国家自然科学基金(U0732006)
- 作品数：8 被引量：36H指数：4
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- 相关机构：南方医科大学广州医学院生物技术有限公司更多>>
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- CASP8在鼻咽癌中的表达及临床意义被引量：1
- 2012年
- 目的探讨CASP8在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法利用基因芯片比较了8组鼻咽癌组织与混合的非癌鼻咽组织之间的差异表达基因。荧光定量PCR和免疫组化鉴定CASP8基因表达结果的可靠性,并分析CASP8在鼻咽癌中的表达与临床参数之间的相关性。结果荧光定量PCR确证CASP8 mRNA在鼻咽癌组织中表达下调(P<0.0001),与芯片结果相一致。免疫组化结果显示,与非癌鼻咽组织相比,CASP8蛋白在鼻咽癌组织中表达明显下调(P=0.02),且下调的表达与淋巴结转移(P=0.002)及临床分期(P=0.026)呈负相关。结论 CASP8表达下调作为不利因素促进了鼻咽癌的发生发展。
- 方唯意张千兵刘真江庆萍
- 关键词：鼻咽癌基因芯片免疫组化
- CDK4蛋白在胞浆中的表达与肺癌临床病理学特征及预后的关系被引量：4
- 2012年
- 目的评估CDK4蛋白在胞浆中表达与肺癌患者临床病理学特征的关系。方法利用免疫组化和统计学方法分析CDK4蛋白在胞浆中表达以及与肺癌患者临床病理参数及预后之间的相关性。结果与正常肺组织相比,CDK4蛋白在肺癌胞浆中的表达并没有明显增高(P=1.000)。然而,在肺癌组织中,CDK4表达上调正向相关于患者的临床分期和淋巴结转移(P=0.001,P=0.00 1)。预后分析表明,CDK4蛋白在胞浆表达越高,患者生存时间越短。多变量分析显示,CDK4在胞浆中过表达是预测肺癌患者预后不利因素(P<0.001)。结论 CDK4蛋白在细胞胞浆中过表达也促进肺癌的发病过程,且其是预测肺癌患者预后的不利因子。
- 张月周颖刘真方唯意
- 关键词：CDK4蛋白肺癌预后因子
- P27蛋白在胞浆中的表达与鼻咽癌临床病理学特征的关系被引量：2
- 2013年
- 目的评估p27蛋白在胞浆中表达与鼻咽癌患者临床病理学特征的关系。方法利用免疫组化检测P27蛋白在鼻咽癌组织与鼻咽组织之间的表达。利用统计学方法分析P27蛋白在鼻咽癌与鼻咽组织胞浆中表达差异以及P27蛋白在胞浆中表达与与鼻咽癌患者临床病理参数之间的相关性。结果免疫组化结果显示,P27蛋白是一个核浆表达蛋白。与正常鼻咽组织相比,P27蛋白在鼻咽癌组织胞浆中的表达明显下调(P=0.047),且下调表达与T分级(P=0.033)呈负相关。此外,P27蛋白在鼻咽癌组织胞浆中的表达与淋巴结转移和临床分期虽然无显著意义,但也展现了明显负相关趋势(P=0.157,P=0.090)。结论 P27蛋白在细胞胞浆中过低表达可能促进鼻咽癌的发生发展,且其可作为预测鼻咽癌患者预后的不利因素之一。
- 黄巍孙世珺叶亦菁方唯意
- 关键词：P27蛋白鼻咽癌预后因子
- 慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立被引量：4
- 2011年
- 目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平。构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定。293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度。经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点。将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达。结果在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高。PCR和测序验证重组质粒构建成功。慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制。结论成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株。
- 李川马纪张越安靓
- 关键词：NESTIN鼻咽癌细胞慢病毒
- Nestin转基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表达被引量：4
- 2013年
- 目的构建人nestin基因表达载体,制备nestin过表达转基因小鼠。方法以人神经胶质瘤细胞株U251的cDNA为模板,分3段扩增出nestin基因cDNA全序列,并将其克隆入含有强启动子ROSA26的pBROAD3载体,酶切鉴定、测序,除去原核序列,纯化。显微原核注射建立转基因小鼠。PCR验证nestin基因整合,确定建立首建者。将阳性鼠传代。Western blot方法检测F3代转基因小鼠与野生型小鼠主要器官(心、肺、脑、肾)的nestin表达。结果测序结果证明成功构建了受ROSA26启动子调控的nestin转基因载体。出生34只小鼠,PCR检测证实存在首建者2只。Western blot方法证实,与野生型小鼠相比,F3代转基因小鼠脑、肺组织存在较高水平nestin表达。结论首次成功建立nestin过表达转基因小鼠,外源基因可遗传到子代并在脑和肺组织中稳定表达,为深入研究nestin在肿瘤转移、细胞"干性"的维持和细胞的分化等功能提供了良好的实验动物模型。
- 郑文宏李振林贾俊双安靓
- 关键词：转基因小鼠
- 小鼠和人胚胎鼻咽发育解剖形态学比较研究
- 2013年
- 目的比较人与小鼠胚胎鼻咽部的解剖学和组织学差异，为研究一些鼻咽部疾病发病机制提供参考资料。方法用组织学方法观察E9．28周人胚胎及E9．5～19．5dC57BL／6J小鼠胚胎鼻咽结构及粘膜形态。结果人胚胎鼻咽部呈不规则的立方形，顶后壁呈约120。的弧形；鼻咽部富含皱襞、隐窝及淋巴组织。小鼠鼻咽部是一个接近直线的弧形管腔，无淋巴组织及隐窝等结构。人胚胎鼻咽粘膜早、中期主：要是假复层纤毛柱状上皮被覆，只有少量过渡上皮及复层鳞状上皮存在。小鼠胚胎鼻咽粘膜全部为假复层纤毛柱状上皮。结论人与小鼠胚胎鼻咽解剖学和组织学差异，可能导致他们对某些疾病易感性不同。
- 郑文宏邓丽群安靓
- 关键词：小鼠胚胎鼻咽粘膜
- 人nestin第二内含子荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建含有人nestin第二内含子的荧光素酶报告基因并检测其活性。方法从NCBI数据库获得nestin的DNA全长序列(NC_000001),用vectorNTI软件分析找到其第二内含子位置,通过PCR的方法从人血全基因组DNA中钓取nestin的第二内含子全长片段,克隆到报告基因pGL3-promoter载体上,将报告基因载体转染至293T细胞,采用双荧光素酶报告基因系统评估第二内含子的活性。结果成功钓取nestin第二内含子片段,长度为1688bp,测定其DNA序列正确。瞬时转染293T细胞,经双荧光报告实验显示转染了pGL3-nes-promoter载体的细胞其相对荧光素酶活性相比于空载组,大约提高了3.39倍,差异有统计学意义(P<0.001)。结论成功构建了含有nestin第二内含子的荧光素酶报告载体,为进一步研究nestin的调控机制奠定基础。
- 朱媛媛安靓
- 关键词：NESTIN
- miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制被引量：20
- 2013年
- 目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或inhibitor转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果 miRNA芯片结果显示3个肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通过QPCR验证了10例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p和miR-590-3p均同步显著上调。QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2分别过表达miR-590-5p和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加(P<0.05);而HepG2、Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低(P<0.05)。Targetscan预测,PDCD4和PTEN分别作为miR-590-5p和miR-590-3p的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot结果显示miR-590-5p和miR-590-3p可以分别直接下调靶基因PDCD4和PTEN的表达(P<0.05)。进一步我们发现miR-590-3p通过下调PTEN激活PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590在HCC发生发展过程中具有重要的意义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。
- 杨红飞郑文宏赵文淘关春燕安靓
- 关键词：肝细胞肝癌PDCD4PTEN增殖
