重庆市卫生局科研项目(072019)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：姜政杨丽娟王丕龙陶小红向廷秀更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院宁夏医科大学附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白基因UreI载体的构建、融合表达及纯化被引量：1
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的融合表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法利用分子克隆技术以Hp DNA染色体为模板,扩增Hp UreI基因片段,将目的基因UreI与载体pET32a(+)分别经kpnⅠ和HindⅢ双酶切,纯化,连接。筛选阳性重组载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达pET32a(+)/UreI融合蛋白。表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经酶切、测序分析表明,插入的基因片段为Hp UreI编码基因,由585 bp组成,与GenBank相应菌株HP AM417 609序列完全一致,无碱基突变。经SDS-PAGE分析显示重组质粒pET32a(+)/UreI在原核细胞中得到了高效融合表达,其重组融合蛋白分子量为130 ku,经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达95%以上,Western blot分析显示,该重组融合蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的反应原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pET32a(+)/UreI,并在原核细胞中得到了高效融合表达。
- 杨丽娟姜政向廷秀陶小红王丕龙
- 关键词：幽门螺杆菌原核表达
- 幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI基因的克隆、表达及纯化
- 2009年
- 目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素通道蛋白基因UreI的原核表达载体,并在E.coliBL21中表达,为进一步研究UreI的功能奠定基础。方法从前期已构建好的融合表达质粒pET32a(+)/UreI中,酶切目的基因UreI,并胶回收目的基因片段,将目的基因UreI与载体pQE3.0分别经HindIII和KpnI双酶切、纯化、连接,转化并筛选含有目的基因的重组质粒pQE30/UreI,并在E.coliBL21中表达,表达产物经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,用SDS-PAGE及Western blot分析。结果经KpnI、HindIII双酶切后,小片段大小为585bp,为插入的基因片段HpUreI基因,经KpnI、NbaI双酶切,小片段为1749bp,与实验设计相一致。重组质粒pQE30/UreI经SDS-PAGE分析显示,在原核细胞中得到了高效表达,目的蛋白分子量为21kD左右,以包涵体形式表达。通过Quantity-one软件分析,其表达量约占菌体总蛋白的20%。经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,其纯度达90%以上,Western blot分析显示,该目的蛋白可被6-His鼠抗单克隆抗体所识别,具有良好的免疫原性。结论成功地克隆和构建了原核表达载体pQE30/UreI,并在原核细胞中得到了高效表达。
- 杨丽娟姜政王静向庭秀张特君
- 关键词：幽门螺杆菌原核表达
