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组织芯片技术检测人睾丸基因TDRG1在睾丸肿瘤组织中的表达被引量：3: 2010年; 目的:探讨人睾丸基因TDRG1在睾丸肿瘤组织中的蛋白表达及其病理学意义。方法:运用组织芯片技术、免疫组化法检测人睾丸特异基因TDRG1在睾丸肿瘤组织和正常睾丸组织中的表达。结果:15例正常人睾丸对照组中11例(73.3%)TDRG1蛋白表达为阳性;26例精原细胞瘤中7例(26.9%)TDRG1蛋白表达为阳性,7例畸胎瘤中4例(57.1%)TDRG1蛋白表达为阳性。而12例胚胎癌中10例(83.3%)TDRG1蛋白表达为阳性,10例卵黄囊瘤中8例(80.0%)TDRG1蛋白表达为阳性。精原细胞瘤实验组与正常人睾丸对照组相比较,两组间具有极显著性差异(P<0.01)。畸胎瘤实验组与正常人睾丸对照组相比较,两组间具有显著性差异(P<0.05)。而胚胎癌组和卵黄囊瘤组与正常人睾丸对照组相比较,没有显著性差异(P>0.05)。结论:TDRG1蛋白在精原细胞瘤和畸胎瘤的表达水平较正常对照睾丸组织显著降低,TDRG1可能为候选的抑癌基因。; 陈厚仰文甲明肖小旺李东杰郭小亮龙智戴英波汤育新; 关键词：睾丸肿瘤组织芯片免疫组织化学

利用电子差异展示方法克隆人类睾丸特异性新基因被引量：3: 2009年; 目的克隆一个新的人睾丸特异性基因。方法运用电子差异展示方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群Hs.180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达。然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发,采用生物信息学方法克隆一个人类新基因的全长cDNA序列。结果新基因全长1197bp,开放阅读框为504～806bp,定位于6p21.1-p21.2,编码由100个氨基酸组成,相对分子质量为10000,等电点为6.81的一个蛋白,该蛋白与已知蛋白无同源性。克隆实验验证该基因阅读框完全正确,推测其可能与精子生成相关,暂命名为TDRG1(testis development related gene1),GenBank登录号为DQ168992。结论电子差异展示方法与实验验证相结合用于发现人类功能新基因是行之有效的。; 尹光明阳建福蒋先镇汤育新何乐业蒋志强钟狂飙曾青; 关键词：基因克隆睾丸组织特异表达

人类睾丸基因TDRG1在不同物种间同源序列的克隆及分析被引量：2: 2009年; 目的克隆人类睾丸特异基因TDRG1在不同物种间的同源序列,为研究该基因功能寻找动物模型。方法以人TDRG1基因全长序列作为查询序列,利用BLASTN软件检索小鼠、大鼠、黑猩猩和猕猴基因组数据库,查询到的同源序列运用RT-PCR实验验证。免疫组化染色初探TDRG1同源蛋白在不同物种间的表达。结果生物信息学分析表明小鼠和大鼠基因组中未检索到与TDRG1同源的序列,黑猩猩和猕猴基因组中分别有相似性为98%和90%的同源序列存在。RT-PCR验证了猕猴睾丸中的同源序列,免疫组化结果显示抗人TDRG1单克隆抗体能特异结合猕猴睾丸中的同源蛋白。RT-PCR和免疫组化染色也表明小鼠和大鼠睾丸中无同源序列和同源蛋白表达。结论 TDRG1基因在小鼠和大鼠睾丸中无同源基因表达,而在猕猴和黑猩猩睾丸中有同源基因表达,为今后建立动物模型提供了理论依据。; 蒋先镇文甲明汤育新陈厚仰阳建福尹光明汤进刘志中; 关键词：睾丸序列同源性克隆分子

SMART技术构建恒河猴睾丸组织全长cDNA文库被引量：1: 2009年; 目的运用SMART技术构建恒河猴睾丸组织全长cDNA文库。方法提取恒河猴睾丸组织总RNA并分离出mRNA,用clontech公司SMART^(TM)cDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得全长cDNA双链;经SfiI酶切、层析柱分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB连接后电转化及铺板,建成原始文库。结果经鉴定,原始文库为2.5×10~6个重组子,扩增后文库滴度为4.5×10~9CFU/mL。重组率为100%,平均插入片段为1.6kb。结论已构建文库质量较高,为进一步筛选、克隆睾丸特异表达基因奠定了基础。; 陈厚仰汤育新文甲明尹光明刘志中肖小旺; 关键词：恒河猴睾丸基因文库 SMART技术

精索静脉曲张所致的睾丸及精液指标的异常(英文)被引量：9: 2012年; 目的分析精索静脉曲张患者睾丸及精液指标的变化,探讨其对于男性生殖功能的影响。方法回顾分析2003年以来在我院诊治的172例精索静脉曲张患者的资料,阴囊超声检测患者双侧睾丸的体积。收集167例患者的精液标本进行分析,同时收集163例青年健康志愿者的精液分析资料作为对照组。结果所有患者均存在左侧精索静脉曲张,其中63例为双侧精索静脉曲张,但大多数左侧精索静脉曲张的临床分级均高于右侧。患者左侧睾丸体积平均为(10.99±3.71)ml,右侧睾丸体积平均为(11.86±4.05)ml,左侧睾丸体积明显小于右侧(P<0.01)。与对照组比较,患者精液的理化指标(包括精子密度)无显著差异(P>0.05),但大多数患者的精子活力和活率均显著低于对照组(P<0.05)。单、双侧精索静脉曲张患者的精子密度、活力和活率无统计学差异(P>0.05)。结论精索静脉曲张可导致睾丸体积缩小。单侧精索静脉曲张可同时对双侧睾丸产生影响,并导致睾丸功能受损。精索静脉曲张导致男性睾丸功能受损,主要表现为患者精子活力和活率的下降。; 薛娟阳建福严谨蒋先镇何乐业伍拓郭军华; 关键词：精索静脉曲张睾丸不育

人睾丸特异表达基因TDRG1单克隆抗体的制备及鉴定被引量：7: 2010年; 目的:构建原核质粒表达TDRG1重组蛋白,制备其单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性。方法:用逆转录聚合酶链反应法从成人睾丸组织中扩增TDRG1编码序列,将其克隆到pET21原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达TDRG1重组蛋白。以纯化后的重组蛋白免疫BALB/C小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体(mAb)。ELISA法检测杂交瘤细胞分泌mAb的效价和类型,Western印迹和免疫组织化学染色鉴定mAb的特异性。结果:成功构建了pET21/TDRG1原核表达质粒并获得纯度较高的重组蛋白。筛选出2株能稳定分泌抗TDRG1的单克隆抗体杂交瘤细胞系,其效价比高达1∶1.6×106,免疫球蛋白类型均为IgG1类。Western印迹和免疫组织化学染色显示该mAb能特异结合成人睾丸组织中的TDRG1蛋白。结论:所获得的重组TDRG1蛋白纯度高,免疫抗原性强,并成功制备了抗TDRG1的单克隆抗体。; 文甲明蒋先镇汤育新阳建福陈厚仰刘志中; 关键词：单克隆抗体

人睾丸特异表达基因TDRG1 shRNA表达载体的构建及其表达被引量：1: 2012年; 目的:构建人睾丸基因TDRG1的shRNA表达质粒,并研究其在NTERA-2细胞中的表达。方法:设计合成有短发夹结构靶位TDRG1基因的寡核苷酸,经退火成双链,克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中,构建TDRG1shRNA表达载体,得到重组质粒TDRG1-shRNA486,TDRG1-shRNA738,TDRG1-shRNA921和一个阴性对照,使用Lipofectamine 2000转染shRNA至NTERA-2细胞,应用RT-PCR法检测转染后NTERA-2细胞TDRG1 mRNA的表达水平。结果:经测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。同时筛选到转染TDRG1-shRNA486的NTERA-2细胞TDRG1基因的mRNA表达水平明显抑制。结论:成功构建了人类睾丸基因TDRG1的shRNA表达载体,TDRG1-shRNA在NTERA-2细胞内成功表达。; 彭圣林阳建福陈厚仰郭小亮李东杰周华波甘宇蒋先镇汤育新; 关键词：RNAI SHRNA

人睾丸基因TDRG1重组真核载体的构建及其表达被引量：1: 2010年; 目的构建人睾丸基因TDRGl的真核表达质粒,并研究其表达。方法取人新鲜正常睾丸组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶联链反应(RT-PCR)扩增TDRG1基因编码序列;将该基因克隆到真核表达载体pYD5中,构建真核细胞表达载体pYD5-TDRG1,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的重组质粒pYD5-TDRG1在脂质体介导下转染293细胞,间接免疫荧光法和Western Blot法鉴定目的蛋白质的表达。结果 RT-PCR扩增出TDRG1基因编码序列,目的插入片段长约303bp;产物行限制性内切酶酶切后连接到真核表达载体pYD5,重组质粒pYD5-TDRG1经酶切及DNA测序鉴定构建成功;该质粒转染293细胞48h后在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,阳性细胞率96.42%;行Western blot分析检测到约39.8kD的目的蛋白表达。结论成功构建了人类睾丸基因TDRG1的真核表达载体pYD5-TDRG1,TDRG1基因在293细胞内成功表达。; 汤育新蒋先镇文甲明陈厚仰阳建福肖小旺戴英波; 关键词：克隆真核载体基因转染

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国家自然科学基金(30672090)

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