国家高技术研究发展计划(2011AA020114)
- 作品数：16 被引量：50H指数：4
- 相关作者：陈虎张斌徐曼扈江伟王军更多>>
- 相关机构：解放军第307医院军事医学科学院军事医学科学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“首都临床特色应用研究”专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Notch信号介导共培养脐带间充质干细胞和造血干细胞的相互作用被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨脐带间充质干细胞(UC-MSC)体外与造血干细胞共培养后Notch信号分子的改变。方法:通过胶原酶消化方法分离UC-MSC,通过流式细胞仪检测以及成脂、成骨和成软骨诱导鉴定UC-MSC具备间充质干细胞的特性。进而,将UC-MSC与脐血CD34+造血干细胞(HSC)体外培养,实时PCR方法检测MSC及CD34+细胞表面Notch配体及受体表达以及表达是否存在变化;在共培养体系中加入Notch信号阻滞剂DAPT(γ-secretase抑制剂),比较Hes-1基因活化状态的改变。结果:体外实验显示:UC-MSC在形态学、细胞表面表型和诱导分化能力上均具备间充质干细胞的特性。UC-MSC及CD34+细胞表面存在Notch信号配体及受体的表达,共培养后Jagged 1、Notch1基因表达明显增加;共培养后CD34+细胞中的Hes-1基因表达明显增加而加入DAPT后Hes-1基因表达未检出明显改变。结论:UC-MSC支持造血中,Notch信号可能发挥重要作用。
- 石蕊徐曼苏永峰张斌陈虎
- 关键词：脐带间充质干细胞造血干细胞NOTCH信号
- 针对MAGE-3抗原的DC肿瘤疫苗的研究进展
- 2012年
- 树突状细胞(dendritic cell,DC)作为体内功能最强的专职抗原提呈细胞,广泛分布于各种组织器官中,在激活肿瘤特异性免疫中发挥重要作用。黑素瘤相关抗原3(melanoma-associated antigen 3,MAGE-3)是一种肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA),属于黑素瘤相关抗原家族(melanoma-associated antigen family,MAGE family),在上皮细胞来源的多种肿瘤细胞表面都有不同程度的表达。MAGE家族类肿瘤表面标志物能被用于早期发现肿瘤细胞,并针对该类抗原进行特异性的免疫治疗,是肿瘤免疫治疗的理想靶抗原。由于DC能将肿瘤相关性抗原提呈给T淋巴细胞,产生抗原特异性免疫反应,因此DC肿瘤疫苗为肿瘤免疫治疗提供了一种有效手段。目前,针对MAGE-3抗原的DC肿瘤疫苗研究已经广泛开展,可以通过多种不同的方式将MAGE-3负载DC,并取得了一定的临床疗效,为DC肿瘤疫苗的临床应用带来了曙光。
- 徐晗张斌陈虎
- 关键词：树突状细胞MAGE-3肿瘤疫苗
- 体外连续传代培养脐带间充质干细胞染色体核型的稳定性被引量：3
- 2012年
- 目的分析不同代次人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的染色体核型,初步评价UC-MSCs在体外连续传代培养过程中染色体结构的稳定性。方法采用胶原酶消化法分离UC-MSCs,贴壁培养传代,通过细胞形态、免疫表型及多向分化潜能等生物学特性进行鉴定,利用G显带分析第3、5、7代细胞的染色体核型。结果染色体核型分析显示,第3、5、7代UC-MSCs为正常二倍体核型,G显带未见染色体结构异常。UC-MSCs呈成纤维样形态生长,高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、CD45、CD40、CD80、CD86、CD154、HLA-DR;在特定的体外诱导条件下可以向骨、脂肪、软骨分化。结论 UC-MSCs在体外连续传代培养7代以内染色体结构稳定,为临床应用UC-MSCs的安全性提供了遗传学方面的实验依据。
- 王军徐曼盛宏霞孔维霞扈江伟廖丽汤永永宁红梅张斌陈虎
- 关键词：间充质干细胞脐带核型连续传代
- 干细胞移植治疗阿尔茨海默病的研究现状及展望被引量：4
- 2012年
- 背景:神经干细胞、骨髓来源的间充质干细胞移植后能够不同程度地缓解阿尔茨海默病患者的症状,在阿尔茨海默病的治疗中表现出很好的潜力。目的:总结了干细胞治疗阿尔茨海默病的研究现状,并展望了其应用前景。方法:应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中1981-01/2011-08关于干细胞移植治疗阿尔茨海默病的文章,在标题和摘要中以"阿尔茨海默病;干细胞;间充质干细胞;移植"或"Alzheimer’s disease;stemcell;mesenchymal stem cells;transplantation"为检索词进行检索。选择文章内容与干细胞移植治疗阿尔茨海默病相关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。初检得到122篇文献,根据纳入标准选择17篇文章进行综述。结果与结论:对阿尔茨海默病病理改变及发病机制的了解,有利于选择更灵敏的阿尔茨海默病检测的生物标志物,有效预防和治疗阿尔茨海默病。线粒体DNA变化的氧应激,免疫应答的参与等在阿尔茨海默病的发病过程中都发挥关键作用,而且可能是多因素协同作用。通过对干细胞治疗阿尔茨海默病的机制研究指导其临床方面的应用。
- 于程程张斌陈虎
- 关键词：阿尔茨海默病间充质干细胞神经退行性疾病骨髓来源干细胞
- 慢性髓性白血病患者非血缘供者骨髓移植术后并发甲状腺功能亢进1例并文献复习被引量：3
- 2013年
- 目的:分析骨髓移植后引起甲状腺功能亢进的病因、临床特点、治疗及预后。方法:报道1例慢性髓性白血病患者非血缘供者骨髓移植术后并发甲状腺功能亢进随访9年的结果,并复习相关文献。结果:患者男性,21岁,确诊慢性髓性白血病后行非血缘供者骨髓移植,术后+44天,出现持续低热,抗细菌、抗病毒及抗真菌治疗均无效,排除疾病复发,查甲状腺功能提示患者从亚临床甲状腺功能亢进进展为甲状腺功能亢进,给予口服甲巯咪唑治疗2周,患者体温降至正常,血T4、fT4恢复正常,随访9年,慢性髓性白血病无复发,甲状腺功能持续正常。检索文献发现类似报道5例,对其进行归纳分析。结论:骨髓移植术后早期并发甲状腺功能亢进,可能与放化疗预处理及免疫损伤引起的破坏性甲状腺炎相关,有其独特的临床表现,极易被忽视,治疗方面可以尝试应用糖皮质激素及抗甲状腺药物。对于非血缘供者骨髓移植后不明原因发热者,应考虑到甲亢可能。
- 臧学峰李渤涛庞一琳刘婷婷楼晓李倩江岷王雷陈虎
- 关键词：甲状腺功能亢进慢性髓性白血病
- hESCs/hiPSCs体外诱导产生红细胞的研究进展及其临床应用的展望被引量：4
- 2012年
- 人类胚胎干细胞和多功能诱导性干细胞的诞生,标志着干细胞研究已经跨入了全新的应用时代。干细胞研究领域的一个重要方向是特定谱系成熟细胞的定向诱导分化。在诸多的血细胞中,成熟红细胞因为无核而携带着最小量的遗传物质,可能作为最早的干细胞治疗产品而应用于输血替代治疗。最近,干细胞向造血细胞(包括红细胞)的研究正方兴未艾。但由于方法学上的偏差,诱导产生的红细胞的成熟度各有所不同。该文在结合了作者实验室的工作经验的基础上,对目前人类多潜能干细胞向红细胞特定诱导分化的方法做了综合的描述,并提出了该研究领域亟需解决的重大科学问题。
- 毛斌马峰
- 关键词：红细胞
- 人脐带来源间充质干细胞移植急性阿尔茨海默病模型小鼠引发的免疫应答反应被引量：4
- 2012年
- 背景：阿尔茨海默病患者的外周血和脑脊液中相应细胞因子浓度较正常人相比有明显的改变，加强了阿尔茨海默病伴随着免疫应答的结论，提示炎性应答可能参与了阿尔茨海默病神经改变的级联反应。目的：探讨人脐带间充质干细胞在急性阿尔茨海默病小鼠模型中引发的免疫应答反应与外周血中各细胞因子水平的关系。方法：取第5代人脐带间充质干细胞，调整细胞浓度为1×109 L-1待用。C57小鼠随机分为4组，间充质干细胞组侧脑室注射β-淀粉样蛋白1～42，尾静脉注射1 mL人脐带间充质干细胞；模型组侧脑室注射β-淀粉样蛋白1～42，尾静脉注射等体积生理盐水；生理盐水组不造模，尾静脉给予等体积的生理盐水；正常组不造模，不给予任何干预措施。结果与结论：与正常组相比，模型组小鼠在Morris水迷宫实验中逃避潜伏期延长、第一次穿环时间增加而穿环次数减少，间充质干细胞组小鼠逃避潜伏期有所减少，第一次穿环时间减少，穿环次数有所提高，但改善情况较模型组比较不明显。与正常组小鼠相比，模型组在造模后4 d出现N-乙酰天冬氨酸降低，肌醇升高，造模后7 d外周血炎性因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平升高，白细胞介素10水平升高不明显；与模型组相比，注射脐带间充质干细胞7 d后外周血各炎性因子水平有所降低。结果表明人脐带间充质干细胞治疗阿尔茨海默病可能是通过调节免疫应答的途径来实现的。
- 于程程汤勇勇盛宏霞刘港胡增蛲周文霞李功杰张斌陈虎
- 关键词：阿尔茨海默病小鼠Β-淀粉样蛋白人脐带间充质干细胞
- 美国FDA批准的首个自体细胞免疫治疗药物sipuleucel-T的转化之旅被引量：5
- 2011年
- 自本年度诺贝尔医学或生理学奖获得者Ralph M.Steinman于1973年发现DC及其在获得性免疫应答中关键作用以来,有关DC肿瘤疫苗的研究持续进行了数十年,直到2010年4月,美国FDA才批准了首个以DC为主要效应细胞的自体细胞免疫治疗药物sipuleucel-T(又称APC8015或Provenge)用于无症状或轻微症状的转移性去势拮抗性前列腺癌的治疗,成为自1971年理查德·尼克松颁布《国家癌症法》以来癌症研究40年中的重要事件之一。为了详细了解美国Dendreon公司为临床开发sipuleucel-T所经历的坎坷历程,本文对sipuleucel-T的制备过程和作用机制、sipuleucel-T I/Ⅱ期和Ⅲ期临床试验的设计情况及研究结果、sipuleucel-T上市的竞争情况作了回顾和介绍,同时分析了临床应用sipuleucel-T所亟待解决的一些问题,如疗效评价体系的建立等,希望对致力于DC肿瘤疫苗研发乃至肿瘤免疫治疗的同行有所借鉴和启示。
- 唐晓义张斌陈虎
- 关键词：树突状细胞免疫治疗
- 全骨髓直接贴壁分离人骨髓间充质干细胞的生物学特性被引量：1
- 2012年
- 背景：体外分离培养骨髓间充质干细胞成为实验研究和临床应用的关键环节。目的：采用全骨髓培养法分离人骨髓间充质干细胞,建立一种简单、有效的分离培养骨髓间充质干细胞的方法。方法：通过全骨髓培养法分离培养人骨髓间充质干细胞,并通过传代进行纯化和扩增培养。分别在特定诱导体系中诱导人骨髓间充质干细胞向脂肪、成骨及软骨细胞分化。结果与结论：采用全骨髓培养分离法能获得90%以上纯度的骨髓间充质干细胞;流式细胞仪检测结果显示,贴壁细胞均表达CD73、CD90、CD105,不表达造血细胞表型CD34、CD45和HLA-DR;细胞倍增时间为（24.04±0.49）h;细胞周期分析表明：G0~G1期和S＋G2＋M期所占比例分别为71.63%和28.37%;诱导分化结果显示,人骨髓间充质干细胞能够向脂肪、骨和软骨细胞分化。说明全骨髓分离培养法是一种较好的分离人骨髓间充质干细胞的方法。
- 张颢张斌程梅陶艳玲扈江伟徐曼陈虎
- 关键词：间充质干细胞分化
- 重组腺病毒载体Ad5-hTRX-EGFP的构建及其表达被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在构建并制备人硫氧还蛋白(hTRX)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因腺病毒载体Ad-hTRX-EGFP,感染HEK293细胞,为基因治疗提供实验基础。设计含有NotⅠ和EcoRⅤ酶切位点的引物,PCR扩增hTRX,将扩增产物连接到带有EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP,利用Lipofectamine2000脂质体的方法将AdMax腺病毒包装系统的骨架质粒pBHG lox_E1,3Cre和穿梭质粒pDC316-hTRX-EGFP共转染入HEK293细胞,进行同源重组,得到腺病毒重组质粒pAd-hTRX-EGFP,并在其中包装扩增病毒,用氯化铯高速梯度离心、纯化病毒,测定病毒颗粒数及滴度。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用流式细胞仪测定感染HEK293细胞的效率,Western blot方法验证细胞表达hTRX蛋白。结果显示,重组腺病毒质粒经PCR和NotⅠ、EcoRⅤ酶切鉴定,证实含有hTRX基因,测序结果和设计片段的序列一致。重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达5.558×1010pfu/ml。病毒成功感染HEK293细胞,MOI=100时,感染效率达92.25%。经Western blot方法验证表明,感染后的HEK293细胞高表达hTRX蛋白。结论:应用细胞内同源重组方法成功构建了含hTRX基因的重组腺病毒载体,制备获得高滴度的病毒,能高效感染HEK293细胞并表达目的蛋白,为后续研究奠定了基础。
- 扈江伟王军徐曼苏永锋孔维霞盛红霞张斌陈虎
- 关键词：人硫氧还蛋白腺病毒载体增强型绿色荧光蛋白
