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排序方式：

多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析被引量：1: 2011年; 从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。; 李永光李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠Radu Blaga付宝权; 关键词：脑多头蚴克隆

多头带绦虫脑多头蚴cDNA表达文库的构建及初步分析被引量：2: 2011年; 从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA，以Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA，利用LambdaZAPIIXR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴eDNA表达文库。从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行PCR，确定文库重组率和插入外源基因片段大小，鉴定文库质量。结果表明脑多头蚴eDNA表达文库的原始库容量为1．0×10。pfu，扩增后文库滴度为1．6×10^9pfu／mL。随机挑选的165个噬菌斑克隆中，0．25kb以上的克隆155个，重组率为93．9％，对其中0．5kb以上的115个克隆测序共获得104个表达序列标签（EST），分析后得到96个单一EST序列（UniqueEST），其中20个EST与绦虫基因有同源性，38个EST与吸虫基因有同源性，4个EST与线虫基因有同源性，17个EST与其他物种有同源性，其余17个EST没有同源基因。这些EST编码的氨基酸序列有多头带绦虫六钩蚴Tml6抗原、猪带绦虫副肌球蛋白、猪带绦虫免疫原蛋白Ts76等绦虫抗原的同源蛋白以及烯醇化酶等一些酶类、热休克蛋白、肌动蛋白、核糖体蛋白等同源蛋白。; 李文卉王建魁盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠罗建勋RaduBlaga付宝权; 关键词：脑多头蚴 CDNA表达文库表达序列标签

多头带绦虫Tm16与Tm18抗原基因的克隆及原核表达被引量：1: 2011年; 为原核表达Tm16和Tm18重组蛋白,本研究以自然感染羊源脑多头蚴原头节基因组DNA为模板分别扩增Tm16和Tm18抗原基因全基因片段,测序鉴定后合成其开放阅读框架DNA片段,将基因组序列中的内含子去除并对其稀有密码子进行改造优化,构建重组表达质粒pGEX-Tm16和pGEX-Tm18。转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物并进行纯化。结果显示:在大肠杆菌中表达出带有GST标签的大小约为39.6 ku和39.4 ku的重组蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性的GST-Tm16及GST-Tm18重组蛋白,western blot分析表明重组蛋白均能够被兔抗GST单克隆抗体特异性识别。; 李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠罗建勋BLAGA R付宝权; 关键词：原核表达

多头带绦虫甘肃分离株分子COⅠ基因部分序列比较分析被引量：6: 2010年; 应用线粒体DNA中的细胞色素c氧化酶亚基I（COI）基因作为分子标记,对我国甘肃省景泰和平凉地区10个绵羊源脑多头蚴进行分析,与已知带属绦虫种的相应序列进行相似性比较,下载GenBank数据库的带属绦虫COI基因片段序列构建系统进化树,分析其分类及亲缘关系.结果表明,所有多头带绦虫分离株均成功扩增出444 bp的COI基因片段,去除引物序列后多头带绦虫分离株的COI基因片段为396 bp,可以分为4类,共有5个核苷酸变异位点,变异率为0.25%～1.26%.基于COI核苷酸序列的系统进化树表明所有T.multiceps分离株构成一个分支,可分为2个亚群.T.multiceps与T.krabbei 的亲缘关系最近,其次为T.serialis,T.asiatica,T.saginata,与T.ovis等其他带属绦虫关系较远,与T.mustelae关系最远.COI基因序列在种内相对保守,又存在一定的种间差异,可作为带属绦虫分类鉴定研究的分子标记.; 李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠罗建勋R. Blaga付宝权; 关键词：脑多头蚴 COI 系统进化

多头带绦虫TPx基因片段的克隆及原核表达被引量：4: 2009年; 从自然感染的病羊脑内采集多头蚴原头节,提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因片段,PCR产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后测序,发现克隆到的TmTPx基因片段开放阅读框为453 bp,编码150个氨基酸。对TmTPx基因片段进行限制性酶切后连接到表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒pGEX-4T-TmTPx,转化大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切分析、PCR及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21,以IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物。结果显示,成功表达了大小约为43 ku的融合蛋白。对表达产物纯化后免疫家兔,采集血清用ELISA测定抗体效价,发现兔抗TmTPx重组蛋白的抗体能够与多头蚴原头节抗原发生特异性反应,说明该重组蛋白具有较好的免疫原性。; 李永光李文卉李航盖文燕王鸿盛姚菊霞王艳华张德林贾万忠Radu Blaga付宝权; 关键词：多头蚴重组蛋白免疫原性

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政府间科技合作项目(39-18)