯和紫外线与硫酸二乙酯复合诱变处理菌株HD1-3孢子;以选育到的高产紫杉醇菌株为tester,菌株HD1-3为driver,应用抑制性消减杂交技术构建选育到的高产紫杉醇菌株与菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库。【结果】试验确定的Nodulisporium sylviforme紫杉醇产生菌HD1-3孢子复合诱变的适宜条件为:将106 cfu/mL孢子悬液经过8%硫酸二乙酯处理15 min后,在电磁搅拌下,用紫外灯(30 w,距离30 cm)照射处理45 s,获得了1株遗传性状稳定、高产紫杉醇的突变株——UD14-11,其紫杉醇产量从出发菌株HD1-3的232.73±4.61μg/L提高至312.81±7.51μg/L;构建的文库滴度为1.2×107 cfu/mL,阳性克隆率75.3%,片段大小主要集中在300 bp-1.0 kb。【结论】选育到了1株遗传性状稳定、高产紫杉醇突变株;成功地构建了高产紫杉醇菌株UD14-11与菌株HD1-3差异表达的cDNA消减文库,为寻找、分离微生物生物合成紫杉醇相关基因和利用基因工程或代谢工程手段定向设计改造菌株奠定基础。
- 赵凯孙立新王旋李秀凉王歆周东坡
- 关键词：紫杉醇内生真菌诱变育种抑制性消减杂交CDNA文库
- 抗紫杉醇单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2012年
- 目的:制备抗紫杉醇单克隆抗体并建立间接ELISA检测方法。方法:用琥珀酸酐法将紫杉醇(taxol)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制成全抗原taxol-BSA,采用紫外波长扫描法和薄层层析检测法对合成抗原进行鉴定;以taxol-BSA免疫Blab/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定;用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化腹水。同时,对间接ELISA法反应条件进行了优化。结果:获得了3株能稳定分泌抗紫杉醇单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为taxol-A1,taxol-A2和taxol-A3;taxol-A3株腹水效价为1∶128 000,属于IgG2b亚型;建立的间接ELISA法检测条件为15μg.mL-1抗原、4℃包被过夜、1%BSA封闭1 h,PBS做抗体稀释液,单抗反应时间为30 min,酶标二抗作用时间1 h,10%浓硫酸终止反应。结论:获得了特异性的抗紫杉醇单克隆抗体并建立了间接ELISA检测方法。本研究制备的抗紫杉醇单克隆抗体及建立的间接ELISA检测方法,为从内生真菌生物合成紫杉醇发酵液中迅速、高效地分离纯化和检测紫杉醇奠定了基础。
- 赵凯孙立新孙宇石周东坡
- 关键词：紫杉醇内生真菌酶联免疫吸附试验
- 紫杉烷-2α-羟化酶基因的克隆及分析
- 2014年
- 本试验成功克隆到了紫杉烷-2α-羟化酶基因,并将该基因与载体pEASY-T1连接,转化到E.coli DH5α中,并对阳性克隆子进行了测序及生物信息学分析。试验结果表明,紫杉烷-2α-羟化酶基因长度为1 488 bp,与GenBank中收录的紫杉烷-2α-羟化酶基因同源性达到99%。本试验研究为从N.sylviforme内生真菌紫杉醇生物合成途径中克隆关键酶基因提供了借鉴。
- 张悦刘丹赵春玲赵凯
- 关键词：东北红豆杉紫杉醇生物合成
- 紫杉醇诱导凋亡的信号传导通路及与凋亡相关的基因和蛋白被引量：3
- 2013年
- 紫杉醇对临床多种恶性肿瘤都有疗效,并具广阔的市场应用前景,其抗癌机制是致使肿瘤细胞发生细胞周期阻滞而凋亡。作者结合课题组多年来的研究,对紫杉醇诱导凋亡过程中的信号通路、相关基因及蛋白进行介绍,包括微生物发酵生产紫杉醇的基因、细胞周期蛋白、端粒酶等。
- 刘丹康宏孙传真肖野赵凯
- 关键词：紫杉醇信号传导凋亡基因
