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兔软骨细胞在可注射温敏型壳聚糖／聚乙烯醇凝胶中生长的研究被引量：1: 2008年; 目的探讨以壳聚糖（CS）和聚乙烯醇（PVA）制备的可注射温敏型凝胶作为兔软骨细胞生长支架的可行性。方法将壳聚糖和聚乙烯醇溶液混合制成温敏型凝胶，取第三代软骨细胞接种于凝胶支架。于接种后24、48和72h采用MTT测定细胞活性及毒力；于1、2及3周后采用扫描电镜及共聚焦激光扫描荧光显微镜观察软骨细胞在凝胶中的形态及生长状态。结果MTT结果显示接种细胞数量随着接种细胞生长时间的推移而明显增加，各组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。扫描电镜及激光共聚焦荧光显微镜观察表明软骨细胞在CS／PVA凝胶支架中生长良好。软骨细胞在凝胶支架中保持了很高的增殖能力，材料对细胞无明显不良反应。结论壳聚糖／聚乙烯醇混合凝胶可作为兔软骨细胞培养的生长支架，应用于软骨组织工程。; 陈彪喻爱喜祝少博漆白文汤玉峰; 关键词：壳聚糖聚乙烯醇软骨细胞细胞培养

重组hTGF-β1腺病毒转染BMSCs及其转录增强因子TAZmRNA表达变化的研究被引量：6: 2010年; 目的探讨Ad-hTGF-B1转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）并诱导其向成软骨细胞分化的可行性及其相关转录凶子TAZmRNA表达的变化．方法全骨髓法获取和培养大鼠骨髓间充质干细胞，取第三代细胞接种于细胞培养板。实验分成三组：Ad－hTGF．B1转染组、Ad－EGFP转染组、空白对照组，前两组分别使用含Ad－hTGF－B1与Ad－EGFP的无札清培养基，空白对照组使用不做任何处理的完全培养基。7d后，运用实时荧光定量PCR与Westernblot检测TGF－βl的表达，利用免疫组织化学方法与Westernblot检测Collagen1I的表达．采用实时荧光定量PCR检测TAZmRNA的表达。结果转染后7d，实时荧光定量PCR结果显示TGF—β1表达量的平均相对比值分别为：Ad．hTGF－β1转染组O．863、Ad—EGFP转染组0．183、空白对照组0．180；TAZ表达量的平均相对比值分别为：Ad－hTGF－β1转染组0．810、Ad—EGFP转染组O．416、空白对照组0．366。TGF－β1和TAZ的表达差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot和免疫组化发现Ad－hTGF－β1转染组的细胞内Collagen11表达呈强阳性，而Ad－EGFP转染组及空白对照组细胞内的CollagenII表达很弱。结论Ad－hTGF－β1能够成功且稳定的诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化．同时．在骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化过程中，转录增强因子TAZ的mRNA水平随之上调，认为TGF－β1可能通过TAZ的作用促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化。; 张韬祝少博喻爱喜漆白文齐勇建孙晨胡兴; 关键词：软骨细胞基因转染

CS／PVA凝胶负载Ad-hTGF-β1转染的BMSCs移植修复兔关节软骨缺损被引量：8: 2011年; 目的探讨温敏型CS／PVA凝胶负载Ad-hTGF-β1转染的骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植修复兔关节软骨缺损的实验效果。方法体外分离培养兔BMSCs，在Ad-hTGF-β1转染1周后，用细胞免疫化学方法检测hTGF．B1在细胞内的表达。用24只成年新西兰大白兔制造关节软骨缺损模型，双侧后肢均用于实验，动物模型随机分为4组，各组动物6只。A组：凝胶复合转染BMSCs修复组；B组：凝胶复合未转染BMSCs修复组；C组：凝胶修复组；D组：空白对照组。在术后16周时处死动物取材．通过大体标本和组织学染色观察评价各组修复效果，按照改良Pineda法评分，对各组修复效果进行统计学分析。结果免疫组化证实体外培养的BMSCs在Ad-hTGF-β1转染后表达hTGF-β1蛋白，阳性率为85．4％。术后16周取材见凝胶复合转染细胞组关节软骨缺损部位为软骨样组织填充，组织学观察见再生的软骨组织细胞排列及细胞密度与正常软骨相似，Ⅱ型胶原免疫组化阳性，Pineda评分同其它各组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CS／PVA凝胶作为一种温敏型可注射支架材料，其负载hTGF-β1转染的BMSCs移植可用于兔关节软骨缺损修复。; 漆白文喻爱喜祝少博周敏; 关键词：凝胶转化生长因子关节软骨缺损

The Preparation and Cytocompatibility of Injectable Thermosensitive Chitosan/Poly(vinyl alcohol) Hydrogel被引量：2: 2010年; In order to investigate the strength,structure and cell cytocompatibility of injectable thermosensitive chitosan(CS)/poly(vinyl alcohol)(PVA)composite hydrogel,chitosan hydrochloride solution was transferred to a neutral pH and mixed with different proportions of PVA,then the gelation time and strength of these different hydrogels were tested and spatial structures were observed under a scanning electron microscopy(SEM)after freeze-drying.The cytocompatibility of the hydrogels was evaluated through cytotoxi...; 漆白文喻爱喜祝少博陈彪李艳; 关键词：HYDROGEL CHITOSAN

hTGF-β1基因修饰BMSCs复合藻酸钙凝胶三维培养构建组织工程化软骨被引量：6: 2012年; 目的探讨hTGF-β1 转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合藻酸钙凝胶三维培养构建组织工程化软骨的可行性。方法全骨髓法获取和培养大鼠BMSCs，取第3代细胞接种于细胞培养板。实验分成3组：Ad．hTGF-β1 转染组、Ad．EGFP转染组、空白对照组，前两组分别加入含Ad-hTGF-β1 与Ad．EGFP的无血清培养基，空白对照组添加不做任何处理的完全培养基。7d后，运用实时荧光定量PCR与Westernblot检测TGF-β1 的表达情况。将Ad．hTGF-β1 成功转染组的BMSCs继续大量扩增后。按照1．0×107／ml的细胞密度制成细胞-藻酸钙凝胶复合物，将复合物置于培养箱中继续体外培养。10d后，观察凝胶材料中的细胞形态与增殖情况，并将复合物包埋、切片。进行组织学及免疫组织化学染色分析软骨分化情况。结果转染后7d，实时荧光定量PCR结果显示TGF-β1 表达量的平均相对比值Ad．hTGF-β1 转染组（0．863）明显高于Ad．EGFP转染组（0．183）、空白对照组（0．180），差异有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测发现Ad．hTGF．B1转染组的细胞内TGF-β1表达呈强阳性．而Ad-EGFP转染组及空白对照组细胞内的TGF．S1表达很弱。倒置显微镜观察到细胞在藻酸钙凝胶中能够很好的维持球形生长；MTr检测显示，不同时间点细胞在藻酸钙凝胶中的数量变化差异无统计学意义（P〉O．05）。HE染色可见有大量软骨陷窝形成，甲苯胺蓝、Masson染色可见有软骨基质分泌。CollagenⅡ免疫组织化学染色呈阳性表达。结论hTGF-β1 成功转染的BMSCs，在藻酸钙凝胶材料中培养在维持细胞形态的同时能够很好的向软骨细胞分化，此种培养方法更能模拟细胞在体内的生长方式。; 张韬祝少博喻爱喜漆白文孙晨成昊; 关键词：转化生长因子-Β1 软骨

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国家自然科学基金(30770574)

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