国家科技攻关计划(2004BA519A56-05)
- 作品数：4 被引量：41H指数：4
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- 相关机构：中国检验检疫科学研究院荆楚理工学院珠海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 检测禽流感病毒H5、H7和H9亚型的正向基因芯片的制备被引量：5
- 2009年
- 通过分析比较禽流感病毒H5、H7和H9亚型不同毒株的基因组序列,设计出H5、H7和H9亚型特异性引物与探针,将扩增产物点制在芯片上,分别用H5、H7和H9亚型特异性探针与芯片杂交,研制出用于禽流感病毒H5、H7和H9亚型检测的正向杂交基因芯片,同时对正向基因芯片进行特异性、敏感性试验,并用该方法对待检样品进行了检测。结果表明,禽流感病毒正向基因芯片与新城疫病毒、传支病毒等6种禽类常见病毒无反应,其敏感性高于常规PCR方法。
- 王慧煜韩雪清林祥梅贾广乐梅琳杨泽晓
- 关键词：禽流感病毒基因芯片
- 禽流感病毒H1、H3、H5、N2亚型多重RT-PCR检测方法的初步研究被引量：9
- 2007年
- 目的根据禽流感病毒H1、H3、H5亚型的HA基因和N2型NA基因的保守序列,设计出四对RT-PCR引物,建立一步法多重RT-PCR对禽流感H1、H3、H5、N2四亚型进行快速检测。方法利用所设计的四对引物,通过对该方法扩增条件的优化,成功建立快速检测禽流感病毒H1、H3、H5、N2四亚型的一步法多重RT-PCR。利用禽流感H1、H3、H5、N2四亚型毒株和其它相关标准毒株进行敏感性和特异性试验。结果与结论所建立的一步法多重RT-PCR具有较高的特异性和敏感性,与禽流感其它亚型和NDV、IBV、ARV?IBDV的核酸均无交叉反应。用该方法检测现场样品395份(4省20多个地区),结果与经典检测方法一致。
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- 关键词：禽流感病毒多重RT-PCRH3亚型H5亚型
- 禽流感病毒H5亚型正向基因芯片检测技术的建立
- ＜正＞H5亚型高致病性禽流感可导致禽类高达100%的发病率和死亡率,并可感染人和哺乳动物并致其死亡,不仅给世界各国的畜牧业和国际贸易带来巨大的经济损失,而且严重威胁着人类健康。为解决疫情暴发和口岸超大通量样品检疫时,口岸...
- 王慧煜韩雪清林祥梅吴绍强贾广乐梅琳杨泽晓
- 文献传递
- 禽流感病毒分型基因芯片的研制被引量：29
- 2008年
- 【目的】禽流感病毒是一种全球重要的人和动物呼吸道病病原,快速确定其不同亚型对于全球流感监测具有重要的意义。本研究意在研制一种可同时鉴定禽流感病毒所有亚型的方法。【方法】根据GenBank上已发表的禽流感病毒不同亚型(16个HA亚型和9个NA亚型)的基因序列,设计合成了25对特异性引物和1对通用引物,然后以各亚型病毒的参考株RNA作为模板,建立扩增不同亚型的多重RT-PCR方法。参考各亚型病毒靶cDNAs区域的保守序列设计了52条亚型特异的探针,进而利用扩增的各亚型病毒的靶cDNAs对其特异性进行评价。在此基础上,将设计好的探针点制到处理好的玻片上,制备了禽流感病毒分型鉴定基因芯片,结合所建立的扩增不同亚型的多重RT-PCR方法,开发了禽流感病毒亚型鉴定基因芯片试剂。利用收集自49个地区的2653份标本对其特异性和敏感性进行了初步评价。【结果】用于评价的各亚型参考毒株均出现良好的特异性杂交信号,检测的敏感度可达2.47PFU/mL或2.5ng靶DNA片段,而且与禽类常见的IBV、NDV等6种病毒均无交叉反应。【结论】证明该病毒分型基因芯片具有良好的特异性、敏感性。
- 韩雪清林祥梅侯义宏吴绍强刘建梅琳贾广乐杨泽晓
- 关键词：禽流感病毒基因芯片杂交
- 禽流感病毒4个亚型一步法多重RT-PCR检测方法研究被引量：4
- 2007年
- 为了建立简便、快速的AIV检测方法,根据禽流感病毒H5、H7、H9亚型HA基因和N1亚型NA基因的保守序列,设计了4对RT-PCR引物,对H5、H7、H9、N1 4个亚型进行了多重RT-PCR扩增,通过多重RT-PCR敏感性和特异性试验,建立了多重RT-PCR检测方法;应用所建立的多重RT-PCR方法和病毒分离的经典方法对395份(4省20多个地区)口岸检样进行了平行检测,并对其检测结果进行了比较。结果表明,H5、H7、H9、N1 4个亚型的扩增产物大小分别为380,641,493和328 bp,对NDVI、BV、ARVI、BDV、MDV、FPV扩增均为阴性,平行检测结果完全吻合,说明所建立的多重RT-PCR检测方法具有较好的敏感性和特异性。
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- 关键词：禽流感病毒检测多重RT-PCR
