吉林省科技厅科研基金(YYZX201123-2)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：徐坤车广华许忠胡起波宋星宇更多>>
- 相关机构：吉林大学吉林大学第二医院吉林出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科研基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤坏死因子α在肺炎支原体感染小鼠主要脏器和血清中的表达及其相关机制被引量：3
- 2013年
- 目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)在小鼠肺炎支原体(MP)感染模型主要脏器和血清中的表达,阐明其与MP感染的关系。方法:通过PPLO肉汤培养基培养MP,选择72只BABL/C小鼠,随机分为对照组(未感染MP的小鼠)、MP感染组(感染MP的小鼠)和抗生素治疗组(感染MP后应用阿奇霉素治疗的小鼠),每组24只。鼻腔滴入培养成功的MP,建立MP感染模型。采用ELISA法测定小鼠血清中TNF-α的水平;提取小鼠肺组织中的细胞总RNA,应用RT-PCR法检测小鼠肺组织中TNF-αmRNA的表达水平;采用免疫组织化学技术观察MP感染小鼠肺、肝脏、肾脏和心脏的病变程度。结果:成功建立MP感染小鼠模型,MP菌液进入小鼠呼吸系统后,MP感染组和抗生素治疗组小鼠出现活动减少、进食差、精神萎靡、鼻部分泌物增加、咳嗽、竖毛和寒战等情况,对照组小鼠进食、饮水和活动度无明显改变。ELISA法,MP感染组小鼠血清中TNF-α水平明显高于对照组与抗生素治疗组(P<0.05),抗生素治疗组小鼠血清中TNF-α的水平高于对照组(P<0.05);RT-PCR法,MP感染组小鼠肺组织中TNF-αmRNA水平高于对照组和抗生素治疗组(P<0.05),且抗生素治疗组小鼠TNF-αmRNA水平高于对照组(P<0.05);免疫组织化学法,MP感染组小鼠肺组织病变重于抗生素治疗组和对照组,且抗生素治疗组重于对照组,对照组无病变或轻微病变(P<0.05),3种实验方法表达结果一致。结论:TNF-α阳性表达强度与MP肺炎的病情严重程度有关联。
- 宋星宇车广华高航胡起波许忠潘薇徐坤
- 关键词：肺炎支原体肿瘤坏死因子Α酶联免疫吸附实验免疫组织化学技术
- 单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用被引量：2
- 2012年
- 目的:制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌(LM)多克隆抗体,并初步探讨其在乳胶凝集试验(LAT)中的应用。方法:复苏并扩大培养LM标准菌株,制备灭活疫苗免疫家兔,采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,采用辛酸-饱和硫酸铵法粗分离,经蛋白亲和层析柱HiTrap Protein GHP进行IgG纯化,采用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价。得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联,并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件,建立快速检测模拟样品中LM的方法。结果:制备并纯化的兔抗LM IgG蛋白浓度为23.364g.L-1,效价为1∶12 800～1∶25 600,与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应,与斯氏李斯特菌有弱交叉反应;致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40;利用LAT方法检测246份样品,阳性检出率为87.5%,最低检出抗原含量为0.039 8g.L-1。结论:制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体;建立的LAT方法特异性强,敏感性较高,重复性好,便于基层推广使用,为LM的现场检测提供了一种新手段。
- 鞠文宋秀玲原野张士尧方珍徐坤李娟孟日增
- 关键词：单增李斯特菌多克隆抗体乳胶凝集试验
