山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(BS2009NY002)
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 相关作者：杨宏军王长法仲跻峰何洪彬高运东更多>>
- 相关机构：山东省农业科学院山东师范大学四川农业大学更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金山东省农业重大应用技术创新课题国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 重组金黄色葡萄球菌FnbpA亚单位疫苗的研制被引量：1
- 2011年
- 【目的】制备金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)基因工程亚单位疫苗,并以小白鼠为试验模型,检测其免疫保护效果。【方法】诱导表达FnbpA,经组氨酸标签亲合纯化后用Bradford法测定纯化的目的蛋白的含量,并检测其黏附活性及对动物的安全性。制备FnbpA亚单位疫苗,经无菌检验及安全检验后,进行免疫保护试验,用ELISA方法检测被免疫小鼠血清中的抗体效价,通过腹腔攻毒试验检测疫苗的免疫保护力。【结果】纯化的目的蛋白在80 ku处出现单一条带,蛋白质量浓度为0.245 mg/mL。细菌黏附抑制试验发现,经FnbpA蛋白预处理过的MDBK细胞黏附的金黄色葡萄球菌数较对照极显著减少;动物安全性试验显示,小鼠注射FnbpA亚单位疫苗后均健活,表明制备的FnbpA亚单位疫苗安全性良好。所有免疫组小鼠于首免后7 d即可在血清中检测到特异性抗体,抗体效价逐渐上升,在21 d达到最高值,之后逐渐降低。【结论】纯化的FnbpA蛋白达到了电泳级纯度,且依然保持良好的黏附活性;制备的FnbpA亚单位疫苗作用机体产生的抗体水平符合抗体消长规律,且表现出良好的免疫保护力。
- 张海燕杨宏军王长法何洪彬仲跻峰马卫明
- 关键词：基因工程亚单位疫苗免疫效力小白鼠
- 牛结核杆菌的mpb-83基因扩增和表达
- 【目的】扩增牛结核杆菌mpb-83并在大肠杆菌中表达,为今后临床诊断奠定基础。【方法】用PCR方法扩增牛结核杆菌mpb83基因,将其连接到T3克隆载体,然后把它们克隆到原核表达载体PET-32a中,构建重组质粒PET-m...
- 李树春斯肯达尔杨宏军何洪斌王长法杨少华高运东仲跻峰
- 关键词：克隆原核表达纯化
- 文献传递
- 金黄色葡萄球菌Coa基因的克隆、表达及生物活性检测
- 2011年
- 【目的】克隆金黄色葡萄球菌血浆凝固酶(Coa)基因,并在大肠杆菌中进行融合表达,分析重组蛋白的生物活性。【方法】用PCR法扩增金黄色葡萄球菌Coa基因,构建Coa基因原核表达载体pET32a(+)/coa,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平;将重组蛋白纯化后,测定其血浆凝固效价。【结果】扩增出了2 106 bp的Coa基因,其包含1个完整的开放阅读框,编码含701个氨基酸的成熟多肽;IPTG诱导后该基因表达的融合蛋白分子质量为100 ku,目的蛋白产量占菌体总蛋白的13%;纯化的重组蛋白含量为0.047 mg/mL,其对兔血浆凝固效价为0.012 mg/mL。【结论】成功地克隆、表达了金黄色葡萄球菌Coa基因,Coa凝固血浆效价为0.012 mg/mL。
- 张洪波杨宏军葛利江何洪彬杨少华王长法高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌克隆活性分析
- 牛结核杆菌mpb-83基因的扩增和表达
- 2010年
- 采用PCR方法扩增牛结核杆菌mpb-83基因,并将其连接到T3克隆载体,然后克隆到原核表达载体PET-32 a中,构建重组质粒PET-32 a-mpb-83。以重组质粒转化大肠杆菌BL21,用NI柱纯化,最后纯化产物在SDS-PAGE中检测。结果得到约664 bp的目的片段,且MPB-83可在大肠杆菌BL21中高效表达。
- 李树春斯肯达尔杨宏军何洪斌王长法杨少华高运东仲跻峰
- 关键词：克隆原核表达
- 奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌溶血型及溶血素基因分布的研究
- 目的:建立金黄色葡萄球菌溶血型分型及hla基因、hlb基因分型的方法,初步研究生鲜牛乳中金黄色葡萄球菌溶血素基因的分布状况,并探讨溶血型与溶血素基因分型的相关性。方法:利用表型生化分型,利用PCR分型技术对其进行分型,电...
- 王飞刘代成杨宏军何洪斌王长法高运东仲跻峰
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎溶血素基因
- 文献传递
- 山东省牛源金黄色葡萄球菌耐药谱分析及mecA耐药基因检测被引量：5
- 2012年
- 采用纸片扩散法测定金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)对6种抗生素的敏感性。结果表明,在测定的121株金葡菌中,耐苯唑西林金葡菌(MRSA)为26株,占21.5%;对苯唑西林敏感菌(MSSA)为93株,占76.9%;中介菌株为2株,占1.6%。金葡菌对6种抗生素耐药率最低的是头孢噻肟为2株,占1.6%。mecA基因的PCR扩增结果显示:所有的MSSA mecA基因均阴性,中介株mecA基因阳性1株,而MRSA中mecA基因阳性株为9株。MSSA对大部分抗生素仍保持良好的敏感性,而MRSA表现为多重耐药性,PCR技术可以作为快速检测金葡菌耐药基因的有效方法。
- 李秀梅杨宏军肖红王慧红王青泉何洪彬宋玲玲侯佩莉田晶
- 关键词：金黄色葡萄球菌耐药性耐药基因
- 应用双重PCR方法对奶牛乳腺炎金葡菌溶血毒素进行分型被引量：2
- 2010年
- 溶血毒素是一种胞外毒素,是金葡菌主要毒力因子之一。金葡菌人源菌株多数产α-溶血素,而从动物分离的菌株多产β-溶血素,但是引起奶牛乳腺炎的金葡菌中α、β型未见相关报道。试验根据GenBank公布的α和β溶血素序列,设计双重PCR引物,对在山东省内20多个规模化奶牛场乳腺炎病例中分离得到的金葡菌提取模板,检测奶牛乳腺炎金葡菌溶血素基因型,为研制奶牛乳腺炎金葡菌基因工程疫苗提供科学的依据。试验建立了双重PCR快速检测金葡菌溶血毒素分型的方法,此法特异性好,准确性高,检测快速,证实应用此法对奶牛乳腺炎金葡菌溶血毒素进行分型是可行的。
- 王飞刘代成杨宏军何洪彬王长法高运东仲跻峰
- 关键词：金葡菌溶血毒素双重PCR
- 金黄色葡萄球菌攻击下小鼠泌乳期乳腺炎症病理机制分析被引量：2
- 2011年
- 通过观察不同剂量(E1:10 CFU/μl;E2:20 CFU/μl;E3:100 CFU/μl;E4:200 CFU/μl;E5:2 000CFU/μl)金黄色葡萄球菌攻击下的小鼠泌乳期乳腺炎症病理变化,选择最佳剂量建立小鼠乳腺内感染模型。结果表明:试验组乳腺组织中分离的细菌数呈先升高后下降的趋势,E3达到最高。组织形态学观察结果:对照组腺泡结构完整;E1组和E2组腺泡内主要以浆液性渗出为主;E3组腺泡壁增厚,腺泡腔内嗜中性粒细胞(PMN)增多;随着剂量的增大E4和E5组腺泡壁破裂,甚至个别样品出现坏死灶。与对照组相比,E3组小鼠乳腺组织中TNF-α、IL-2和IL-6含量极显著升高(P(0.01)。100 CFU/μl(E3)剂量金黄色葡萄球菌攻击下的小鼠乳腺炎性反应与炎症的免疫病理过程一致,故选择此剂量作为小鼠乳腺内感染的病理模型的造模剂量。
- 李丽魏春梅刘代成杨宏军何洪彬王长法高运东仲跻峰彭广能
- 关键词：小鼠金黄色葡萄球菌
- 金黄色葡萄球菌聚集因子A(Clfa A)功能区基因的克隆及真核表达质粒构建
- 2010年
- 粘附素蛋白是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子,研究根据金黄色葡萄球菌聚集因子A(clfa A)基因,设计合成特异性引物,以国内奶牛乳腺炎临床分离株金黄色葡萄球菌基因组为PCR模板,进行clfa A基因的克隆,并连接入pMD18-T载体进行测序和序列分析,然后经BamHⅠ和XbaⅠ双酶切后构建真核表达载体并进行鉴定。结果表明,以金黄色葡萄球菌标准株为对照,国内分离株多数在990 bp处扩增到特异性条带,经测序鉴定,与Genebank发表的金黄色葡萄球菌clfa A序列同源性为99%;构建的真核表达质粒通过PCR和双酶切鉴定证明构建成功,为研究核酸疫苗奠定基础。
- 魏春梅杨宏军彭广能何洪斌王长法高运东仲跻峰
- 关键词：乳腺炎金黄色葡萄球菌
