霍英东青年教师基金(111043)
- 作品数：9 被引量：34H指数：3
- 相关作者：金丹王钊郭小磊陀泳华文军更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医院广东医学院中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：霍英东青年教师基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经肽Y受体与成骨分化的研究进展
- 2012年
- 创伤、感染等各种原因造成的骨缺损、骨不连等一直是威胁人类生命健康的医学难题，因此，明确骨再生、重塑过程的生理学机制是解决这一难题的基础和出发点。近年来随着此方面研究的深入，逐渐发现神经因素在骨组织再生中起到非常重要的作用。
- 周健金丹
- 关键词：神经肽Y受体成骨分化生理学机制骨组织再生人类生命神经因素
- 神经肽Y受体在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的 比较大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化过程中神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）Y1受体的表达变化.方法 采用全骨髓法体外分离、培养SD大鼠BMSCs,分为诱导成骨组与未诱导组,在传代培养的不同时期（1,2,3周）,采用免疫细胞化学、Western blot对BMSCs的成骨细胞诱导进行鉴定,采用荧光定量RT-PCR、Western blot检测各组细胞神经肽Y Y1受体mRNA、蛋白的表达情况.结果 RT-PCR结果显示,同一时相点诱导组Y1受体mRNA表达量低于未诱导组,诱导组和未诱导组Y1受体mRNA表达均以时间依赖性的方式增高.Western blot 结果显示,同一时相点诱导组Y1受体的蛋白水平高于未诱导组,诱导组和未诱导组Y1受体蛋白水平以时间依赖性的方式减少.结论 大鼠BMSCs向成骨细胞诱导分化过程中,神经肽Y Y1受体mRNA及其蛋白表达呈现不同趋势,神经肽Y可能通过Y1受体通路介导对BMSCs成骨分化的抑制作用.
- 王钊金丹陀泳华郭小磊文军
- 关键词：神经肽间充质干细胞成骨细胞
- 大鼠雪旺细胞对两种来源的成骨细胞增殖分化影响的研究被引量：5
- 2010年
- 目的 研究应用雪旺细胞（SCs）对两种来源的成骨细胞（OB）的增殖与分化的影响,为构建神经化组织工程骨提供体外实验理论依据.方法 通过采用股骨、胫骨髓腔冲洗法获得SD大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）,采用胰蛋白酶消化新生鼠颅骨获得OB及采用消化后组织块法获得SCs.将BMSCs在成骨诱导液作用3周,鉴定BMSCs向OB分化.采用96孔共培养板将第2代SCs种植于上室,颅骨来源OB种植下室,共培养为实验组,无SCs干预共培养为对照组.将诱导分化的OB种植于下室,第2代SCs种植于上室,共培养为实验组,无SCs干预共培养为对照组,分别于共培养后1、3、5、7、9d采用甲基噻唑基四唑（MTT）进行增殖比较.采用6孔共培养板,实验组上室种植SCs,下室分别种植颅骨来源及BMSCs来源的OB,不加SCs的两种来源的OB作为对照组,分别共培养后于3、7 d检测两种来源OB的碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、骨形态发生蛋白-2 mRNA表达.结果 SCs对颅骨来源的OB在共培养3、5、7、9 d 4个时间点均有明显促增殖作用,在碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨形态发生蛋白-2mRNA在各个时间段均起到抑制作用.SCs对大鼠BMSCs来源的OB在共培养1、3 d无明显促增殖作用,在5、7、9 d有明显促增殖作用,在成骨培养基的环境里,SCs可促进BMSCs诱导的OB分化.结论 选择BMSCs来源的OB 与 SCs共培养更适合用于构建神经化组织工程骨.
- 姜晓锐张鑫鑫肖剑晖金丹江汕王丹赵培冉裴国献
- 关键词：骨髓细胞成骨细胞雪旺细胞分化共培养
- 神经肽对大鼠骨髓间质干细胞增殖影响的研究被引量：2
- 2010年
- 目的 观察外源性降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）、P物质（substance P，SP）对大鼠骨髓间质千细胞（bonemai Towmesenchymal stemcells，BMSCs）增殖的影响，并探讨其机制。方法使用全骨髓法分离、培养大鼠BMSCs，采用RT—PCR、WesternBlot在传代培养的不同时间（1、2、3周）检测BMSCs神经肽受体mRNA、蛋白的表达情况。在不同时间点（1、3、5、7、9d）使用浓度为1×10^-8。mol／L的CGRP、sP分别作用于BMSCs，使用MTT比色法检测BMSCs增殖能力，WesternBlot法检测BMSCs细胞周期相关调控基因cyclinD1、cyclinE、p53的蛋白表达变化。结果RT—PCR、WesternBlot结果显示BMSCs稳定表达CGRP受体、SP受体，同一时间点的CGRP受体表达高于SP受体表达。M1rr结果显示，与对照组相比，CGRP在9d时促进BMSCs增殖，SP在7、9d时促进BMSCs增殖。WesternBlot结果显示，与对照组相比，CGRP促进BMSCs内cyclinD1、cyclinE蛋白表达，在5d时达到高峰；SP促进BMSCs内cyclinE蛋白表达，在5d时达到高峰；两种神经肽均降低BMSCs内p53蛋白表达。结论CGRP、SP对BMSCs的增殖有直接促进作用，影响细胞周期相关调控基因蛋白的表达是其作用机制之一。
- 王钊金丹文君陀泳华郭小磊
- 关键词：降钙素基因相关肽P物质骨髓祖代细胞细胞周期
- 带血管蒂筋膜瓣包裹组织工程骨修复兔桡骨缺损对降钙素基因相关肽和神经肽Y表达的影响被引量：3
- 2008年
- 目的研究带血管蒂筋膜瓣包裹组织工程骨修复兔桡骨缺损对降钙素基因相关肽(CGRP)和神经肽Y(NPY)表达的影响。方法12只新西兰大白兔,每只动物均在左、右侧桡骨中段制作长1.5cm的骨与骨膜缺损,然后植入组织工程骨修复骨缺损,左侧采用带血管蒂筋膜瓣包裹组织工程骨(实验组),右侧仅放置组织工程骨(对照组)。于术后3、6、12个月分别处死4只动物,行免疫组化染色检测修复骨段内CGRP和NPY的表达,并用图像分析软件进行半定量分析。结果两组CGRP和NPY的表达量均随时间延长而增高(P<0.05),且各时间点实验组两者的表达均高于对照组(P<0.05)。3个月时两组CGRP阳性表达部位大致相同,多在血管和骨髓处,新生骨边缘和骨膜处也有少量阳性表达,而6和12个月时以骨膜处和血管周围最多。在各时间点两组的NPY阳性表达部位无明显差异,在灶状骨髓的血管周围表达最多,新生骨质边缘及骨膜处也有少量表达。结论与单纯组织工程骨植入相比,采用带血管蒂筋膜瓣包裹组织工程骨修复兔骨缺损在术后12个月内可以明显促进CGRP和NPY的表达。
- 崔建德裴国献金丹江汕戴金良黄爱文王秋实赵培冉梁双武
- 关键词：骨代用品带血管蒂筋膜瓣降钙素基因相关肽
- 大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中降钙素基因相关肽受体的表达被引量：3
- 2010年
- [目的]探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)受体的表达变化。[方法]采用全骨髓法体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为诱导成骨组与未诱导组,在传代培养的不同时期(1、2、3周),采用免疫细胞化学、Western Blot对骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化进行鉴定,采用RT-PCR、Western Blot检测各组细胞CGRP受体mRNA、蛋白的表达情况。[结果]RT-PCR结果显示同一时间点诱导组CGRP受体mRNA表达量高于未诱导组,诱导组CGRP受体mRNA表达以时间依赖性的方式不断增高;Western Blot结果显示同一时间点诱导组CGRP受体的蛋白水平高于未诱导组,诱导组CGRP受体蛋白水平以时间依赖性的方式增高。[结论]本实验从mRNA、蛋白水平证实大鼠骨髓间充质干细胞表达CGRP受体,随着成骨诱导的不断进行,CGRP的表达量随之上升。
- 王钊金丹
- 关键词：CGRP骨髓间充质干细胞成骨细胞
- P物质受体在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达
- 2010年
- 目的 比较大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化过程中P物质（SP）受体的表达变化.方法 采用全骨髓法体外分离、培养SD大鼠BMSCs,分为诱导成骨组与未诱导组,在传代培养的不同时期（1、2、3周）,采用免疫细胞化学、Western blot对BMSCs的成骨细胞诱导进行鉴定,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测各组细胞SP受体mRNA、蛋白的表达,观察时间-效应关系.结果 （1）rBMSCs及其诱导的成骨细胞有SP受体表达.（2）SP受体mRNA在诱导1周时下降（P〈0.05）,在诱导至3周时显著增高（P〈0.05）.（3）同一时间点诱导组SP受体的蛋白水平高于未诱导组（P〈0.05）,诱导组SP受体蛋白水平在第3周时显著增高（P〈0.05）,呈明显的时间依赖性.结论 大鼠BMSCs及其诱导的成骨细胞表达SP受体,随着成骨诱导的不断进行,SP受体在成骨分化的末期大量表达.
- 王钊金丹
- 关键词：P物质骨髓间充质干细胞成骨细胞分化
- 降钙素基因相关肽促进大鼠BMSCs迁移及VEGF的表达被引量：11
- 2011年
- 目的观察外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在大鼠BMSCs迁移中的作用及对VEGF、血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)表达的影响,探讨CGRP通过BMSCs促进血管生成的作用机制。方法全骨髓法分离、培养SD大鼠BMSCs,采用Western blot法于传代培养1、2、3周时检测BMSCs中CGRP受体(CGRP receptor,CGRPR)蛋白的表达。使用浓度为1×10-8 mol/L的CGRP作用于BMSCs作为实验组,单纯BMSCs作为对照组,在培养72 h时采用细胞趋化实验检测CGRP对BMSCs迁移的影响;在培养1、3、5、7 d采用实时荧光定量PCR检测CGRP作用后VCAM-1 mRNA的表达变化,采用免疫细胞化学染色、Western blot法检测CGRP作用后VEGF的表达变化。结果 Western blot检测示BMSCs稳定表达CGRPR,2周时表达最高。细胞趋化实验显示,实验组CGRP刺激后穿膜迁移细胞数(3.20±1.77)个/HP,较对照组(1.11±0.49)个/HP明显增多(t=4.230,P=0.001)。实时荧光定量PCR检测示,实验组VCAM-1 mRNA表达随时间延长逐渐增加,7 d时最高;实验组3、5、7 d的VCAM-1 mRNA表达量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学染色示,培养1、3 d两组均无阳性染色;培养5、7 d实验组VEGF染色呈阳性,对照组无阳性染色。Western blot检测示,培养1、3 d两组均未检测到VEGF蛋白表达;培养5、7 d实验组VEGF蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05);实验组5 d的VEGF蛋白表达量明显高于7 d(P<0.05)。结论 CGRP能促进BMSCs迁移及VEGF表达,这可能是CGRP调节骨内部血流变化而影响骨代谢的机制之一。
- 王钊金丹陀泳华郭小磊文军周健夏立恒张永涛
- 关键词：降钙素基因相关肽BMSCS细胞迁移VEGF
- 全骨髓培养法和密度梯度离心法分离hBMSCs的比较研究被引量：9
- 2009年
- 目的比较全骨髓培养法和密度梯度离心法对hBMSCs的分离效果。方法取健康成年人自愿捐赠的骨髓,分别采用全骨髓培养法和密度梯度离心法分离、培养hBMSCs并进行传代。采用倒置相差显微镜观察原代细胞形态变化;取第2代细胞培养7d后行HE染色;对比原代及第2、3代细胞传代时间;流式细胞仪检测表面标志物;并检测细胞经成骨诱导后3、6、9d的ALP含量,于第9天采用Kaplow法染色观察细胞ALP染色情况。结果全骨髓培养法分离的原代细胞呈聚集样生长,而密度梯度离心法分离的原代细胞呈单个、散在生长。HE染色示两种方法分离培养的第2代细胞轮廓清晰,大小及形态均匀一致。全骨髓培养法原代细胞的传代时间(15.36±1.67)d;明显快于密度梯度离心法的(18.57±1.05)d,差异有统计学意义(P<0.01);第2、3代细胞的传代时间两种分离方法差异无统计学意义(P>0.05)。经流式细胞仪检测,两种方法培养的hBMSCs上阳性表面标志物CD29、CD44、CD71、CD105、CD166含量和阴性表面标志物CD34含量比较差异无统计学意义(P>0.05),阴性表面标志物CD14、CD45含量差异有统计学意义(P<0.01)。两种方法分离的第2代细胞经成骨诱导后各时间点ALP含量比较差异无统计学意义(P>0.05);成骨诱导后第9天ALP染色程度基本一致。结论全骨髓培养法可分离出hBMSCs,其分离效果与密度梯度离心法相似。
- 黄谦吴涛梁杰杨科跃金丹
- 关键词：HBMSCS密度梯度离心法细胞分离
