国家自然科学基金(31000886)
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：河南省农业科学院河南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
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- 绿木霉ZBS6黏粒基因组文库的构建及质量鉴定被引量：1
- 2012年
- 为开展绿木霉ZBS6(Trichoderma viride ZBS6)拮抗基因筛选及克隆工作,建立了高质量基因组DNA的提取方法,并采用SuperCos1载体构建了绿木霉ZBS6黏粒基因组文库。试验中共获得3.9×104个黏粒克隆,平均插入片段大小约为33kb,文库滴度约为4.2×108 cfu/mL。理论上,从该文库中筛选到任一DNA序列的精确概率可高达99.9%。
- 孙虎燕照玲刘德畅薛保国
- 关键词：绿木霉基因组DNA
- 绿色木霉几丁质酶基因Tvchi cDNA的克隆、原核表达与活性分析被引量：3
- 2012年
- 利用RT-PCR方法从绿木霉ZBS-6中扩增了几丁质酶基因Tvchi,序列分析表明Tvchi开放阅读框为1 293 bp,编码430个氨基酸残基,Blast分析表明,与多种木霉18家族内切几丁质酶具有较高的同源性。将该基因克隆到原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western印迹分析表明成功的获得了47 kD的融合蛋白。该融合蛋白经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白Tvchi。Tvchi最适酶活温度为37℃,最适酶活pH值为6.8。表达产物对小麦全蚀病、赤霉病、纹枯病病原菌显示出较好的抑菌活性。本研究结果将为进一步研究木霉几丁质酶的应用提供了基础。
- 杨丽荣孙虎雷振生赵献林全鑫薛保国
- 关键词：绿色木霉几丁质酶基因基因克隆原核表达
- 农杆菌介导的绿木霉ZBS6的T-DNA转化研究被引量：1
- 2011年
- 应用农杆菌介导的T-DNA转化技术,成功转化了生防绿木霉(Trichoderma viride)ZBS6,共获得368个转化子,转化效率为每106个分生孢子产生92个转化子。PCR和Southern blot分子鉴定以及遗传稳定性测定结果表明:转化子T-DNA插入率为90%,均能够稳定遗传,且T-DNA单拷贝插入率达到80%。进一步以小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces gramims var.tritici)作为供试病原菌进行室内生防作用测定,最终筛选出2个生防作用显著增强的转化子,分别为T79和T124。农杆菌介导的T-DNA转化技术在绿木霉ZBS6中的成功应用,将为木霉菌功能基因组学研究奠定基础,并为其生防作用分子机制研究提供充足的材料和手段。
- 孙虎施艳薛保国杨丽荣梁慎全鑫刘德畅
- 关键词：绿木霉农杆菌转化子生防作用
- 生防绿木霉T-DNA插入突变体库构建
- 本研究运用农杆菌介导的T-DNA转化技术(ATMT)，对生防绿木霉(Trichoderma viride)ZBS6进行了转化，共获得468个转化子，转化效率为234转化子/106个分生孢子.对随机挑选的20个转化子进行P...
- 孙虎薛保国施艳杨丽荣梁慎全鑫
- 关键词：绿木霉农杆菌突变
