国家自然科学基金(81160257)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：赣南医学院第一附属医院赣南医学院匹兹堡大学更多>>
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- 高迁移率族蛋白1激活线粒体生物合成促进二乙基亚硝胺诱发小鼠肝癌的形成被引量：1
- 2020年
- 目的研究高迁移率族蛋白1(HMGB1)对二乙基亚硝胺诱发C57BL/6小鼠肝癌形成的促进作用及其机制。方法HMGB1loxp/loxp/Alb-Cre^+/-为肝脏特异性敲除HMGB1基因(KO)的小鼠,同窝出生的HMGB1loxp/loxp/Alb-Cre^-/-,HMGB1loxp/WT/Alb-Cre^+/-和HMGB1loxp/WT/Alb-Cre^-/-为野生型(WT)小鼠。分别取6只出生12 d的雄性WT和KO的小鼠,一次性腹腔注射二乙基亚硝胺25 mg/kg。6个月后取肝组织HE染色评价病理学改变并统计各组小鼠肝癌发生率;取各组小鼠血清样本测定丙氨酸转氨酶水平;免疫组织化学染色检测两组小鼠瘤组织内HMGB1蛋白的表达和胞内定位情况;蛋白质印迹法(Western blot)检测两组小鼠瘤组织内线粒体生物合成相关基因的表达情况;RT-PCR检测两组小鼠瘤组织和正常肝组织线粒体DNA拷贝数。组内数据比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析。结果与WT小鼠相比,KO小鼠肝/体质量比明显下降(t=2.634,P=0.0225);两组小鼠血清丙氨酸转氨酶水平均有升高,但差异无统计学意义(t=0.4062,P=0.6932)。WT小鼠肝脏表面可见较多大小不一的灰白色结节,组织学类型为肝细胞癌,不同基因型WT小鼠肝癌发生率差异无统计学意义(P>0.05);KO小鼠的肝癌发生率明显降低(t=8.521,P<0.001)。和WT小鼠瘤组织相比,KO小鼠瘤组织内HMGB1和线粒体生物合成相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α和核呼吸因子1表达量显著下降(t值分别为6.238、4.852,P值分别为0.0335、0.041),线粒体DNA拷贝数明显降低(t=9.211,P<0.01);WT小鼠瘤组织线粒体DNA拷贝数明显高于正常肝组织(t=8.305,P=0.0142)。结论HMGB1通过诱导线粒体生物合成促进二乙基亚硝胺诱发肝癌的形成。
- 贺兴波陈曼肖海黄才斌Allan Tsung刘瑶
- 关键词：基因敲除线粒体肝肿瘤
- miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响被引量：7
- 2016年
- 目的:研究微小RNA-141(miR-141)在人肝癌细胞和正常胎肝细胞中的表达,同时分析miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响。方法:分别提取人肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702的总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141的表达。采用脂质体介导的转染方法分别将miR-141 mimic转染SMMC-7721细胞,将miR-141 inhibitor转染HL-7702细胞;MTS试剂盒和Brd U-ELISA检测细胞增殖能力,流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡率的变化。Transwell实验检测miR-141表达变化对细胞体外迁移能力的影响。结果:miR-141在SMMC-7721细胞中的表达较HL-7702细胞明显下降。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染25 nmol/L miR-141 mimic的SMMC-7721细胞中,细胞增殖速度减慢,S期细胞比例降低,凋亡细胞比例上升,细胞体外迁移能力下降;转染50 nmol/L miR-141 inhibitor的HL-7702细胞中,细胞增殖速度加快,S期细胞比例上升,凋亡细胞比例下降,细胞体外迁移能力增强。结论:miR-141在人肝癌细胞中表达下降,上调miR-141表达可抑制肝癌细胞体外增殖活性和迁移能力,影响细胞周期和凋亡。在肝癌发病进程中,miR-141可能扮演抑癌基因的角色。
- 刘瑶贺兴波舒涛黄才斌
- 关键词：肝细胞癌细胞增殖细胞周期
- 靶向泛素连接酶SIAH2的shRNA对人肝癌细胞株HepG2细胞周期和凋亡的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:探讨shRNA介导的泛素连接酶SIAH2(seven in absentia homolog 2)基因表达抑制对人肝癌细胞株HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法:用已构建的pGenesil-SIAH2重组质粒转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察转染效率。采用RT-PCR和Western blotting技术检测重组质粒对SIAH2 mRNA和蛋白表达的影响,MTS比色法测定重组质粒转染对细胞体外增殖能力的影响,流式细胞术检测重组质粒转染后细胞周期和凋亡的变化。结果:与对照组相比,pGenesil-SIAH2能显著抑制SIAH2 mRNA和蛋白的表达水平;pGenesil-SIAH2转染组细胞增殖速度明显减慢;pGenesil-SIAH2组细胞明显阻滞于G1期,细胞凋亡率明显升高。结论:pGenesil-SIAH2能有效抑制HepG2增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并诱导其早期凋亡。上述研究为以SIAH2为靶点的肝癌基因治疗提供实验依据。
- 肖海贺兴波黄才斌刘瑶
- 关键词：RNA干扰泛素连接酶HEPG2细胞
- 沉默SIAH2基因抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长实验研究
- 2016年
- 目的本研究前期实验发现,靶向SIAH2的shRNA载体能显著抑制HepG2细胞SIAH2mRNA和蛋白的表达,并抑制细胞体外增殖。本研究从体内水平验证靶向SIAH2的干扰载体对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法转染pGenesil-SIAH2的HepG2细胞作为实验组,命名为HepG2-SIAH2;转染空载体pGenesil-1的HepG2细胞作为阴性对照组,命名为HepG2-neo;未转染任何质粒的HepG2细胞作为空白对照组,通过G418筛选出稳定转染细胞株。将15只裸鼠随机分为3组,接种肿瘤细胞后观察裸鼠成瘤情况。4周后测量肿瘤的体积和瘤体质量,绘制移植瘤生长曲线,并用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤中SIAH2的表达情况。结果稳定转染pGenesil-SIAH2的细胞株构建成功,3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成。与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢,实验组平均瘤体积(261.57±41.141)mm3,明显低于阴性对照组(494.35±93.236)mm3(P=0.015)和空白对照组(418.3±28.576 5)mm3(P=0.012),差异有统计学意义;实验组平均瘤体质量为(0.162±0.02)g,明显低于阴性对照组(0.358±0.12)g(P=0.032)和空白对照组(0.322±0.24)g(P=0.028)。实验组瘤体内SIAH2mRNA相对表达量为0.83±0.35,明显低于阴性对照组2.35±0.96(P=0.003)和空白对照组2.57±0.41(P=0.006),差异有统计学意义。实验组瘤体内SIAH2蛋白表达量为0.72±0.02,明显低于阴性对照组2.61±0.67(P=0.004)和空白对照组2.49±0.91(P=0.007),差异有统计学意义。结论靶向SIAH2的shRNA干扰载体能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,SIAH2有可能成为肝癌基因治疗新的分子靶。
- 刘瑶贺兴波黄才斌
- 关键词：SHRNA裸鼠移植瘤
- 体外研究RNA干扰介导的SIAH2基因沉默对人肝癌细胞HepG2的影响（英文）
- 2016年
- 目的:研究发现泛素连接酶SIAH2在多种肿瘤中高表达,为了研究SIAH2和肝癌发病之间的相关性,利用RNA干扰技术观察泛素连接酶SIAH2基因表达抑制对人肝癌细胞株Hep G2细胞周期和凋亡的影响。方法:采用免疫组化检测50例HCC和相应癌旁组织中SIAH2蛋白的表达。构建特异性靶向SIAH2的重组干扰质粒转染人肝癌细胞Hep G2,采用RT-PCR和Western blotting技术检测重组质粒对SIAH2 mRNA和蛋白表达的影响,MTS比色法测定重组质粒转染对细胞体外增殖能力的影响,流式细胞术检测重组质粒转染后细胞周期和凋亡的变化。Transwell实验检测细胞体外侵袭能力变化。结果:SIAH2在肝癌组织中表达明显升高。靶向SIAH2的干扰RNA能显著抑制SIAH2 mRNA和蛋白的表达水平;与Hep G2-neo组、Hep G2-NC组和未转染Hep G2组相比,SIAH2干扰组(Hep G2-S3)细胞增殖速度明显减慢,细胞明显阻滞于G1期,细胞凋亡率明显升高,体外侵袭能力减弱。结论:SIAH2通过促进肝癌细胞增殖和侵袭在肝癌发病中发挥癌基因作用,上述研究为以SIAH2为靶点的肝癌基因治疗提供实验依据。
- 刘瑶贺兴波黄文峰周云黄才斌
- 关键词：肝癌细胞HEPG2小干扰RNA
