国家自然科学基金(30801275)
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- 稳定表达NDRG2的培养人晶状体上皮细胞株的建立及其对细胞增殖能力的影响
- 2013年
- 目的分别建立人N-Myc下游受调节基因2(N-Myc downstream regulated gene2,NDRG2)表达上调、下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,并观察NDRG2对晶状体上皮细胞增殖能力的影响。方法分别用质粒PLenti6-NDRG2、PLenti6-cherry、PLKO-NDRG2shRNA、PLKO-scramble以及PAX2和PMD2G构建慢病毒载体,感染培养人晶状体上皮细胞系(SRA01/04),通过药物筛选获得NDRG2表达上调、下调的晶状体上皮细胞株。采用Real-time PCR、Western blot等方法检测NDRG2的表达。通过MTT、EdU等方法检测所获得细胞株的生长曲线及增殖能力。结果 NDRG2 mRNA在过表达对照组和过表达组细胞中的相对表达量分别为1.04±0.38、6.57±0.97,两组间差异有统计学意义(P<0.05);NDRG2mRNA在干涉对照组和干涉组细胞中的表达量分别为1.05±0.31、0.49±0.14,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。NDRG2过表达和干涉慢病毒载体感染后,SRA01/04细胞中NDRG2 mRNA的表达分别出现了明显的上调和下调。Western blot检测结果显示:与各自对照组相比,在NDRG2过表达组和干涉组细胞中,NDRG2蛋白的表达量分别出现了明显的升高和降低。MTT检测结果显示:与其对照组相比,NDRG2过表达组细胞生长曲线表现出降低趋势,干涉组细胞生长曲线表现出升高趋势,在培养后5d检测时差异有统计学意义(P<0.05)。EdU检测结果显示:过表达对照组Cherry-SRA01/04细胞、过表达组NDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(41.57±2.53)%、(33.53±3.03)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05),提示NDRG2表达上调后DNA的合成受到抑制。干涉对照组Scramble-SRA01/04细胞和干涉组shNDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(27.70±1.05)%、(46.43±4.01)%,差异有统计学意义(P<0.05),提示NDRG2表达下调后DNA合成速度加快。结论通过病毒载体感染联合药物筛选,分别建立了NDRG2表达上调和下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,且NDRG2基因对晶�
- 张丽霞王雨生安洁张健张自峰
- 关键词：NDRG2晶状体上皮细胞细胞增殖能力
