广东省科技攻关计划(200813030301349)
- 作品数：2 被引量：10H指数：1
- 相关作者：陈小佳万艳李丽玲谢秋玲张勇仓更多>>
- 相关机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 在CHO细胞中表达重组sPDGFRα-Fc及其抑制细胞增殖的研究
- 2009年
- 目的:筛选在CHO-K1中高表达sPDGFRα-Fc的重组细胞株,并对分泌到培养基的表达产物进行抑制细胞增殖的活性分析。方法:构建带有Fc标签的sPDGFRα基因重组表达载体pIRES-Neo3-sPDGFRα-Fc;在脂质体介导下,转染CHO-K1细胞,G418筛选2周后获得若干单克隆细胞株,随机挑取单克隆细胞进一步放大培养,RT-PCR筛选阳性单克隆细胞;Real-Time PCR方法鉴定各阳性细胞株中的sPDGFRα-Fc基因的转录水平,Western blot检测进一步验证各细胞中目的蛋白表达水平;筛选出表达最高的细胞株,更换无血清培养基培养,取含有可溶性sPDGFRα的培养基上清冻干浓缩,MTT法检测目的蛋白的抑制细胞增殖能力。结果:成功构建重组表达载体并在CHO-K1中成功表达,各阳性单克隆细胞株的表达量有差异且在转录水平和蛋白表达水平表现一致,从无血清培养基中收集的可溶性sPDGFRα-Fc明显抑制血管内皮细胞的增殖。结论:成功筛选获得CHO-K1中高表达sPDGFRα-Fc的重组细胞株,获得的可溶性sPDGFRα-Fc能抑制细胞增殖,有望成为治疗因PDGF及其受体引起的多种疾病的药物。
- 万艳李丽玲谢秋玲郭淑军秦丽张勇仓陈小佳
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞抑制细胞增殖
- 应用实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数的新方法被引量：10
- 2009年
- 介绍一种采用实时荧光定量PCR法鉴定重组细胞株基因组中外源基因拷贝数的方法.首先根据研究对象建立标准品,以拟检测的外源基因设计特定的引物,得出标准曲线,然后在不同重组细胞株中对外源基因进行Real-Time PCR鉴定,根据结果与标准品比对得出实际的拷贝数.结果表明:以转染sPDGFRα基因的重组CHO-K1细胞为例,采用该方法,利用标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系,并且具有较大的线性范围(101-105拷贝);测得各重组细胞株外源基因拷贝数不同,3次独立实验表明结果一致.与传统杂交技术鉴定转基因拷贝数相比,该方法具有高效省时、更稳定、高通量和低成本等优点.
- 万艳李丽玲陈小佳
- 关键词：外源基因拷贝数实时定量PCR
