国家自然科学基金(31100658)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：陈叙李素一林晨韬柯翎吴唯维更多>>
- 相关机构：福建省农业科学院福建师范大学福建农林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 嗜水气单胞菌外膜蛋白基因DNA疫苗载体的构建及分析被引量：4
- 2013年
- 为构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗载体,根据已发表的该菌外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR技术,扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因,并插入到真核表达载体pcDNA3上,构建成DNA疫苗,命名为pcDNA3-POMP。以纯化的原核表达蛋白GST-POMP免疫SD大鼠制备抗血清,用ELISA测定抗体效价达到1∶100 000以上;用pcDNA3-POMP质粒转染293细胞,转染48h后收集细胞,提取细胞的RNA进行RT-PCR,检测到外源基因的表达。至此,初步完成嗜水气单胞菌DNA疫苗表达载体的构建,为进一步疫苗免疫和效价的检测奠定基础。
- 李盼李素一吴唯维林天龙林晨韬陈叙
- 关键词：嗜水气单胞菌DNA疫苗外膜蛋白
- 饲料中添加裂殖壶菌对斑马鱼抗创伤弧菌感染的影响被引量：1
- 2019年
- 【目的】研究饲料中添加裂殖壶菌对鱼类抗细菌感染能力的影响,为裂殖壶菌作为饲料添加剂的应用提供理论基础。【方法】以6个月的成年斑马鱼为研究对象,以基础颗粒饲料为对照组(C组),试验组在基础饲料中添加干重3%的裂殖壶菌(S组),进行28 d饲喂试验。28 d后以创伤弧菌Vibrio vulnificus菌株FJ03-X2对斑马鱼进行攻毒,统计免疫保护率,并收集斑马鱼的肾脏组织提取RNA,逆转录成cDNA,通过Real-time RT-PCR检测相关基因lysozyme和tnfb的表达。【结果】饲料中添加3%裂壶菌能够显著提高斑马鱼感染创伤弧菌后的存活率,相对保护率为42.8%;Real-time RT-PCR检测的结果发现S组的斑马鱼肾脏中溶菌酶Lysozyme的mRNA水平极显著高于对照组(P<0.01),而肿瘤坏死因子TNFb的m RNA水平则极显著低于对照组(P<0.01)。【结论】裂殖壶菌作为营养添加剂可以提高斑马鱼抗创伤弧菌感染的能力。
- 陈华张丽娟李素一柯翎陈叙林晨韬
- 关键词：裂殖壶菌斑马鱼创伤弧菌饲料添加剂
- 创伤弧菌外膜蛋白OmpU的基因克隆与表达被引量：2
- 2013年
- 创伤弧菌是导致鳗鲡产生体表溃疡死亡的重要致病菌。本研究克隆了创伤弧菌FJ03-X2株外膜蛋白基因(ompU),构建含该基因的原核表达载体,命名为pET-32a-ompU,将其转化到大肠杆菌E.coli中进行融合表达。37℃,0.5mmol.L-1的IPTG诱导4h,融合蛋白rompU以可溶形式表达,采用Ni-NTA亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE显示纯化后的rompU为与预期大小一致的单一条带。将纯化的rompU免疫SD级大鼠,ELISA检测收获的多克隆抗体血清效价,并通过Western-blot证实该OmpU多克隆抗体可以识别创伤弧菌FJ03-X2株中的天然外膜蛋白OmpU。
- 李素一吴唯维李盼柯翎许斌福林晨韬林天龙陈叙
- 关键词：创伤弧菌克隆原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 创伤弧菌铁调基因fur的原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2016年
- 应用PCR方法克隆了创伤弧菌Vibrio vulnificus FJ03-X2株的铁调基因fur(Ferric uptake regulator),该基因片段大小为450bp,编码149个氨基酸;以pET32a为表达载体,构建了原核表达质粒pET32a-FUR,表达质粒测序结果表明目的基因与GenBank中报道的创伤弧菌fur基因的同源性达98%以上;诱导表达获得可溶性的重组表达蛋白rFUR。镍离子金属螯合亲和层析介质(Ni-NTA)纯化rFUR,SDS-PAGE电泳分析其分子量约33kD。以纯化后的融合蛋白rFUR为抗原,4次免疫SD大鼠,制备抗rFUR蛋白大鼠多克隆抗体。用ELISA方法检测鼠多克隆抗体的效价达到1∶256 000,表明融合蛋白rFUR具有良好的免疫原性。
- 李素一张丽娟陈华柯翎陈叙林晨韬
- 关键词：创伤弧菌原核表达多克隆抗体
