国家自然科学基金(30801289)
- 作品数：5 被引量：16H指数：2
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- 抑制Notch信号通路对人牙髓细胞的生物学效应被引量：1
- 2014年
- 目的 评价抑制Notch信号通路后人牙髓细胞在细胞、代谢酶、基因3个水平的老化指标变化,探讨Notch信号通路对人牙髓细胞老化的作用.方法 采用γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S苯基甘氨酸t-丁酯抑制Notch信号通路后（抑制组）观察细胞形态,以正常培养基中添加抑制剂的溶剂二甲基亚砜为阴性对照组,检测两组碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性、细胞老化相关β-半乳糖苷酶以及老化相关基因p53的表达.结果 抑制Notch信号通路后人牙髓细胞从第10代开始出现细胞形态老化的表现.抑制组自第8代即出现ALP阳性细胞减少,ALP活性下降为（35.36±2.55） U/g,显著低于阴性对照组[（49.76±4.30） U/g]（t=4.989,P=0.008）.抑制组第8代细胞即开始出现老化相关β-半乳糖苷酶阳性染色,第10代时出现大量阳性染色细胞.第10代时,抑制组细胞p53基因相对表达量（1.7±0.4）显著高于阴性对照组（设为1.0）（t=3.581,P=0.012）.结论 抑制Notch信号通路后,人牙髓细胞在细胞、代谢酶、基因3个水平均出现老化前移表现,提示Notch信号通路可以影响人牙髓细胞的生命周期.
- 邹晓英庄姮岳林高学军
- 关键词：细胞生物学细胞衰老牙髓细胞
- DAPT对人牙髓细胞Notch信号通路和细胞增殖的影响被引量：7
- 2013年
- 目的:探讨γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯{N-[N-(3,5-difluorophena-cetyl-L-alanyl)]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT}对人牙髓细胞Notch信号通路是否有抑制作用,及对牙髓细胞增殖能力的影响。方法:收集临床上完整拔除的健康前磨牙或第三磨牙,采用酶消化法进行人牙髓细胞的原代培养和传代培养。从第4代开始在正常培养基中加入终浓度为5μmol/L的γ-分泌酶抑制剂DAPT,选择第4、8、10代细胞为检测细胞,采用实时荧光定量RT-PCR方法和基因芯片检测Notch信号通路相关基因的表达变化,用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞活性,绘制牙髓细胞增殖曲线,评价牙髓细胞的增殖状况。结果:加入DAPT后,实验组牙髓细胞Notch信号通路的下游基因Hes1、Hey1、NR4A2表达下降,同时,第8、10代牙髓细胞的增殖减慢,与对照组相比,差异有统计学意义。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT能有效抑制体外培养人牙髓细胞的Notch信号通路,使人牙髓细胞增殖减慢,影响细胞的正常生命周期。
- 邹晓英庄姮岳林高学军
- 关键词：牙髓细胞信号传导细胞增殖
- 牙乳头细胞多向分化的观察
- 2009年
- 目的:探讨牙乳头细胞中存在的前体细胞类型及其分化特性。方法:分离培养出生后4 d的SD大鼠下颌第一磨牙牙乳头细胞,检测骨钙蛋白(osteocalc in,OCN)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprote in,DSP)的表达。观察出生后1 d的SD仔鼠下颌第一磨牙牙胚、胚胎11 d的下颌突在肾被膜下生长2周后的情况。确定肾被膜下可作为移植区后,将牙乳头细胞团及与成釉器的复合体移植到肾被膜下,24 d后观察所形成的组织结构。结果:体外培养的牙乳头细胞可表达OCN和DSP。出生后1 d的SD仔鼠下颌第一磨牙牙胚、胚胎11 d的下颌突在肾被膜下可继续发育生长。经肾被膜下移植培养后,牙乳头细胞团可生成牙本质样结构和骨样结构,而与成釉器复合后只观察到紧邻支架的牙本质样结构。结论:牙乳头细胞中包含不同类型的前体细胞,其分化方向与所处微环境密切相关。
- 庄姮金岩邹晓英岳林高学军
- 关键词：牙乳头细胞分化牙本质
- 激活Notch信号通路可延迟人牙髓细胞的老化表现被引量：10
- 2014年
- 目的:建立Notch信号通路激活的人牙髓细胞模型,探讨激活Notch信号通路对人牙髓细胞老化的影响。方法:体外培养人牙髓细胞,从第4代开始实验,将牙髓细胞分为激活组和阴性对照组。激活组采用10 mg/L的Jagged1蛋白包被培养皿的方法激活Notch信号通路,阴性对照组的培养皿不做处理。以实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测第4代、第8代、第10代Notch信号通路下游基因Hes1的表达水平。分三个水平观察Notch信号通路激活后人牙髓细胞的变化:(1)细胞水平,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法检测细胞活力改变;(2)代谢酶水平,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性测定试剂盒检测ALP的表达和活性,用衰老相关β-半乳糖苷酶染色方法检测阳性细胞百分率;(3)基因水平,用RT-qPCR检测老化相关基因p53和p16的表达。t检验比较激活组和阴性对照组各指标的差异。结果:采用Jagged1蛋白包被培养皿后,Notch信号通路下游基因Hes1表达增高,表明建立了Notch信号通路激活的人牙髓细胞模型。激活组牙髓细胞与阴性对照组牙髓细胞相比,较晚出现形态显现衰老的细胞,第8代、第10代细胞活力升高,ALP表达量升高;第10代ALP活性升高,β-半乳糖苷酶表达下降;各代p16基因表达水平均降低,第8代、第10代p53基因表达水平降低。结论:Jagged1蛋白可有效激活Notch信号通路,激活Notch信号通路后,人牙髓细胞在细胞水平、代谢酶水平、基因水平均表现出老化延迟的趋势。
- 常思佳邹晓英庄姮岳林高学军
- 关键词：信号传导细胞衰老牙髓
- Notch信号通路与细胞老化的关系
- 2011年
- Notch信号通路是一种高度进化保守的信号通路,它通过受体配体的相互作用转导细胞信号,可影响从无脊椎动物到哺乳动物等多个物种的发育过程,调节细胞的定向分化、组织和器官的发育。近年来的研究,发现Notch信号通路在细胞的老化过程中也起着重要作用,抑制此信号通路可导致细胞在形态、代谢相关酶水平以及基因水平上均产生与正常细胞不同的表现。该文就Notch信号通路与细胞老化关系的研究作一综述。
- 常思佳邹晓英庄姮岳林
- 关键词：细胞NOTCH
