国家自然科学基金(81072442)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 小鼠异基因骨髓移植后TLR4/MyD88信号过表达与肠道急性GVHD的相关性
- 2014年
- 目的 探讨异基因骨髓移植后肠道急性移植物抗宿主病（GVHD）小鼠模型中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的表达及其与GVHD的相关性.方法 以雄性C57BL/6小鼠和雌性BALB/c小鼠作为骨髓移植的供、受鼠,受鼠接受致死剂量（8.0 Gy）的全身照射后4～6 h内,输注供鼠来源骨髓细胞（1×10^7个）及脾脏淋巴细胞（1×10^7个,n=12和2×10^7个,n=12）,分别建立轻度和重度小鼠急性GVHD模型,以未接受任何处理的正常BALB/c小鼠作为空白对照（n=6）.以受鼠临床表现、存活时间及小肠病理改变作为肠道GVHD的评价指标;采用实时荧光定量聚合酶链反应、免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测各组小鼠小肠组织中TLR4、MyD88和NF-κB p65mRNA及蛋白的表达,并分析其与GVHD进展的相关性.结果 小肠组织中TLR4、MyD88及NF-κB p65的表达均呈上升趋势.重度GVHD小鼠小肠组织中TLR4、NF-κBp65 mRNA水平较正常对照显著升高（P＜0.05）.各组小肠组织中蛋白的表达也有相同的趋势.此外,TLR4、MyD88和NF-κB mRNA间的表达不仅呈正相关,而且其与GVHD的临床评分也呈正相关（R=0.814,P＜0.001;R=0.828,P＜0.001;R=0.568,P=0.034）.结论 肠道GVHD模型小鼠小肠组织中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路呈明显的活化状态,基因转录和翻译水平均有增强,且与GVHD病情呈显著的正相关.
- 邢帅张学黄霞周平
- 关键词：小鼠骨髓移植移植物抗宿主病
- Toll样受体信号通路在小鼠皮肤移植免疫反应中的作用
- 2013年
- 目的研究树突状细胞（DC）中Toll样受体（TLR）信号通路在小鼠皮肤移植排斥反应中的作用。方法体外诱导培养得到BALB／c小鼠骨髓源性的不成熟DC，加入TLR激动剂CpG刺激细胞成熟，实验组同时加入TLR通路关键分子MyD88的抑制剂ST2825，24h后用流式细胞仪检测IX2共刺激分子CD80和CD86的表达；用荧光染料CFSE标记的C57BL／6小鼠T淋巴细胞与BALB／c小鼠的DC在CpG刺激下行混合淋巴细胞培养，实验组同时加入ST2825，培养3d后用流式细胞仪检测T淋巴细胞的增殖情况。建立BALB／c小鼠次要组织相容性抗原HY错配皮肤移植模型，供鼠均为雄性小鼠，受鼠均为雌性小鼠，在此基础之上分为对照组（供受鼠均为野生型BALB／c小鼠）、MyD88组（供受鼠均为MyDS8基因敲除的BALB／c小鼠）、DC组（供受鼠均为MyD88基因敲除的BALB／c小鼠，移植后输注供鼠来源的DC）、实验组（供受鼠均为MyD88基因敲除的BALB／c小鼠，输注经ST2825预处理的供者来源DC）。观察各组移植皮片的存活时间。结果TLR通路抑制剂ST2825可以剂量依赖性地抑制CpG刺激引起的DC共刺激分子CDS0和CD86的高表达。经Cpg刺激的IX；可以诱导同种反应性T淋巴细胞的大量增殖，ST2825可以呈剂量依赖性地抑制此反应。对照组移植物的存活时间为（22．8±2．8）d；MyD88组移植物均未发生排斥反应（存活时间超过100d）；DC组移植物存活时问为（9．7±2）d；实验组移植物亦未发生排斥反应（存活时间超过100d），较DC组显著延长（P〈0．05）。结论DC通过TLR信号通路在移植排斥反应中发挥关键作用，TLR信号通路抑制剂ST2825能够抑制DC的激活和生物学功能，其机理可能与ST2825抑制DC成熟，并间接抑制同种反应性T淋巴细胞的增殖有关。
- 李超黄霞杨涛张利民李明强周平
- 关键词：小鼠皮肤移植树突状细胞TOLL样受体
- 髓样分化因子88抑制剂ST2825对RAW264.7细胞生物学活性的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨Toll样受体信号转导分子髓样分化因子88(MyD88)抑制剂ST2825对巨噬细胞系RAW264.7细胞生物学活性的影响,为新型免疫抑制剂的研发提供新的思路。方法培养RAW264.7细胞并分为4组:空白对照组细胞不给予任何处理和刺激;脂多糖对照组细胞给予脂多糖(500ng/mL)刺激;ST2825低浓度组和高浓度组细胞分别给予浓度为10μmol/L和20μmol/L的ST2825预处理1h后再给予脂多糖刺激。36h后收集细胞,流式细胞术检测细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达;提取细胞RNA,实时荧光定量PCR检测IL-1、IL-6、TNF-αmRNA水平。异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)法测定细胞吞噬功能。结果脂多糖对照组RAW264.7细胞共刺激分子CD80和CD86表达率分别为(54.2±1.6)%和(56.8±2.9)%,与空白对照组相比均明显升高(均P<0.05);ST2825低浓度组和高浓度组CD80表达率分别为(37.4±1.7)%和(26.4±1.2)%,CD86表达率分别为(43.4±2.0)%和(31.5±1.1)%,与脂多糖对照组相比均降低(均P<0.05)。经脂多糖刺激后,脂多糖对照组RAW264.7细胞IL-1、IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高,ST2825可降低上述促炎性细胞因子的mRNA表达水平。ST2825低浓度组和高浓度组细胞吞噬FITC-Dextran的能力与正常RAW264.7细胞无差异。结论 MyD88抑制剂ST2825可抑制脂多糖对天然免疫细胞的免疫活化效应,而不影响细胞的吞噬功能,为ST2825作为免疫抑制剂用于临床奠定了实验基础。
- 李超薛承彪杨涛李尧黄霞张利民李明强周平
- 关键词：髓样分化因子88免疫抑制剂
