国家自然科学基金(30901262)
- 作品数：7 被引量：48H指数：3
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- 非小细胞肺癌患者血清中SP70的检测及其临床意义被引量：24
- 2012年
- 目的评价血清中单抗NJ001相关靶抗原SP70能否成为检测非小细胞肺癌（NSCLC）的新型血清肿瘤标志物。方法以SPC—A1为抗原免疫新西兰兔，制备多抗。用多抗包被微孔板，NJ001为一抗，酶标记的羊抗鼠抗体为标记抗体，建立双抗体夹心ELISA法，并优化实验条件；采用该法对2007年10月至2011年6月从南京医科大学第一附属医院收集的经病理确诊的175例肺癌（包括80例肺腺癌、70例肺鳞癌和25例小细胞肺癌）、25例肺良性疾病患者和300名健康体检者血清中SP70进行检测；同时与电化学发光法检测癌胚抗原（CEA）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和角质蛋白19片段（CYFRA21—1）进行比较；各组问阳性率比较采用，检验或Fisher确切概率法。结果肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌和肺良性疾病组的阳性率分别为68．8％、51．4％、16．0％和12．0％，均明显高于健康体检组（7．3％）；NSCLC组（肺腺癌和肺鳞癌）阳性率高于小细胞肺癌组（60．7％vs16．0％，x2=17．23，P〈0．05）和肺良性疾病组（60．7％vs12．0％，r=20．41，P〈0．05）；68例有分期资料的NSCLC患者中，早期组（x2=30）的阳性率达76．7％。另外，ELISA法对NSCLC患者SP70总检出率高于CEA、NSE和CYFRA21—1（32．7％、18．0％和37．3％），差异有统计学意义（60．7％vs32．7％，χ^2=23．63，P〈0．05；60．7％vs18．0％,χ^2=57．22，P〈0．05；60．7％vs37．3％，χ^2=16．34，P〈0．05）。结论NSCLC患者血清中SP70阳性检出率较高，SP70可能是潜在的用于诊断NSCLC的血清肿瘤标志物。
- 彭婪潘世扬王芳黄佩珺徐婷黄蕾张丽霞黎青张红梅徐建秦雪君韩月徐娟朱善军
- 关键词：肺肿瘤HSP70热休克蛋白质类酶联免疫吸附测定
- 慢病毒介导KSHV vIL-6基因稳定表达的血管内皮细胞株的建立被引量：2
- 2012年
- 目的建立慢病毒介导且稳定表达病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)蛋白的血管内皮细胞株。方法以质粒pvIL-6-Flag为模板,PCR扩增vIL-6基因,克隆至慢病毒载体p3DLV,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T细胞,构建含vIL-6基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染血管内皮细胞EA.hy926,经潮霉素筛选,获得稳定表达细胞株,western blot鉴定vIL-6蛋白的表达。结果酶切鉴定和基因测序证实长度为615 bp的vIL-6基因成功克隆至慢病毒表达载体;重组慢病毒经包装、纯化后测得滴度为1.0×107 TU/mL。重组慢病毒感染EA.hy926细胞,经潮霉素筛选,形成生长形态良好的单克隆细胞株EA.hy926-vIL-6。western blot鉴定该细胞株可稳定表达vIL-6蛋白。结论建立了稳定表达vIL-6的EA.hy926细胞株,为进一步研究vIL-6的生物学功能及致病机制提供了细胞模型。
- 许雨乔徐建潘世扬孙瑞红黄蕾彭珊珊
- 关键词：慢病毒血管内皮细胞
- 病毒白细胞介素6对甲基转移酶1表达的影响
- 2013年
- 目的:观察病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,vIL-6)对甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)表达的影响。方法:vIL-6真核表达质粒转染293T细胞,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测DNMT1表达的变化,比色法检测DNMT1的活性。结果:荧光定量RT-PCR和Western blot均表明vIL-6可显著促进DNMT1的表达,且vIL-6能上调DNMT1的活性。结论:vIL-6能诱导DNMT1的表达,可能是卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)致DNA甲基化异常,促进肿瘤发生发展的分子机制之一。
- 徐建许雨乔潘世扬彭姗姗黄蕾孙瑞红
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- 良恶性胸腔积液鉴别中SP70检测的临床意义被引量：13
- 2012年
- 目的探讨SP70抗原的检测对鉴别癌性胸腔积液和非癌性胸腔积液的诊断价值。方法采用病例对照研究。收集2011年7月至2012年2月经临床确诊的肺癌患者胸腔积液108例和非癌性胸腔积液122例，采用双抗体夹心ELISA法对胸腔积液中SP70抗原进行检测；同时与电化学发光法检测CEA、CYFRA21—1和NSE的结果进行比较；采用直接免疫荧光法对胸腔积液脱落细胞上的SP70抗原进行检测，并与HE染色法的脱落细胞学检测结果进行比较，各组问阳性率比较采用矿检验或Fisher确切概率法。结果癌性胸腔积液患者中SP70、CEA、CYFRA21—1、NSE的阳性率分别为72．2％、58．3％、52．8％和30．6％，显著高于非癌性胸腔积液组（9．8％、13．1％、23．O％和19．7％），SP70、CEA、CYFRA21—1、NSE的特异度分别为90．2％、86．9％、77．0％和80．3％；非小细胞肺癌组的总阳性率显著高于小细胞肺癌组的阳性率（74．3％〉0．0％），差异有统计学意义（P=0．02〈0．05），癌性胸腔积液患者中SP70的阳性符合率高于传统脱落细胞学HE染色的阳性符合率（72．2％〉47．2％），差异有统计学意义（x2=14．03，P〈0．05）。结论测定胸腔积液中及脱落细胞上的SP70抗原，能提高癌性胸腔积液诊断的敏感度和特异度。
- 杨瑞霞潘世扬王芳徐建黄珮珺张燕徐娟韩月朱善军曹艳王鹏许雨乔娄鉴芳史新惠
- 关键词：酶联免疫吸附测定荧光免疫测定胸腔积液
- γ-干扰素释放试验对活动性肺结核的诊断价值被引量：19
- 2011年
- 目的评价γ-干扰素释放试验(interferon gamma release assay,IGRA)对活动性肺结核的诊断价值。方法采用IGRA检测75例肺结核疑似病例,与结核菌培养结果进行比较。结果 IGRA诊断肺结核灵敏度为81.1%,特异度为90.9%,准确性为84.0%;IGRA灵敏度明显高于结核菌培养(P<0.01);在23例培养阴性的肺结核确诊病例中,16例IGRA阳性。结论 IGRA灵敏度高,特异度强,有助于活动性肺结核的早期、快速诊断。
- 吴静徐建张映铭王彩英
- 关键词：肺结核Γ-干扰素释放试验酶联免疫斑点法
- 病毒白细胞介素-6对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察病毒白细胞介素-6(viral interleukin-6,vIL-6)对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响。方法以vIL-6真核表达质粒转染293T细胞(转染组)为实验,空载体转染的293T细胞(空载体组)和未转染的293T细胞(未转染组)为对照,3组均采用Western blot法检测DNA甲基转移酶1的表达情况,甲基化特异性PCR法检测p16启动子区甲基化状态,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测p16基因的表达。结果转染组DNA甲基转移酶1蛋白表达较未转染组和空载体组增加;转染组p16基因启动子区出现甲基化改变;转染组p16mRNA表达量明显低于未转染组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05);转染组P16蛋白表达较未转染组和空载体组降低。结论 vIL-6可上调DNA甲基转移酶1表达,导致抑癌基因p16启动子区甲基化,抑制p16基因表达;vIL-6所致的DNA甲基化改变,可能是其致瘤机制之一。
- 吴静许雨乔徐建潘世扬孙瑞红黄蕾
- 关键词：P16卡波济肉瘤相关疱疹病毒
- 甲基化CpG结合域重组蛋白的表达与鉴定
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中表达甲基化CpG结合域(methyl-CpG-binding domain,MBD)重组蛋白。方法:对人甲基化CpG结合蛋白2(methyl-CpG-binding protein 2,Mecp2)的MBD区行密码子优化,将人工合成的DNA克隆至原核表达载体pGS21a,在大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达;镍亲和层析柱纯化重组蛋白。表面等离子共振分析重组MBD蛋白与甲基化DNA的结合能力。结果:酶切和核酸测序证实,成功构建了含密码子优化的MBD基因的原核表达载体。SDS-PAGE和Western blot结果显示,MBD重组蛋白在大肠杆菌中得到表达。亲和层析法纯化后获得了相对分子量为38 000的MBD重组蛋白。SPR分析显示MBD重组蛋白能特异结合甲基化DNA。结论:成功构建含密码子优化的MBD基因的原核表达载体,MBD重组蛋白能在大肠杆菌中表达。
- 徐建潘世扬许雨乔孙瑞红黄蕾彭珊珊
- 关键词：原核表达
