河南省基础与前沿技术研究计划项目(102300410146)
- 作品数：7 被引量：27H指数：3
- 相关作者：惠丰立柯涛袁伟刘思彤徐龙龙更多>>
- 相关机构：南阳师范学院河南师范大学湖北大学更多>>
- 发文基金：河南省基础与前沿技术研究计划项目河南省教育厅自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学环境科学与工程更多>>
- 人溶菌酶基因在乳酸克鲁维酵母中的表达被引量：2
- 2017年
- 人溶菌酶是一种天然广谱抑菌物质,在食品和医药工业有潜在应用前景。为获得高活性的人溶菌酶制剂,采用乳酸克鲁维酵母表达系统,对经密码子优化的人溶菌酶基因(h LYZ)进行分泌表达。将人工合成h LYZ插入到乳酸克鲁维酵母表达载体p KLAC1,构建重组载体p KLAC1-h LYZ,并用电脉冲法将SacⅡ线性化的重组质粒转化到乳酸克鲁维酵母GG799中。通过全细胞PCR鉴定,最后获得了一株多拷贝整合的基因工程菌h LYZ1。工程菌可以分泌表达分子量约14 ku的目的蛋白质,与预期大小相符。摇瓶发酵培养128 h,酶活最高达到1430 U/mL。抗菌活性检测结果显示,重组人溶菌酶对溶壁微球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有较好的溶菌活性。本研究成功地在乳酸克鲁维酵母中表达了重组人溶菌酶,表达的蛋白具有较高的酶活性,试验结果为利用乳酸克鲁维酵母表达系统规模化生产重组人溶菌酶奠了基础。
- 刘思彤徐龙龙衣泽浩刘晓静惠丰立
- 关键词：人溶菌酶乳酸克鲁维酵母分泌表达抗菌活性
- 均匀设计法优化廉价型牛凝乳酶工程菌发酵培养基被引量：5
- 2011年
- 为了获得生产用廉价型牛凝乳酶工程菌发酵培养基,通过单因素试验考察发酵培养基中各组分对产酶的影响。结果显示:葡萄糖、玉米浆、酵母提取物、尿素质量浓度对产酶影响显著。以上述因素作为随机因子,进行均匀设计试验,采用逐步回归方法对试验结果进行分析。结果表明:在葡萄糖45g/L、玉米浆17g/L、酵母提取物6g/L、尿素12g/L的条件下,凝乳酶活性达342.86SU/mL,比优化前提高了1.22倍。所得培养基为重组牛凝乳酶的高效低成本生产提供了参考。
- 袁伟惠丰立柯涛程民杰赵金梅
- 关键词：凝乳酶工程菌均匀设计培养基
- 骆驼凝乳酶原基因在乳酸克鲁维酵母中的重组表达被引量：3
- 2017年
- 骆驼凝乳酶具有独特的凝乳特性,在干酪加工制作中具有潜在应用前景。为获得高活性的骆驼凝乳酶制剂,采用乳酸克鲁维酵母GG799为宿主,首次对经密码子优化的骆驼凝乳酶原(c PC)基因进行表达。将人工合成cPC基因插入乳酸克鲁维酵母表达载体pKLAC1,构建重组载体pKLAC1-c PC,并用电脉冲法将SacⅡ线性化的重组质粒转化到乳酸克鲁维酵母GG799中。通过含1%酪蛋白的YEPD平板活性筛选,全细胞PCR鉴定,最后获得一株多拷贝整合的基因工程菌cPC 1。该菌株可分泌表达cPC,经SDS-PAGE分析,重组cPC的分子质量约为41 ku,符合预期;酸化处理后cPC的分子质量约为36 ku,可正确自我剪切。摇瓶发酵培养120h,酶活最高达230 SU/m L。分别以牛乳、骆驼乳和牦牛乳作为底物检测酶活性,结果重组骆驼凝乳酶对3种动物乳均具有凝乳活性。
- 徐龙龙刘思彤任永成惠丰立
- 关键词：乳酸克鲁维酵母分泌表达
- 不同沉淀方法对外源表达凝乳酶活性的影响被引量：1
- 2015年
- 从粗提重组凝乳酶的得率、保存活性2个方面比较了乙醇沉淀法和硫酸铵沉淀法的差别。结果表明,相对于硫酸铵沉淀法,乙醇沉淀法获得蛋白的量相差不是很大,但是乙醇沉淀法所获得蛋白的单位效价是硫酸铵沉淀法的1.27倍,且乙醇沉淀法所得产物的比活性提高了16.78%。综合考虑重组凝乳酶的得率与活性,用乙醇沉淀的效果较好。
- 邓培渊郭红玲袁伟李玉华
- 关键词：活性硫酸铵盐析
- 骆驼凝乳酶工程菌发酵培养基的优化被引量：3
- 2017年
- 凝乳酶可以专一地切割乳中κ-酪蛋白的Phe 105-Met 106之间的肽键,引起蛋白质凝聚,在乳制品加工中应用广泛。目前对牛凝乳酶的研究比较成熟,而对骆驼凝乳酶的研究报道较少。本研究为获得高效骆驼凝乳酶发酵培养基,在单因素实验的基础上,采用Plackett-Burman试验考察培养基中的8个成分对骆驼凝乳酶产量的影响。研究表明葡萄糖、玉米浆、尿素的对产酶影响显著。采用最陡爬坡试验逼近最大响应区间,利用Box-Behnken响应面法对3个主要影响因素进行分析,得到高效发酵培养基配方:葡萄糖86.6 g/L、玉米浆56.9 g/L、酵母粉4 g/L、磷酸二氢钾3 g/L、尿素18 g/L、硫酸锌3 g/L、硫酸氨1 g/L和氯化镁0.3 g/L。在该条件下凝乳酶活达到431.25 U/m L,较优化前的基础培养基(207.03 SU/m L)提高了2.08倍。再利用1L发酵罐进行发酵培养,凝乳酶活性达到530 SU/m L,约为摇瓶培养最高酶活性的1.22倍。
- 刘开放王敏郑君刘天天惠丰立
- 关键词：响应曲面法培养基优化
- 活性红BF-3BN脱色菌群的构建及特性研究被引量：7
- 2011年
- 采用梯度压力式驯化法,从河南某印染厂的活性污泥中富集筛选一组活性红BF-3BN高效脱色菌群AR1。经菌株分离和16S rDNA测序分析,确定菌群内微生物分别归属Clostridium sp.、Pseudomonas sp.和Shewanella sp.等3个属。染料脱色实验结果表明,在活性红BF-3BN起始浓度为200 mg/L的脱色培养基中,菌群AR1脱色的适宜pH 5～10,温度25～35℃,时间24 h,能达到95%以上的最大脱色率。该菌群对高浓度活性红BF-3BN有较好的脱色效果,当活性红BF-3BN浓度低于500 mg/L时,脱色率高于90%,即使在含有600 mg/L活性红BF-3BN的脱色培养基中,脱色率仍然能达到80%以上。
- 惠丰立牛秋红刘征柯涛陈长路袁伟
- 关键词：菌群
- 牛凝乳酶原基因的合成及其在乳酸克鲁维酵母中的表达被引量：7
- 2010年
- 凝乳酶在奶酪加工中应用广泛,为获得高活性的凝乳酶制剂,采用乳酸克鲁维酵母为宿主,首次对经密码子优化的牛凝乳酶原基因进行表达。利用DNAWorks3.0软件辅助设计,用两步PCR法合成了小牛凝乳酶原基因(GenBank Accession No.AA30448)。将该基因插入酵母表达载体pKLAC1,构建了重组载体pKLAC1-Prochy,并用电脉冲法将线性化的重组质粒转化到乳酸克鲁维酵母GG799中。通过含1%酪蛋白的YEPD平板活性筛选,PCR鉴定,最后获得了一株多拷贝整合的基因工程菌chy1。该菌株可分泌表达牛凝乳酶原,经SDS-PAGE分析,证明重组牛凝乳酶原的分子量约为41kDa,符合预期大小,酸化处理后为36kDa,证明可以正确自我剪切。液体培养96h后,酶活最高达到99.67SU/mL。分别以半乳糖和葡萄糖为碳源的条件下表达,其酶活性差异不大,说明在发酵期间,可以不经过半乳糖诱导即可产生高水平的牛凝乳酶原产物。该工程菌的获得为进一步优化产酶条件及放大工艺提供了条件,并为凝乳酶的工业化生产奠定了基础。
- 袁伟柯涛杜敏华褚学英胡凡惠丰立
- 关键词：乳酸克鲁维酵母基因合成密码子优化
