国家自然科学基金(30801200)
- 作品数：4 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：上海交通大学医学院附属新华医院第二军医大学交通大学更多>>
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- MYCN基因表达变化增强神经母细胞瘤细胞SK-N-BE(2)凋亡
- 2012年
- 目的:以MYCN基因高表达神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE(2)为研究对象,改变神经母细胞瘤细胞中MYCN基因的表达水平,观察对肿瘤细胞凋亡的影响。方法:分别构建MYCN高表达载体和MYCN-siRNA,并转染神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE(2),Western blot检测MYCN蛋白表达变化,使用ELISA法检验肿瘤细胞凋亡情况。结果:Western-blot结果显示转染MYCN高表达载体后SK-N-BE(2)细胞中MYCN蛋白表达显著增加(P<0.05),转染MYCN-siRNA后MYCN蛋白表达显著下降(P<0.05)。肿瘤细胞在MYCN表达改变后,凋亡率均显著增加。结论:神经母细胞瘤细胞株SK-N-BE(2)中MYCN基因表达抑制或增加均可诱导肿瘤细胞凋亡。
- 吕凡邬文杰张弛吴晔明
- 关键词：MYCN神经母细胞瘤凋亡
- 外源性MYCN基因表达增强神经母细胞瘤凋亡及化疗敏感性被引量：2
- 2012年
- 目的以MYCN基因正常扩增神经母细胞瘤细胞株为研究对象，增强其MYCN基因的表达，观察其后细胞凋亡改变，及对常用化疗药物敏感性的影响，为临床治疗神经母细胞瘤开辟新思路。方法克隆MYCN基因，构建MYCN高表达载体；转染神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH，增强MYCN表达后，使用ELISA法检测细胞凋亡情况；Western-blot法检测Bcl-2、BcbxL、Bak、Bax、Bid表达变化；ELISA法检验MYCN表达增强后长春新碱、阿霉素、顺铂对肿瘤细胞凋亡的诱导情况。结果构建pcDNA3．1（＋）-MYCN载体可表达N-Myc蛋白。Western-blot显示被转染SK-N-SH细胞中MYCN基因表达与对照组比较显著强化（1．26±0．12VS．0．58±0．06，P〈0．05）。表达增强后与对照组比较肿瘤细胞凋亡增加（2．11±0．23VS．1．32±0．15，P〈0．05），Bid表达增高（1．53±0．07VS．0．69±0．04，P〈O．05），Bcl-2表达降低（1．66±0．09VS．1．97±0．11，P〈0．05）、Bcl-xL表达降低（1．57±0．08VS．1．93±0．12，P〈0．05），Bak（1．51±0．07VS．1．53±0．08）、Bax（1．35±0．06VS．1．32±0．06）表达无变化（P〉0．05）。MYCN表达增强24h后，长春新碱（19．55±1．99VS．18．42±1．98）、阿霉素（11．65±0．93VS．6．22±0．43）、顺铂（8．70±0．84VS．6．83±0．65）诱发肿瘤细胞凋亡显著增加（P〈0．05）。结论外源性增强神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH中MYCN基因的表达引起肿瘤细胞凋亡增强；对阿霉素，长春新碱，顺铂的敏感性增强；MYCN表达增强可能是通过抑制Bcl-2，Bcl-xL，增强Bid表达促进肿瘤细胞凋亡。
- 吕凡邬文杰张弛严文波吴晔明
- 关键词：神经母细胞瘤基因细胞凋亡
- MYCN基因表达抑制促TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究被引量：2
- 2013年
- 目的神经母细胞瘤(NB)为小儿常见恶性肿瘤。MYCN基因高扩增NB细胞对TRAIL诱导凋亡多有抵抗。我们以MYCN基因高扩增NB细胞株为研究对象,抑制其MYCN基因的表达,探讨其对TRAIL诱导凋亡有无增强作用。方法构建MYCN siRNA,转染NB细胞株SK-N-BE(2),抑制MYCN基因表达后,Western-blot法检测SK-N-BE(2)细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bid、DR4、DR5表达的变化,ELISA法检测细胞凋亡。结果转染MYCN siRNA的SK-N-BE(2)细胞中MY-CN基因表达显著降低(P<0.05)。MYCN基因表达抑制后,SK-N-BE(2)细胞DR5、Bid表达增高(P<0.05),Bcl-2、Bcl-xL表达降低(P<0.05),DR4表达无变化(P>0.05),TRAIL诱导细胞凋亡显著增强(P<0.05)。结论 MYCN基因表达抑制后,可调控Bcl家族中相关蛋白、DR5的表达,促进TRAIL诱导NB细胞凋亡。
- 王俊吕凡邬文杰王雅杰
- 关键词：MYCN基因凋亡
- N—myc蛋白表达对神经母细胞瘤SK-N-BE（2）细胞增殖迁移的影响被引量：1
- 2013年
- 【摘要】目的MYCN基因高扩增是神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）预后的重要指标，其表达蛋白N-myc在NB发生发展中的意义尚存在争议。我们以MYCN基因高扩增NB细胞株SK—N-BE（2）为研究对象，探讨N-mye表达对细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法设计构建MYCNsiRNA；转染NB细胞株SK—N—BE（2），采用RT-PCR法和Western-blot法检测表达抑制情况；抑制N-myc表达后，用BrdU（colorimetricbromodeoxyuridine）试剂盒检测细胞增殖能力变化，Tr—answell（Costar）系统检测细胞迁移能力变化；Western-blot法检验RACKl、Src、Akt、ERKl／2及P38表达和磷酸化改变。结果对照组mRNA表达值（设为1），RT-PCR检测显示转染siRNA的SK-N-BE（2）细胞中N—mycmRNA表达（（）．34±0．06）与对照组比较，差异有统计学意义（P〈（）．05）。Western-blot检测结果显示，转染siRNA的SK—N-BE（2）细胞中N—myc蛋白表达（0．61±0．15）与对照组（1．97±0．26）比较显著降低，差异有统计学意义（P％0．05）。设定对照组迁移、增殖能力为1，N—mye表达降低后SK—N—BE（2）细胞的迁移能力（0．85±0．06）和增殖能力（O．68±0．05）均显著下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。伴随细胞的增殖和迁移能力下降，出现RACKl（对照组1．46±0．18VSN—mycRNAi组1．13±0．10）和磷酸化Src（Tye416）（对照组1．34±0．11VSN—mycRNAi组0．72±0．23）表达降低，磷酸化Akt表达增加（对照组0．55±0．12VSN—mycRNAi组0．84±0．15），差异有统计学意义（P％0．05）。磷酸化Src（Tye527），磷酸化ERKl／2、磷酸化p38的表达无显著变化，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在MYCN高扩增、高表达NB细胞株SK-N—BE（2）中N-myc表达下降可抑制肿瘤细胞增殖和迁移，其机制可能同RACKl、Src，Akt的表达或活化有关。
- 吕凡张弛袁晓军邬文杰吴晔明
- 关键词：原癌基因蛋白质C-MYC神经母细胞瘤细胞增殖
