广东省科技计划工业攻关项目(2010B060900029)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 相关作者：赵慧清卢华定王昆吕璐璐史德海更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 透明质酸/壳聚糖/pEGFP纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞的比较被引量：2
- 2012年
- [目的]以透明质酸(HA)修饰的壳聚糖(CS)/质粒DNA(pDNA)纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞,以明确其作为非病毒基因载体治疗关节疾病的潜能。[方法]将HA修饰的CS与负载增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的pDNA以复凝聚法制成纳米粒,以扫描电镜检测纳米粒形态;激光粒度仪测定其粒径、Ze-ta电位及分散度(PDl);凝胶电泳阻滞试验检测HA/CS和pDNA的结合力及pDNA的释放;体外转染兔关节软骨细胞与滑膜细胞,以流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率。[结果]HA/CS/pDNA纳米粒多呈球形,粒径平均为(142.5±20.3)nm,表面Zeta电位平均为(25.99±8.48)mV,分散度平均为(0.283±0.089),可有效保护pDNA免受核酸酶的降解;通过调节pH值至7.5以上或加入壳聚糖酶可促使纳米粒中的pDNA释放;体外转染实验证明HA/CS/pDNA纳米粒能介导pEGFP转染软骨细胞和滑膜细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,其对软骨细胞的转染能力较强,比裸pEGFP和CS/pEGFP纳米粒有更高的转染效率(P<0.05);但对滑膜细胞的基因转染效率较低,与CS/pEGFP纳米粒无明显差别(P>0.05)。[结论]复凝聚法制备的HA/CS/pDNA纳米粒是一种有效的新型非病毒基因转染载体,在体外可介导基因转染关节软骨细胞和滑膜细胞,其转染效率具有明显的细胞依赖性。
- 吕璐璐卢华定陆慧琼张富程赵慧清
- 关键词：壳聚糖透明质酸基因转染软骨细胞滑膜细胞
- 透明质酸修饰壳聚糖／pDNA纳米微球的制备及体外转染软骨细胞被引量：6
- 2011年
- 目的以透明质酸（HA）修饰基因载体壳聚糖（CS）纳米微球，制作一种新型的HA／CS／pDNA基因转染系统，观察其结构特征及体外对软骨细胞的转染能力。方法将不同比例的HA和CS与负载增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）的质粒DNA（pDNA）以复凝聚法制成纳米微球，以扫描电镜检测纳米微球形态，Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位；凝胶电泳阻滞实验观察CS和pDNA的结合力；体外转染兔关节软骨细胞，以流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率。结果HA／CS／pDNA纳米微球多呈球形，粒径为（223±51）mm，表面Zeta电位为（17．4±6．1）mV，可有效保护pDNA免受DNaseⅠ的降解。体外转染实验证明HA／CS／pDNA纳米微球能介导pEGFP转染软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白，转染率达（15．450±0．404）％，比裸pDNA组和CS／pDNA组有更高的转染效率（P〈0．05）。结论复凝聚法制备的HA／CS／pDNA纳米微球是一种有效的新型非病毒基因转染系统，对软骨细胞有着潜在的靶向基因转染能力。
- 赵慧清卢华定王昆温小粤史德海
- 关键词：透明质酸基因载体转染软骨细胞
- 转化生长因子β1基因缓释的壳聚糖纳米粒制备及体外检测被引量：3
- 2012年
- 背景:壳聚糖作为一种非病毒载体,具有低毒性、低免疫原性、良好的生物相容性以及带可高正电荷密度的特性,易与带负电荷的DNA通过静电作用形成相互作用体避免核酸酶的降解。目的:构建负载重组人转化生长因子β1基因的壳聚糖纳米粒,检测其体外缓释转化生长因子β1基因及对软骨细胞基因转染等性能。方法:将壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白基因和转化生长因子β1基因的质粒DNA(pDNA)以复凝聚法制成壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒。结果与结论:制备的壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒呈球形,粒径、表面电位与pH值相关,随着pH值升高,粒径增大,表面电位减少。纳米粒可有效保护pDNA免受核酸酶的降解。纳米粒的pDNA包封率为(87.5±2.3)%;pDNA可从纳米粒中缓慢释放。体外转染实验证实壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒能转染软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白。提示壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒能有效保护pDNA免受核酸酶降解,具有良好的缓释转化生长因子β1基因的能力,并能介导基因转染软骨细胞。
- 卢华定吕璐璐赵慧清王昆
- 关键词：转化生长因子Β1壳聚糖基因载体
