国家教育部博士点基金(20070559006)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 相关作者：肖小敏张满云吴彩林甘露王冬菊更多>>
- 相关机构：暨南大学附属第一医院长沙市妇幼保健院中山大学附属第六医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人足月胎盘滋养细胞的分离纯化与鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的建立从人足月胎盘中大量分离纯化滋养细胞的实验方法。方法收取20例正常足月妊娠胎盘,剪取50 g绒毛组织,2.5 g.L-1胰酶联合300 000 U.L-1DNaseⅠ反复消化组织,简化的密度梯度离心法(100 mL.L-1、300 mL.L-1、500 mL.L-1、700 mL.L-1Percoll细胞分离液)联合反复贴壁法分离纯化滋养细胞,锥虫蓝染色计算细胞活力,细胞免疫荧光标记、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)、流式细胞技术(FCM)检测滋养细胞内细胞角蛋白7(CK-7)的表达,计算滋养细胞纯度,比较2种方法测得的滋养细胞纯度是否有差异;FCM计算细胞数目。结果经胰酶、DNaseⅠ联合消化胎盘组织,简化的密度梯度离心法联合反复贴壁法,每50 g胎盘组织可获得细胞数为(0.95±0.25)×108、纯度约85%、活力为(88.86±2.83)%的滋养细胞。LSCM和FCM测得的胎盘滋养细胞的纯度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论简化的密度梯度离心法联合反复贴壁法,可获得大量纯化的足月胎盘滋养细胞。
- 王冬菊肖小敏肖昕
- 关键词：滋养细胞
- 胎盘Toll样受体在HBV垂直传播中的作用被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨乙肝表面抗原(HBsAg)携带孕妇胎盘Toll样受体(TLRs)的表达与新生儿外周血乙肝表面标志物(HBV-Ms)的关系。方法:收集2010年6月至12月在暨南大学附属第一医院产检并分娩的HBsAg携带孕妇53例,正常孕妇10例。ELISA法检测血清HBV-Ms;荧光定量PCR法检测HBV-DNA;Envision免疫组化法检测胎盘TLR3、TLR4、TLR7表达。结果:(1)HBsAg携带孕妇胎盘中TLR3、TLR7的表达显著高于正常胎盘组织(P<0.05),各组间TLR4的表达无统计学差异。(2)新生儿HBsAb阳性者胎盘TLR3的表达显著高于阴性者及正常对照组(P<0.05)。结论:胎盘TLR3、TLR7可能参与HBV垂直传播的免疫调控;胎盘TLR3的高表达与新生儿HBsAb阳性密切相关,是抗HBV垂直传播的保护性因素。
- 吴彩林张满云肖小敏
- 关键词：胎盘TOLL样受体
- 孕晚期用HBIG对HBV携带孕妇胎盘Toll样受体的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨孕晚期应用乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)干预对乙型肝炎病毒(HBV)携带孕妇胎盘组织TLR3、TLR4、TLR7表达的影响。方法收集2010年6～12月在该院产检并分娩的HBsAg(+)孕妇53例,正常孕妇10例。血清HBV-Ms和胎盘TLR3、TLR4、TLR7平均光密度分别采用ELISA和Envision免疫组织化学法检测。结果孕妇血清HBsAg(+)组,胎盘TLR3、TLR7的表达水平均较对照组高;胎盘HBsAg(-)组与胎盘HBsAg(+)组间,TLR3、TLR7表达水平比较差异无统计学意义;孕晚期使用HBIG者,胎盘中TLR3、TLR7的表达与未应用HBIG者比较差异无统计学意义。结论尚不能认为孕期应用HBIG可改变胎盘的TLR3、TLR7的表达。
- 张满云吴彩林肖小敏
- 关键词：TOLL样受体免疫球蛋白类
- 新生儿乙型肝炎病毒血清标志物检测及其转归被引量：3
- 2009年
- 目的探讨乙型肝炎病毒携带产妇所生新生儿血清乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)转归。方法2001年3月至2006年3月在暨南大学附属第一医院进行产前检查的500例HBsAg阳性产妇所生新生儿,根据母亲HBeAg状态分为HBeAg阳性组144例,HBeAg阴性组356例。两组新生儿在出生12h内均注射乙型肝炎免疫球蛋白100IU,并按常规0、1、6方案分别在出生时、1月龄和6月龄注射基因重组乙型肝炎疫苗5μg,注射主被动免疫前分别抽取外周静脉血检测HBV-M。结果两组新生儿出生时外周血HBsAg、HBeAg均阳性者分别为24例和9例,追踪至6月龄时HBsAg阳性例数分别为10例和5例,HBsAg阴转率差异无统计学意义。两组新生儿出生时HBsAg阳性、HBeAg阴性者分别为4例和21例,追踪至6月龄时,HBsAg阴转率分别为100%和85.7%。出生时HBsAg阴性、HBeAg阳性者,HBeAg阳性组为29例,占20.1%,显著高于HBeAg阴性组比例(P<0.01),其6月龄HBsAg阳转率为6.9%,明显低于HBeAg阴性组(P<0.01)。在接受全程主被动免疫的情况下,HBeAg阳性组新生儿6月龄HBsAg和HBsAb阳性率分别为9.7%和67.4%,HBeAg阴性组分别为3.1%和78.1%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿出生时外周血HBsAg阳性不能作为判断宫内感染的指标,HBeAg阳性新生儿预后与母亲HBeAg状态密切相关,母亲HBeAg阳性会抑制新生儿对乙型肝炎疫苗的反应。
- 肖小敏郦爱贞刘东洋孟庆举陈新徐玉苑董爱芝
- 关键词：乙型肝炎病毒宫内感染血清标志物
- 乙肝免疫球蛋白不能阻断乙肝病毒感染人绒毛膜癌细胞
- 2012年
- 目的:观察不同浓度乙肝免疫球蛋白(HBIG)在体外对乙肝病毒(HBV)感染人绒毛膜癌细胞系JAR细胞的影响。方法:实验分为HBIG实验组、空白对照组(胎牛血清)、阴性对照组(健康人血清)。HBIG实验组又分为高浓度HBIG组(HBV+103IU/L HBIG、HBV+102IU/L HBIG)、最低保护浓度HBIG组(HBV+10 IU/LHBIG)、低浓度HBIG组(HBV+1 IU/L、HBV+0.1 IU/L)和HBV组;采用MTT法检测HBIG对细胞生长的影响;采用实时荧光定量PCR检测细胞内HBV-DNA的表达;采用细胞免疫荧光染色法检测细胞内乙肝表面抗原(HB-sAg)的表达变化。结果:(1)不同浓度的HBIG对JAR细胞生长无影响;(2)不同浓度HBIG组的细胞内HBsAg的荧光强度无显著差异(P>0.05);(3)不同浓度HBIG组的细胞内HBV-DNA无显著差异(P>0.05)。结论:HBIG不能阻断HBV感染体外培养的JAR细胞。
- 甘露肖小敏魏明
- 关键词：乙肝免疫球蛋白JAR细胞
- HBV在原代胎盘滋养细胞内复制的初步探讨
- 2015年
- 目的:从体外实验研究HBV在胎盘滋养细胞的感染和复制,初步探讨HBV经胎盘传播的机制。方法:收集HBV携带孕妇足月胎盘12例,采用密度梯度离心法联合反复贴壁法分离、纯化滋养细胞,提取滋养细胞进行培养。流式细胞术检测滋养细胞中CK-7表达,进行细胞纯度鉴定;免疫双标法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测滋养细胞CK-7及间质Vimentin的表达,进行细胞形态学鉴定。PCR-荧光探针法检测体外培养24、48、72h滋养细胞上清HBV DNA的表达;微粒子酶免疫分析技术检测体外培养24、48、72h滋养细胞上清HBs Ag和HBeAg的表达。流式细胞分选技术分选出纯度98%以上的滋养细胞,荧光定量PCR检测滋养细胞中HBV ccc DNA的表达。结果:12例HBV携带孕妇胎盘滋养细胞体外培养24、48、72h,上清均可检测到HBV DNA和HBsAg、HBeAg的阳性表达。HBV-M滴度在24h表达量最高,随着时间的推移,HBV DNA滴度逐渐下降,而HBs Ag和HBe Ag滴度呈先下降后上升的趋势,但3个时间点均无统计学差异(P>0.05);3个时间点上清HBs Ag和HBe Ag的表达量有良好的相关性(P<0.05)。12例HBV胎盘滋养细胞标本中,4例检测出HBV cccDNA阳性,阳性率为33.3%,表达量(copies/ml)分别为5.67×103、2.12×104、1.72×104、4.90×104。Pearson相关分析结果显示,母血HBV DNA滴度和滋养细胞HBV cccDNA滴度呈良好的正相关(r=0.977,P=0.023)。结论:HBV可感染胎盘滋养细胞并在滋养细胞内繁殖复制。
- 柯彩萍肖小敏甘露周雨
- 关键词：乙型肝炎病毒滋养细胞HBVCCCDNA
