国家自然科学基金(30871832)
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
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- 沂蒙黑山羊发情周期中输卵管促性腺激素受体基因的表达差异研究被引量：5
- 2011年
- 采用RT-PCR方法,以持家基因GAPDH为内参,研究沂蒙黑山羊发情周期中卵泡刺激素受体(FSHR)mRNA和黄体生成素受体(LHR)mRNA在输卵管中的表达差异。结果表明,发情周期中促性腺激素受体mRNA在输卵管中都有表达。漏斗部FSHR mRNA在间情期的表达量最高,发情期表达量最低,且发情期与其他3个时期差异极显著(P<0.01)。壶腹部在间情期的表达量最高,发情前期表达量最低,间情期与其他时期差异极显著(P<0.01)。在峡部则是发情后期表达量最高,发情前期最低,发情前期与其他3个时期差异极显著(P<0.01)。LHR mRNA表达量与FSHR mRNA呈相反规律,以发情期漏斗部相对表达量最高,与其他部位差异极显著(P<0.01)。研究结果显示,发情周期中促性腺激素受体基因在输卵管中呈规律性的动态变化。表明,在动物排卵、受精及早期胚胎发育过程中促性腺激素受体mRNA起着一定的调节作用。
- 王丽李泰云王树迎黄丽波侯衍猛韩小康石中强
- 关键词：卵泡刺激素受体输卵管RT-PCR发情周期
- 山羊颌下腺GnRH和GnRHR阳性细胞在生后发育时期变化规律的研究
- [目的]为阐明山羊生后发育时期颌下腺中GnRH和GnRHR的变化规律,探讨其与生后发育的关系[方法]采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(Strept Avidin B iotion-Peroxidase Compl...
- 王曙明王树迎
- 关键词：GNRH免疫组化颌下腺山羊
- 文献传递
- 沂蒙黑山羊发情周期不同阶段卵巢中FSHR和LHR基因表达规律的研究被引量：8
- 2011年
- 选取健康未孕的成年沂蒙黑山羊,按发情周期(间情期、发情前期、发情期、发情后期)宰杀取卵巢,采用实时荧光定量差异显示PCR(real-time qRT-PCR)技术,以GAPDH为持家基因,对处于发情周期不同阶段的沂蒙黑山羊卵巢组织内的卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)基因进行了mRNA水平上的相对定量分析。发现FSHR mRNA、LHR mRNA在黑山羊发情周期的卵巢中都有表达。FSHRmRNA的相对表达量依次为0.618 7±0.294 42、1.290 2±0.290 24、2.575 9±0.458 80、0.790 8±0.261 93,其中发情期最高,间情期最低,两者差异极显著(P<0.01)。LHR mRNA的相对表达量依次为2.284 0±0.146 22、0.508 9±0.0789 9、0.340 3±0.045 38、2.859 2±0.205 66,其中发情后期相对表达量最高,发情期最低,两者差异极显著(P<0.01)。结果表明,FSH、LH在黑山羊的整个发情周期中是相互作用、相互影响的。
- 李泰云韩小康丁彦红王树迎王丽石中强
- 关键词：卵巢卵泡刺激素受体发情周期沂蒙黑山羊
- 生后发育时期济宁青山羊乳腺中ERα和PR的分布及其mRNA表达
- (目的)本研究旨在探讨济宁青山羊生后发育过程中乳腺组织内ERα和PR蛋白水平和mRNA分子水平的表达规律。(方法)应用SP免疫组化法和图像分析方法检测ERα和PR在济宁青山羊乳腺内的分布;以GAPDH为内参基因,RT-P...
- 尹玉涛王树迎刘宵张德敏侯衍猛黄丽波
- 关键词：济宁青山羊乳腺雌激素受体Α孕激素受体RT-PCR
- 文献传递
- 济宁青山羊生后乳腺GHR和IGF-ⅠR的分布及其mRNA表达的发育性变化被引量：3
- 2016年
- 采用SABC法检测济宁青山羊生后发育过程中生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)与胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin like growth factorⅠreceptor,IGF-ⅠR)在乳腺组织中的分布;GAPDH作为内参基因,qRT-PCR法检测GHR mRNA与IGF-ⅠR mRNA相对表达量。结果显示:GHR和IGF-ⅠR阳性物质主要在乳腺组织内的导管上皮细胞、基质细胞和血管内皮细胞的胞质中表达,细胞核偶有表达;GHR和IGF-ⅠR阳性细胞光密度值与其mRNA表达趋势基本一致,但IGF-ⅠR的表达量低于GHR;GHR和IGF-ⅠR在出生当天表达水平较低,60日龄(初情期)和120日龄(性成熟)出现峰值(P<0.05),120日龄后逐渐下降。结果表明:济宁青山羊生后发育时期,GHR与IGF-ⅠR对乳腺的生长发育具有重要的调节作用,初情期和性成熟期可能是乳腺生长发育最快的阶段。
- 常新侠王树迎于学浩黄丽波侯衍猛
- 关键词：生长激素受体济宁青山羊乳腺QRT-PCR
- GHR和IGF-IR在济宁青山羊子宫内分布和表达的发育性变化被引量：5
- 2013年
- 旨在探讨济宁青山羊生后发育过程中生长激素受体(Growth hormone,GHR)和胰岛素样生长因子I受体(Insulin-like growth factor-I,IGF-IR)在子宫的分布及其mRNA的表达规律。运用实时荧光定量PCR技术,检测GHR mRNA和IGF-IR mRNA的表达规律;SABC法检测GHR和IGF-IR免疫阳性细胞在子宫的分布。结果表明,GHR和IGF-IR免疫阳性染色主要见于子宫腺管上皮、基质、血管内皮和子宫平滑肌细胞的胞质中,偶见胞核着色。GHR和IGF-IR的阳性细胞数与其mRNA表达的变化趋势基本一致,且IGF-IR低于GHR。GHR和IGFIR在初情期(60日龄)和性成熟(120日龄)达到高峰(P<0.01),120日龄后下降,并维持在一个相对稳定的水平。GHR和IGF-IR在子宫的生长发育过程中起着重要作用,且初情期和性成熟期可能是济宁青山羊生后子宫发育最快的时期。
- 同海妮白淑王树迎黄丽波石运芝侯衍猛
- 关键词：济宁青山羊GHRIGF-IR免疫组化法QRT-PCR
- Ghrelin免疫阳性细胞在山羊胃肠道的发育性变化被引量：5
- 2012年
- 为探究Ghrelin免疫阳性细胞山羊胃肠道的定位分布、形态特征与发育性变化,选用0、30、60、90、120、150和180日龄雌性济宁青山羊,按试验要求取材后进行免疫组织化学方法染色。结果显示,Ghrelin免疫阳性细胞主要分布在黏膜上皮、腺体和固有层,有"闭合型"和"开放型"2种类型。2种类型细胞在皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠均有分布,但未在瘤胃、网胃、瓣胃和直肠中检出。Ghrelin阳性细胞在皱胃中最多,由皱胃至结肠逐渐减少,"闭合型"细胞所占比例也由皱胃至结肠逐步减少。从0～120日龄,皱胃和空肠中阳性细胞数随着年龄增长而增加,150和180日龄有所下降;十二指肠中阳性细胞在90日龄达到高峰。回肠、盲肠和结肠中阳性细胞数较少,均呈现随日龄增长而缓慢增长的趋势。Ghrelin免疫阳性细胞的数量变化表明Ghrelin可能与山羊胃肠道发育密切相关。
- 张德敏王树迎尹玉涛刘宵侯衍猛黄丽波张春兰
- 关键词：GHRELIN济宁青山羊胃肠道
- 山羊β雌激素受体多克隆抗体的制备及免疫组化方法的建立被引量：3
- 2013年
- 本研究旨在克隆济宁青山羊雌激素受体β(ERβ)基因,进行原核表达,制备多克隆抗体,建立免疫组化分析方法,检测济宁青山羊卵巢和子宫内ERβ分布。根据GenBank发布的绵羊ERβ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR方法从济宁青山羊卵巢组织中扩增ERβ部分基因。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体pET32a(+),构建重组表达载体pET32a(+)-ERβ,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定;经Ni-NTA纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并检测抗体效价及特异性;使用该抗体检测济宁青山羊卵巢和子宫组织细胞中的ERβ分布。结果表明,成功扩增出ERβ部分基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量约为53ku的融合蛋白;Western blotting证明该融合蛋白能与兔抗人的ERβ多克隆抗体特异性反应。制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶213,以此抗体代替购置的标准兔抗人ERβ抗体,进行Western blotting反应,特异性良好;使用该抗体建立免疫组化方法检测结果表明济宁青山羊卵巢颗粒细胞和子宫内膜上皮细胞、平滑肌细胞存在ERβ的分布。本研究获得特异性兔抗山羊ERβ多克隆抗体,使用该抗体建立免疫组化方法首次报道了济宁青山羊卵巢和子宫ERβ的分布表达,为进一步研究β雌激素受体的生物学功能奠定了方法学和形态学基础。
- 刘海港李宏梅王树迎成子强刘法孝窦文文井维芳郭慧君
- 关键词：山羊雌激素受体Β多克隆抗体免疫组化
- 出生后发育时期济宁青山羊乳腺中ERα和PR的分布及其mRNA表达被引量：4
- 2012年
- 本研究旨在探讨济宁青山羊出生后发育过程中乳腺组织内雌激素受体α(ERα)和孕激素受体(PR)免疫阳性细胞的分布及平均光密度和mRNA分子水平的表达规律。应用SP免疫组化法和图像分析方法检测ERα和PR在济宁青山羊乳腺内的分布;以GAPDH为内参基因,qRT-PCR方法检测ERα和PR mRNA的相对表达量。结果表明,ERα和PR阳性染色主要见于乳腺组织内的血管内皮细胞、基质细胞和腺管上皮细胞的细胞核中,偶见胞浆阳性着色,180日龄在腺泡上皮细胞亦可见PR阳性表达;ERα和PR平均光密度自出生～性成熟期呈现逐渐上升的趋势,且性成熟期显著高于出生当天和初情期(P<0.05),但与180日龄相比无显著差异(P>0.05)。qRT-PCR结果显示,ERαmRNA的表达量自出生～性成熟期呈现逐渐上升趋势,性成熟期最高,极显著高于出生当天和初情期(P<0.01),180日龄略有下降。PR mRNA表达量自出生当天～性成熟期较低且组间差异不显著(P>0.05),180日龄的表达量最高且极显著高于其他的3组(P<0.01)。济宁青山羊出生后发育过程中,ERα对腺管伸长和上皮分化以及PR对腺管分支和腺泡发育起促进作用。
- 尹玉涛王树迎刘宵张德敏侯衍猛黄丽波
- 关键词：济宁青山羊乳腺雌激素受体Α孕激素受体
- 济宁青山羊子宫内ERα、ERβ和PR的分布及其mRNA表达的增龄性变化被引量：3
- 2013年
- 旨在探讨济宁青山羊出生后发育过程中雌激素受体（Estrogenreceptor，ERα和ERβ）和孕激素受体（Pro—gesteronereceptor，PR）在子宫的定位及其mRNA的表达规律。利用SABC法检测ERα、ERβ和PR在不同日龄组子宫的分布；以GAPDH为内参基因，qRT～PCR法检测3种mRNA的相对表达量。结果显示，ERα、ERβ和PR阳性物质主要见于腔上皮、腺上皮、基质、血管内皮和平滑肌细胞的胞核中，偶见胞质阳性着色。ERα、ERβ和PR阳性细胞光密度与其mRNA表达趋势基本一致，但ERβ 低于ERα。ERα和E即在出生当天～30日龄处于低水平，60日龄开始上升，90～120日龄达到高峰，以后维持在高水平状态；PR在出生当天较高，而在30日龄处于最低水平，初情期（60日龄）后逐渐升高，并在性成熟（120日龄）和性成熟后（180日龄）出现2个高峰。ERα、ERβ和PR参与调节子宫内膜与肌层的增殖和分化。
- 白淑同海妮石运芝黄丽波侯衍猛王树迎
- 关键词：济宁青山羊QRT-PCR
