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JS/1/97/Go株GPMV NP基因的克隆、序列分析: 2005年; 根据GenBank中发表的GPMV SF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物,采用RT_PCR扩增出与预期设计的1470 bp大小相符的片断,将此扩增产物克隆入PMD18_T载体,进行序列测定和分析。结果表明:所扩增的NP基因的核苷酸长为1 470 bp,共编码490个氨基酸。同源性分析表明:JS/1/97/Go与国内的SF02株的NP基因核苷酸同源性为98.6%,氨基酸同源性为99.6%。由此可见,鹅副粘病毒JS/1/97/Go分离株与SF02株的亲缘关系较近,同属于新城疫Ⅶ型基因。而其与LaSota株的核苷酸同源性为85.2%,氨基酸同源性为90.8%。说明该毒株相对于经典的NDV在NP基因上已发生了较大的变异。; 杨玉菊王君伟杨志何海娟; 关键词：鹅副粘病毒核蛋白基因

鹅副黏病毒NP蛋白间接ELISA检测方法的建立及免疫鹅抗体水平的检测被引量：2: 2007年; 以纯化的鹅副黏病毒NP蛋白为包被抗原,建立了检测鹅副黏病毒NP蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件:抗原包被浓度为1.0μg/mL,血清稀释度为1∶200,兔抗鹅IgG辣根过氧化物酶标记抗体稀释度为1∶2 000,抗原和血清、血清和二抗均于37℃反应1 h,底物于37℃显色15 min。此间接ELISA方法的特异性强、重复性好。应用该方法对试验鹅血清进行检测,以HI试验为参照。经统计学处理后,比较了两方法测得的抗体效价,分别建立了各组鹅群的回归方程。显著性检验证明,这两种方法检测的抗体效价呈显著相关关系。; 周丽藏玉婷王君伟; 关键词：鹅副黏病毒 NP蛋白间接ELISA

鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化被引量：8: 2004年; 将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。; 贺云霞王君伟王立群Ulrich Neumann; 关键词：鹅细小病毒 VP2基因原核表达纯化

鹅副粘病毒NP基因的原核表达及表达产物抗原性检测被引量：1: 2005年; 根据GenBank中发表的GPMVSF02株的NP基因的核苷酸序列设计合成一对引物,通过RT-PCR扩增JS/1/97/Go株的NP基因,将其克隆入pMD18-T载体,序列测定和分析表明:所扩增的NP基因的核苷酸长为1470bp,共编码490个氨基酸。再将NP基因定向亚克隆至原核表达载体pGEX-6P的多克隆位点,经酶切鉴定后将含有NP基因的阳性亚克隆重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用诱导剂IPTG分别以不同的浓度进行诱导,并在不同的诱导时间进行采样,样品经处理后通过SDS-PAGE、Westernblot和Dot-ELISA进行分析。结果显示:以终浓度为1mmol/LIPTG进行诱导4h表达可达到高峰,表达的融合蛋白大小约为80kD,并具有良好的抗原性。; 杨玉菊王君伟李曦杨志何海娟; 关键词：鹅副粘病毒 NP基因克隆原核表达

鹅源新城疫病毒HN基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性检测被引量：2: 2010年; 血凝素-神经氨酸酶蛋白(Haemagglutinin Neuramindase,HN)是鹅源新城疫病毒诱导体液免疫的重要靶抗原。经pMD18-T-HN阳性质粒扩增了HN基因,扩增的片段亚克隆到转座载体pFastHTb中构建重组转座载体pFastHTb-HN。将其转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组杆粒rBacmid-HN,重组杆粒rBacmid-HN转染sf9昆虫细胞,收获的重组病毒盲传两代。PCR鉴定重组病毒,获得的重组杆状病毒命名为rBv-HN。经间接免疫荧光(IFA)和SDS-PAGE鉴定,获得的重组杆状病毒rBv-HN在sf9昆虫细胞中获得表达,且表达的蛋白大小为75ku左右,与理论值相当。Western blot和Dot-ELISA检测结果表明,表达的蛋白可与鸡抗NDV血清发生特异性抗原反应,证实所表达的蛋白具有良好的反应原性。; 杨雪晶鞠环宇高明春马波王君伟; 关键词：HN基因 BAC BAC 抗原性

鹅细小病毒NS2蛋白间接ELISA方法的建立被引量：4: 2010年; 为建立检测鹅细小病毒(GPV)的间接ELISA方法,本研究表达了GPV重组NS2蛋白,并以Ni-NTA亲和层析柱纯化的蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA检测方法,并进行抗体消长规律的检测。用该方法检测阴性血清样本30份,确定检测临界值为0.281。与琼脂扩散试验结果的阳性符合率为100%,阴性符合率为86.67%。与抗鹅H5、H7、H9亚型禽流感病毒阳性血清和抗鹅副粘病毒阳性血清无交叉反应。在此基础上组装检测试剂盒,试剂盒批内变异系数为4.2%,批间变异系数为8.3%,包被抗原的酶标板在4℃可保存6个月。该方法对人工感染GPV血清检测结果表明,接种病毒后第8周,NS2蛋白的抗体水平达到峰值。本研究为GPV流行病学调查提供了一种快速、方便、敏感的抗体检测方法。; 尚绪增张雅为王兆鹏鞠环宇马波王君伟; 关键词：小鹅瘟间接ELISA

鹅副粘病毒HN基因在昆虫杆状系统表达及其抗原性鉴定: 2008年; 血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)是鹅副粘病毒诱导体液免疫的重要靶抗原。经pMD18-T-HN阳性质粒扩增了HN基因,亚克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A,并将其与线性化的杆状病毒共转染对数生长期的sf 9细胞,得到重组杆状病毒rBv-HN,试验表明,HN在昆虫细胞中得到表达,且产物具有抗原性。; 藏玉婷周丽姜亦飞王君伟; 关键词：鹅副粘病毒 HN基因抗原性

鹅细小病毒分子生物学研究进展被引量：8: 2002年; 本文根据国内外鹅细小病毒的研究结果,对鹅细小病毒在分类学地位、基因组结构、基因组的转录和调节、基因编码蛋白、与番鸭细小病毒的关系等方面进行综述,为鹅细小病毒的进一步研究提供参考。; 田丽红王君伟贾永清; 关键词：鹅细小病毒分子生物学基因组结构基因编码蛋白

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黑龙江省“十五”科技攻关项目(GB01B503-02)