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广东省科技计划工业攻关项目(20108031600123)
作品数:
3
被引量:7
H指数:2
相关作者:
陆建华
施冲
熊家祥
于英妮
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陆建华
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水溶性脂聚体可运载N-甲基-D-天冬氨酸受体2B小干涉RNA治疗慢性炎性疼痛
被引量:4
2013年
目的慢性炎性疼痛的基因治疗缺乏安全且高效的载体,本实验探讨了低分子量聚乙烯亚胺(polyetllylenimine,PEI)和胆固醇组成的水溶性脂聚体(water-soluble lipopolymer,WSLP)运载N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(N-Methyl-D-aspartic acid receptor2B,NR2B)小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)治疗大鼠慢性炎性疼痛的可行性。方法将WSLP直接与靶向NR2B的siRNA连接形成WSLP/siRNA复合物,乱序siRNA作为对照(WSLP/scRNA);然后检测鞘内注射WSLP/siRNA对完全弗氏佐剂(freund's adjuvant complete,CFA)炎性痛模型大鼠脊髓背角(spinal cord doral horn,SCDH)NR2B蛋白表达的影响。并且测定鞘内注射此复合物后炎性痛大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)及热缩足反射持续时间(thermal withdrawal duration,TWD)的变化。结果WSLP/siRNA注射后3d,炎性疼痛大鼠SCDH NR2B蛋白水平的表达与CFA组比较显著下降58%(P〈0.01),WSLP/scRNA及PEI/siRNA注射后NR2B的表达无明显变化(P〉0.05)。WSLP/siRNA鞘内注射后3、4d及5d炎性痛大鼠的MWT[(3d:(9.2±1.3);4d:(9.8±1.2);5d:(9.5±.2)]较CFA组[(3d:(4.6±1.2);4d:(4.9±1.8);5d:(5.0±1.8)]显著增高(P〈0.01),TWD[(3d:(3.27±0.32)s;4d:(3.83±0.49)s;5d:(3.57±0.33)s]较CFA组[(3d:(6.71±0.45)s;4d:(6.97±0.54)s;5d:(6.63±0.38)s]显著缩短(P〈0.01),WSLP/scRNA及PEI/siRNA均无此治疗作用(P〉0.05)。结论WSLP可有效运载siRNA抑制CFA所致慢性炎性痛大鼠NR2B的过度表达,从而对炎性疼痛大鼠具有治疗作用。
杨雪
董文芳
彭捷
熊家祥
陆建华
关键词:
小干涉RNA
炎性疼痛
水溶性脂聚体介导NR2B siRNA治疗神经病理性痛的实验研究
2011年
目的探讨水溶性脂聚体(WSLP)介导含2B亚基的N-甲基-D-天冬氨酸受体小干扰RNA(NR2B siRNA)治疗大鼠神经病理性痛的可行性。方法健康雄性SD大鼠100只,周龄6周,体重180-200g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=20):对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、WSLP.NR2BsiRNA组(w组)、WSLP-阴性对照NR2BsiRNA(WN组)。采用坐骨神经分支部分结扎法制备大鼠神经病理性痛模型。c组不予任何处理;S组仅暴露坐骨神经,不牵拉和损伤神经;NP组于制备模型后即刻鞘内注射生理盐水20μl;W组和WN组于制备模型后即刻分别鞘内注射相应的siRNA20出。于模型制备前1d及制备后3、7、14和21d时测定机械缩足反应阈值(MWT)及热缩足反应持续时间(TWD),模型制备后3d,痛阈测定结束后,每组取10只大鼠,取L4-6节段背根神经节,测定NR2BmRNA及其蛋白的表达水平。结果与S组比较,NP组、W组和WN组MWT降低,TWD延长,NR2BmRNA及其蛋白表达上调(P〈0.05或0.01),c组上述指标差异无统计学意义(P〉0.05);与NP组比较,w组MWT升高,TWD缩短,NR2BmRNA及其蛋白表达下调(P〈0.01),WN组上述指标差异无统计学意义(P〉0.05)。结论WSLP不仅成功介导NR2BsiRNA,抑制NR2B的表达,还可减轻大鼠神经病理性痛。
陆建华
屠伟峰
陈昊
熊家祥
胡春圭
施冲
关键词:
N-甲基-D-天冬氨酸
小分子干扰
神经痛
水溶性纳米凝脂聚合物运载siRNA沉默PC12细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体1基因的实验研究
被引量:4
2011年
目的探讨离体条件下水溶性纳米凝脂聚合物(water-soluble lipopolymer,WSLP)运载小干涉RNA(small interference RNA,siRNA)沉默N-甲基-天冬氨酸受体1(N-methyl—D-aspartate receptor 1,NMDAR1)基因的可行性,为在体条件下研究WSLP运载siRNA沉默NMDAR1治疗慢性疼痛等疾病打下基础。方法先合成WSLP并与NMDAR1siRNA连接成WSLP/siRNA复合物,观察其在血清中的稳定性及其对PC12细胞的毒性;然后将PC12细胞通过随机数字表法分为阴性转染组(单纯siRNA转染PC12细胞)、对照转染组(WSLP/乱序siRNA复合物转染PC12细胞)及WSLP转染组(WSLP/siRNA转染PC12细胞),通过实时-聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫蛋白印迹法(western-blot)检测各组NMDAR1转录水平及蛋白水平基因表达的变化。结果WSLP/NMDAR1/siRNA在血清中的稳定性高,对PC12细胞几乎无毒性。与阴性转染组(0.69±0.18、4.36±1.02)相比,WSLP转染组(0.35±0.21、1.96±0.48)转录水平NMDAR1的基因表达降低50%,蛋白表达水平降低55%,差异均有统计学意义(P〈0.01),阴性转染组和对照转染组(0.64±0.13、4.32±1.09)之间的基因表达水平差异无统计学意义。结论离体条件下WSLP可有效运载siRNA沉默NMDAR1基因的表达。
于英妮
陆建华
施冲
曾因明
关键词:
小干涉RNA
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