四川省卫生厅科研基金(100264)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：泸州医学院附属医院郑州市第一人民医院更多>>
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- ERK1/2和PI3K/PKB信号通路在调节大鼠肺动脉平滑肌细胞外基质基因表达中的作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路抑制剂PD98059和三磷酸肌醇激酶(PI3K/PKB)信号通路抑制剂LY294002在结缔组织生长因子(CTGF)调控大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)外基质异常沉积中的作用机制。方法体外培养SD大鼠PASMC,并分为空白组、CTGF组、CP组(CTGF+PD98059)、CL组(CTGF+LY294002)、CPL组(CTGF+PD98059+LY294002)。实时荧光定量RT-PCR检测CTGF、PD98059和LY294002对PASMC CollagenⅢ和Fibronectin mRNA表达的影响,免疫组化和Western-blot检测其对CollagenⅢ蛋白表达的影响。结果与空白组比较,CTGF(50 ng/ml)刺激PASMC 48 h后CollagenⅢ和Fibronectin mRNA表达明显增强,72 h后PASMC CollagenⅢ蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与CTGF组比较,经PD98059(20μmol/L)和(或)LY294002(10μmol/L)干预48 h后CollagenⅢ和Fibronectin mRNA表达明显减弱,72 h后PASMC CollagenⅢ蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);且PD98059和LY294002联合干预PASMC CollagenⅢ和Fibronectin mRNA表达下调更显著。结论 CTGF可刺激PASMC细胞外基质CollagenⅢ和Fibronectin mRNA表达,可能是促进肺动脉高压肺血管重构中基质沉积的重要因素之一。PD98059和LY294002可分别通过抑制ERK1/2和PI3K/PKB信号通路干预CTGF的生物学效应。
- 胡煜李刚贾鹏孙玉琴付杰卢翠侠刘斌
- 关键词：结缔组织生长因子肺动脉平滑肌细胞细胞外基质
- 整合素β3受体信号途径在结缔组织生长因子调控肺动脉平滑肌细胞增殖与迁移和细胞外基质基因表达中的作用被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨整合素β3受体信号途径在结缔组织生长因子（CTGF）促进肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质基因表达中的作用机制研究.方法 分离并培养SD大鼠肺动脉中膜平滑肌细胞,实验使用第3～7代细胞；细胞分为3组：（1）空白组：不加任何刺激因子；（2）CTGF组：培养体系中加入CTGF（50 ng/ml）；（3）CTGF＋整合素β3抗体组：培养体系中加入CTGF（50ng/ml）及整合素β3抗体（10 mg/L）.以上3组细胞中加入CTGF （50 ng/ml）和浓度分别为0、5、10、15、20mg/L的整合素β3抗体,共同孵育24、48、72及96 h,采用WST-1细胞增殖试剂检测细胞增殖的变化；应用Transwell方法在相差显微镜下观察细胞迁移数目的变化；应用荧光定量RT-PCR检测Ⅰ型胶原α1、Ⅲ型胶原α1和纤维连接蛋白1 mRNA表达；应用Western blot和免疫组化检测纤维连接蛋白表达.结果 整合素β3抗体对CTGF促肺动脉平滑肌细胞增殖有明显抑制作用（P＜0.05）,其中整合素β3抗体浓度为10 mg/L时抑制率最高.CTGF组肺动脉平滑肌细胞迁移数目（25.00±1.57）个,较空白组（11.00±2.08）个多（P＜0.01）；CTGF＋整合素β3抗体组肺动脉平滑肌细胞迁移数目（ 17.00±4.16）个,较CTGF组少（P＜0.05）；与对照组比较,CTGF组肺动脉平滑肌细胞Ⅰ型胶原α1（4.28±0.33）、Ⅲ型胶原α1（4.41±0.35）和纤维连接蛋白1（4.05±0.33） mRNA表达增加（P＜0.01）,呈时间依赖性；与CTGF组比较,CTGF＋整合素β3抗体组Ⅰ型胶原α1 （3.38 ±0.30）、Ⅲ型胶原α1（3.40±0.30）和纤维连接蛋白1（3.12±0.29）mRNA表达减少（P＜0.05）,但较对照组表达增加（P＜0.05）；与对照组比较,CTGF组能明显增加肺动脉平滑肌细胞纤维连接蛋白表达（P＜0.01）,整合素β3抗体能抑制CTGF诱导的纤维连接蛋白表达（P＜0.01）,但纤维连接蛋白表达较对照组仍有增加（P＜0.01）.结论 整合素β3信号途
- 李刚胡煜贾鹏付杰卢翠侠孙玉琴刘斌
- 关键词：整合素Β3结缔组织生长因子细胞外基质
- 结缔组织生长因子-整合素β1受体信号途径在肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨整合素β1受体在结缔组织生长因子（CTGF）促进肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖、迁移和细胞骨架变化中的作用,及其受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用机制.方法 体外培养SD大鼠肺动脉中膜平滑肌细胞.应用水溶性四氮唑（WST-1）检测整合素β1抗体对CTGF促进PASMC增殖的影响;Transwell小室检测整合素β1抗体对CTGF促进PASMC迁移的影响;考马斯亮蓝R250染色和激光共聚焦显微镜观察整合素β1抗体对CTGF促进PASMC细胞骨架的变化.结果 不同浓度整合素β1抗体对CTGF促进PASMC增殖有明显抑制作用（P＜0.05）,并呈浓度依赖性,随着整合素β1抗体浓度的增加,细胞增殖受抑越明显;其中15 mg/L整合素β1抗体对PASMC增殖抑制率在72 h最高.15 mg/L整合素β1抗体组穿越Tr-answell的细胞数量与CTGF组比较明显减少,差异有统计学意义（P＜0.01）,并能够短暂引起细胞骨架的改变.结论 整合素β1抗体对CTGF促进PASMC的增殖和迁移有抑制作用,整合素β1受体信号可能在CTGF介导的PASMC增殖、迁移和细胞骨架改变等生物学行为中起重要作用.
- 付杰卢翠侠李刚胡煜贾鹏赵建刘斌
- 关键词：整合素结缔组织生长因子肺动脉平滑肌细胞迁移
- 结缔组织生长因子-整合素αvβ5受体信号途径在肺动脉平滑肌细胞外基质基因表达中的作用被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨整合素αvβ5在结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）促进肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC）细胞外基质沉积中的作用;明确细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）信号通路是否参与了CTGF-整合素αvβ5信号途径所致PASMC上述生物学行为改变的过程;初步探讨CTGF-整合素αvβ5受体信号途径在肺动脉高压肺血管重构中的作用.方法 （1）体外培养SD大鼠PASMC,并用α-SMA免疫组织化学染色鉴定细胞纯度.对照组：含10％胎牛血清的M199培养基;CTGF刺激组（CTGF组）：含10％胎牛血清的M199培养基＋50 ng/mlCTGF,培养72 h;CTGF＋整合素αvβ5单克隆抗体P1F6（10 μg/ml）刺激组（抗体组）：含10％胎牛血清的M199培养基＋50 ng/ml CTGF＋ 10 μg/ml P1F6,培养72 h.（2）实时荧光定量RT-PCR检测CTGF、P1F6对Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达的影响.（3）采用蛋白质印迹检测P1F6、CTGF对CollagenⅢ、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达变化的影响.结果 （1）免疫组织化学染色显示,α-SMA染色阳性细胞大于95％,表明其为PASMC.（2）RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,CT-GF作用于PASMC 72 h,CTGF能显著促进Collagen Ⅰ-α1、CollagenⅢ-α1、Fibronectin-1 mRNA表达（P＜0.05）;使用P1F6后与CTGF组比较,3种基因mRNA表达均减少（P＜0.05）,但均较对照组表达增加.（3）蛋白质印迹检测结果表明,CTGF作用于PASMC 72 h,与对照组比较CTGF明显促进CollagenⅢ蛋白表达（P＜0.05）;应用P1F6后CollagenⅢ蛋白表达较CTGF组减少（P＜0.05）,但较对照组表达增加.用蛋白质印迹检测P1F6、CTGF作用PASMC 72 h后ERK1/2磷酸化水平,提示CTGF作用PASMC 72 h后ERK1/2磷酸化程度增加,加入P1F6封闭整合素αvβ5后ERK1/2磷酸化程度降低,pERK 1/2与ERK1/2比值减小（P＜0.05）.结论 整合素αvβ5介导了CTGF诱导的PASMC细胞外基质沉积;ERK1/2信号通路参与CTGF-整合素αvβ
- 卢翠侠付杰李刚胡煜贾鹏赵建陈芃螈刘斌
- 关键词：整合素结缔组织生长因子肺动脉平滑肌细胞细胞外调节蛋白激酶
