国家自然科学基金(31070300)
- 作品数：13 被引量：128H指数：8
- 相关作者：郭顺星张大为张岗王云强张福生更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院陕西中医药大学中国医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 中国西南7种石斛植物活性内生真菌及其遗传关系(英文)被引量：2
- 2012年
- 目的:对中国西南地区7种石斛植物的内生真菌进行抗菌活性筛选,考察活性菌株之间的遗传关系。方法:采用组织块法分离真菌,琼脂扩散法进行抑菌活性筛选,通过rDNA的ITS序列为基础鉴定活性真菌,用邻接法(NJ)和最大简约法(MP)进行遗传关系考察。结果:从7种石斛属植物分离到98株真菌,它们对Escherichia coli,Bacillus subtilis,Staphylococcus aureus,Candida albicans,Cryptococcus neoformans和Aspergillus fumigatus的抑制率分别是1.02%,102%,184%,1.02%,1.02%,10.2%,其中DL-3,DL-18,DL-21,DM-2,DG-10和DN-1显示出了对B.subtilis,S.aureus和A.fumigatus较强的生长抑制性。24株活性真菌隶属于7个目,11个属,14个种,NJ和MP系统树阐明活性菌之间的亲缘关系。结论:本研究对于考察珍惜濒危石斛属植物的内生真菌的生物活性以及它们之间的遗传关系具有重要的生态价值,为石斛根茎部活性真菌的研究提供参考。
- 崔晋龙王云强邢咏梅郭顺星肖培根王梦亮
- 关键词：抑菌活性琼脂扩散法内生真菌ITS序列分析石斛
- 铁皮石斛分子生物学研究进展被引量：10
- 2013年
- 目的对铁皮石斛(Dendrobium officinale)分子生物学研究进展进行综述。方法查阅国内外相关文献并归纳和总结。结果铁皮石斛分子生物学的研究主要包括3个方面:现代分子标记技术在铁皮石斛分子鉴定中应用;铁皮石斛及其近缘种质资源的遗传多样性和亲缘关系研究;以解析植物生长发育和代谢调控为目标的cDNA文库构建及功能基因克隆分析。结论铁皮石斛分子生物学研究取得了可喜成绩,为该珍稀濒危药用植物的生长发育、代谢调控,以及种质资源的合理开发、利用与保护提供分子基础。
- 张岗张大为赵明明郭顺星
- 关键词：铁皮石斛分子标记基因克隆
- 铁皮石斛丙酮酸激酶基因的克隆与表达分析被引量：5
- 2014年
- 目的克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)基因(DoPK),并进行生物信息学分析以及检测基因在不同器官中的表达情况。方法采用RACE技术获得基因的全长cDNA;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助r实时荧光(real-time quantitative)PCR(RT-qPCR)分析基因在不同器官中的表达情况。结果克隆获得DoPK(GenBank注册号KC178572)的cDNA全长1 895 bp,编码一条由511个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为55 040,等电点7.00;DoPK基因与江南卷柏、拟南芥、马铃薯和葡萄等植物的PK基因有71%、86%、89%和91%的相似性;DoPK蛋白包含保守的丙酮酸激酶结构域(21~497)和活性位点(235~247);DoPK属于胞质型的CYTOSOLIC-1亚类,与单子叶植物亲缘关系较近;DoPK基因为组成型表达,其转录本在石斛茎中的相对表达量较高,为叶中的2.29倍,根中次之,为叶中的1.28倍。结论克隆了胞质型的铁皮石斛DoPK基因的全长cDNA序列,为进一步研究其在铁皮石斛生长发育中的作用奠定基础。
- 张琳蔡茜张大为张岗郭顺星
- 关键词：铁皮石斛丙酮酸激酶基因克隆生物信息学
- 与菌根真菌共生的兰科福建金线莲差异表达基因的筛选被引量：6
- 2012年
- 研究菌根真菌促进药用植物生长发育的分子作用机制在农业上有着十分重要的理论意义和实践意义.本研究从野生福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)根中分离出一株内生真菌AR-18,经鉴定为瘤菌属(Epulorhizasp.)真菌;将AR-18菌与福建金线莲组培苗接菌培养60天,发现其根中能形成内生菌根并能显著地促进福建金线莲苗的生长.为从与AR-18菌共生的福建金线莲中分离出差异表达基因,本实验采用差异显示PCR(DDRT-PCR)方法,使用3条锚定引物和5条随机引物设计15个引物对,从接菌组和对照组中共分离出52条差异显示条带,其中有9条带能通过双引物重扩增显现.再运用反式Northern点杂交进一步筛选,发现其中5条上调表达基因,包括:编码尿磷酸核苷转移酶基因(UPRTs;EC2.4.2.9)和1条假蛋白基因;1条下调表达基因,编码氨基酸跨膜转运子;1条在接菌组中特异表达基因,编码突变酶K(matK).同时,讨论了上述基因可能的功能,尤其是UPRTs基因和matK基因与菌根真菌互作的功能.本研究是福建金线莲植物在该领域的首次报道.
- 李标唐明娟唐坤赵丽芳郭顺星
- 关键词：基因筛选
- 铁皮石斛促分裂原活化蛋白激酶基因DoMPK4的分离和差异表达分析(英文)被引量：7
- 2014年
- 促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPKs）是所有真核生物中普遍存在的一种重要的信号转导组分,在植物生理代谢、生长发育和激素反应等多项途径中起重要调控作用。本研究利用RT-PCR、RACE方法,从珍稀濒危兰科药用铁皮石斛中分离到一个新的促分裂原活化蛋白激酶基因,命名为DoMPK4（GenBank注册号JX297597）。DoMPK4基因cDNA全长1 518 bp,编码一条由369个氨基酸组成的肽链,相对分子质量42.42 kD,等电点为5.55。推定的DoMPK4蛋白不含信号肽,具有一个跨膜域（214~232）,包含MAPK蛋白家族保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性位点（158~170）和MAP激酶的保守位点（71~174）。多序列比对表明,DoMPK4与多种植物MAPKs蛋白一致性较高（74.9%~80.6%）。进化树结果显示,DoMPK4隶属于植物MAPKs蛋白的Group A分支,与单子叶植物亲缘关系较近。实时定量PCR分析表明,DoMPK4在石斛根、茎、叶、种子和原球茎等5种器官中的相对表达量有显著差异。DoMPK4转录本在原球茎中的表达量为叶中的17.65倍,种子、根和茎等次之,分别为5.84、2.28和1.64倍。DoMPK4在原球茎较萌发种子中的高表达量特征,提示该基因在原球茎发育过程中起一定作用。
- 张岗李依民胡本祥张大为郭顺星
- 关键词：铁皮石斛激酶原球茎实时定量PCR
- 铁皮石斛S-腺苷酸脱羧酶基因DoSAMDC1的克隆及特征分析被引量：14
- 2013年
- S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosyl-L-methionine decarboxylase,SAMDC)是多胺合成的关键酶,通过调节多胺的代谢途径参与植物的多项生理生化过程。本文利用cDNA末端快速克隆技术(RACE),首次从铁皮石斛共生萌发种子中分离得到一个新的SAMDC基因,命名为DoSAMDC1(GenBank注册号JX966243),并对其编码蛋白的理化性质、保守结构域等特征进行分析。生物信息学分析表明,DoSAMDC1基因的全长为1979bp,涵盖tiny-uORF、small-uORF和mainORF3个植物SAMDC基因特征ORF。mORF编码一条368个氨基酸的肽链,预测分子质量为40.7kD,等电点为5.2,编码蛋白不含信号肽,具有22个氨基酸的跨膜域(89～110位),具有植物SAMDC的典型结构特点,包括酶原剪切位点、PEST结构域及催化功能必须的氨基酸。序列比对及系统发育树分析结果表明DoSAMDC1与单子叶植物SAMDC具有很高的同源性,与双子叶植物的亲缘关系较远。应用实时荧光定量PCR对DoSAMDC1基因在石斛不同组织中的表达模式分析发现,该基因在未接菌的植物组织中表达变化差异不大,在接菌共生萌发的植物种子中显著上调表达,为未萌发种子的2.74倍,具有受真菌侵染诱导表达的特性,揭示其可能通过参与多胺调控途径在植物?真菌共生方面发挥作用。
- 赵明明张岗张大为郭顺星
- 关键词：铁皮石斛共生萌发
- 珍稀濒危药用铁皮石斛HMGR基因的克隆和特征分析被引量：20
- 2014年
- 3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme—Areductase，HMGR）是甲羟戊酸途径中的第一个限速酶，在植物细胞萜类物质合成代谢过程中发挥重要作用。但是，HMGR基因在珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛类萜生物合成途径中的作用尚不清楚。本研究利用RT-PCR和RACE技术，首次从铁皮石斛中克隆到一个HMGR基因，命名为DoHMGRl（GenBank注册号JX272632）。DoHMGRl基因eDNA全长2071bp，编码一条由562个氨基酸组成的多肽，分子量59-73kD，等电点6-18。DoHMGRl蛋白包含HMGR蛋白家族的4个保守结构域（63-561、147-551、268-383、124-541）和两个跨膜基序（42-64、85～107）。DoHMGR1基因与多种植物HMGR基因相似性很高（67％～89％），与万代兰、水稻、玉米等单子叶植物亲缘关系较近。DoHMGR1基因具有组织表达特异性，其转录本在石斛根和茎中表达量较高，为叶中的2-13和1-98倍。DoHMGR1基因的分子鉴定为进一步解析该基因在铁皮石斛萜类物质合成代谢途径中的分子调控作用奠定基础。
- 张琳王继涛张大为张岗郭顺星
- 关键词：铁皮石斛基因表达实时定量PCR
- 铁皮石斛镁离子转运蛋白基因的克隆及表达分析被引量：10
- 2014年
- 目的克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛镁离子转运蛋白（magnesium transporter,MGT）基因（Do MGT1）并进行生物信息学和表达分析。方法采用RT-PCR和RACE技术,获得基因c DNA全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特征;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时定量PCR（q PCR）检测基因表达模式。结果克隆到Do MGT1（Gen Bank注册号KJ995532）,c DNA全长1 625 bp,编码一条由425个氨基酸组成的肽链,相对分子质量47 400,等电点4.79;Do MGT1蛋白含有Cor A家族镁离子转运蛋白保守结构域（313~420）和镁离子转运蛋白MRS2/LPE10保守域（27~420）;Do MGT1与多种植物MGTs基因一致性为46%~63%,编码蛋白与水稻Os MGTD、Os MGTE、Os MGTF等聚在一起,与At MGT4共同构成植物MGTs基因的一大类群;Do MGT1基因转录本在石斛根、茎、叶器官中为组成型表达,叶中相对表达量较高,为根中的3.46倍;茎次之,为根的1.54倍。结论成功克隆到一个镁离子转运蛋白基因Do MGT1,其转录本在叶中高的表达特征暗示该基因可能在铁皮石斛叶的生长发育中发挥重要作用。
- 张岗翟清华张大为胡本祥郭顺星
- 关键词：铁皮石斛基因克隆
- 铁皮石斛原球茎多糖的研究被引量：23
- 2011年
- 目的研究铁皮石斛原球茎多糖的理化性质。方法经过水提醇沉、脱蛋白和透析等步骤获得铁皮石斛粗多糖(CDO)和原球茎粗多糖(CDOP);CDOP经过纤维素DE-52和葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析获得6个均一多糖;用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定均一多糖的纯度及相对分子质量;用气相色谱法(GC)分析粗多糖和均一多糖的单糖组成;用高碘酸氧化-Smith降解反应研究均一多糖的一级结构。结果 CDO主要由甘露糖和葡萄糖组成,物质的量比为4.29∶1.00;CDOP主要由半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,物质的量比为2.80∶1.00∶0.61。从CDOP中获得了6个质量均一的多糖,分别为DOPW-1(78×103)、DOPW-2(37×103)、DOPS1-1(287×103)、DOPS1-2(351×103)、DOPS1-3(335×103)和DOPS1-4(171×103);它们的单糖组成及物质的量比等特点与DOP的相同;各均一多糖分子中的1→3糖苷键均主要由半乳糖组成,还含有阿拉伯糖、葡萄糖和鼠李糖;除DOPS1-4外,各均一多糖的一级结构中均不存在1→4糖苷键。结论这6个均一多糖为首次从铁皮石斛原球茎中得到。
- 陈晓梅王春兰王爱荣林耕郭顺星
- 关键词：多糖理化性质
- 铁皮石斛软腐病的生物防治被引量：8
- 2013年
- 目的利用本实验室丰富的内生真菌资源筛选出具有良好生物防治铁皮石斛软腐病的菌株,为开发内生真菌生物防治技术和大田应用打下基础。方法采用内生真菌与软腐病原菌PDA平皿对峙实验确定的18株内生真菌用于生物防治实验,先采用瓶苗共培养的方法确定对铁皮石斛苗致病力弱或具有促生长作用的菌株用于盆栽苗实验,进而确定内生真菌的生物防治效果。结果通过盆栽苗生物防治软腐病病原菌终极腐霉的实验研究,利用统计学分析确定了2株具有良好生物防治效果的内生真菌菌株4829和3952,铁皮石斛苗的存活率分别达到66.7%和60.5%。结论石斛属植物内生真菌具有良好的生物防治铁皮石斛软腐病效果。
- 李向东王云强王卉郭顺星
- 关键词：铁皮石斛软腐病生物防治内生真菌
