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江苏省卫生重大课题基金(K2005017)

作品数：11 被引量：32H指数：4
相关作者：许文林陈巧云房新建陈琛方莉莉更多>>
相关机构：江苏大学附属人民医院蚌埠医学院江苏大学更多>>
发文基金：江苏省卫生重大课题基金江苏省医学重点人才培养基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 11篇中文期刊文章

领域

  • 11篇医药卫生

主题

  • 8篇细胞
  • 5篇蛋白
  • 5篇基因
  • 4篇多药
  • 4篇多药耐药
  • 4篇耐药
  • 3篇真核
  • 3篇真核表达
  • 3篇乳腺
  • 3篇乳腺癌
  • 3篇腺癌
  • 3篇核表达
  • 3篇癌细胞
  • 3篇变异体
  • 2篇荧光
  • 2篇真核表达载体
  • 2篇乳腺癌细胞
  • 2篇胃癌
  • 2篇细胞多
  • 2篇细胞多药耐药

机构

  • 11篇江苏大学附属...
  • 1篇蚌埠医学院
  • 1篇江苏大学

作者

  • 11篇许文林
  • 10篇陈巧云
  • 4篇吴晓君
  • 4篇方莉莉
  • 4篇陈琛
  • 4篇房新建
  • 3篇弓晋灵
  • 3篇李娟
  • 2篇徐红美
  • 2篇冷加燕
  • 2篇秦茹娟
  • 2篇罗文娟
  • 2篇吕旭晶
  • 2篇杨靖
  • 2篇王法春
  • 2篇姚俊
  • 1篇李皓
  • 1篇周磊磊
  • 1篇张徐
  • 1篇邱志远

传媒

  • 7篇江苏大学学报...
  • 1篇中华肿瘤杂志
  • 1篇中华检验医学...
  • 1篇实用肿瘤杂志
  • 1篇中华血液学杂...

年份

  • 2篇2011
  • 3篇2010
  • 4篇2009
  • 1篇2008
  • 1篇2007
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
CD44变异体(CD44v17)在食管癌中的表达及意义
2011年
目的:探讨CD44v17在食管癌中的表达及意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基国库序列号FJ216964)设计特异性引物,采用实时定量PCR法检测了73例食管癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,分析CD44v17 mRNA表达与食管癌临床生物学特性之间的关系。结果:食管癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0.05);食管癌CD44v17 mRNA表达与肿瘤的大小、发生部位、病理类型均无相关性(P>0.05),而与食管癌的分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:CD44v17 mRNA在食管癌组织中高表达,可为临床预测食管癌恶性程度,浸润转移潜能,评估预后提供一种重要的参考指标。
姚俊许文林冷加燕徐红美吴晓君李皓陈巧云
关键词：实时定量PCR食管癌淋巴结转移
塞来昔布逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药及其机制探讨被引量：6
2009年
目的观察环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对肿瘤多药耐药(MDR)的逆转作用,并探讨其初步作用机制。方法在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Adr中,应用MTT方法检测塞来昔布对多柔比星(阿霉素,DOX)的耐药逆转倍数;RT-PCR及Western blot方法检测基因及蛋白的变化;流式细胞术(FCM)检测细胞膜P-gp的表达、功能、细胞周期和凋亡。结果塞来昔布作用24小时后,MCF-7/Adr细胞对DOX的敏感性明显增加,浓度为10μmol/L及20μmol/L时,耐药逆转倍数分别为1.82和3.80,呈现剂量依赖性。COX-2、mdr1、c-Jun、YB-1、survivin等在基因和蛋白水平明显下调(P<0.01),NF-κB无明显差异(P>0.05);20μmol/L作用24小时,P-gp的功能受抑制;G0+G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05),凋亡率明显增高(P<0.05)。结论选择性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布可有效逆转MCF-7/Adr细胞多药耐药,在一定的浓度范围内呈现剂量依赖性,初步机制可能涉及干预转录因子的表达而下调mdr1,阻滞细胞周期及增加细胞凋亡。
陈琛许文林秦茹娟房新建方莉莉陈巧云
关键词：MCF-7/ADR细胞塞来昔布P糖蛋白
Hsa-mir-216a真核表达载体的构建及其在胃癌细胞SGC7901/DDP中的表达
2011年
目的:构建人mir-216a真核表达载体,实现其在胃癌细胞SGC7901/DDP中的表达,为进一步研究mir-216a的功能打下基础。方法:依据miRBase数据库中pre-mir-216a序列设计引物;PCR扩增pre-mir-216a基因并将其克隆至pGenesil-1载体;将pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒转染SGC7901/DDP细胞,RT-PCR及实时定量RCR法检测成熟mir-216a在SGC7901/DDP细胞中的表达。结果:pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒经酶切及测序鉴定正确;pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒转染进SGC7901/DDP细胞后,RT-PCR检测mir-216a成熟体表达明显增强,实时定量PCR检测S/D/mir-216a组mir-216a成熟体表达较S/D/HK组上调(63.530±0.159)倍(t=1.201,P<0.01)。结论:成功构建了pGenesil-1-hsa-mir-216a真核表达质粒,并在胃癌细胞SGC/DDP中高效表达。
徐红美许文林姚俊冷加燕吴晓君陈巧云
关键词：真核表达载体转染
一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义被引量：8
2010年
目的:探讨一种新CD44变异体(CD44v17)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基因库NO.FJ216964)设计特异性引物,应用SYBRG reenⅠ荧光染料,采用实时PCR法检测了52例乳腺癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA的表达量,分析CD44v17 mRNA表达与乳腺癌临床生物学特性之间的关系。结果:乳腺癌组织CD44v17 mRNA表达(3.10±1.12)明显高于相应癌旁正常组织(2.31±0.84)(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(4.07±1.13)显著高于无淋巴结转移组(2.75±0.89)(P<0.01);肿瘤组织>5 cm组CD44v17 mRNA表达(4.18±0.95)明显高于肿瘤组织≤5 cm组(2.96±1.07)(P<0.05);髓样癌(5.27±0.30)显著高于导管内癌(3.28±1.08)和浸润性导管癌(2.92±1.04)(P<0.05),导管内癌和浸润性导管癌CD44v17 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌临床Ⅲ期CD44v17 mRNA表达(4.18±0.92)明显高于Ⅰ期(2.73±0.97),Ⅱ期(2.76±0.96)(P<0.05);乳腺癌CD44v17 mRNA表达与雌激素受体、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和cerbB-2表达无明显相关性(P>0.05)。结论:CD44v17 mRNA在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌的发生发展中起重要作用,可能与乳腺癌的侵袭、转移及预后有关。
弓晋灵许文林李娟杨靖吴晓君陈巧云
关键词：实时荧光定量PCR乳腺癌
血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响
2010年
目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05)。结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。
李娟许文林弓晋灵杨靖吴晓君陈巧云
关键词：多药耐药相关蛋白1血管内皮生长因子荧光素酶报告基因启动子活性
shRNA干扰VEGF表达对白血病细胞多药耐药的影响被引量：3
2009年
目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的关系及其机制。方法:针对VEGF基因设计合成3条干扰片段shRNA1,2,3,采用脂质体2000分别将其转染入K562/A02细胞,RT-PCR法检测VEGF和多药耐药相关基因MDR1,MRP1,topoⅡ,GST的mRNA水平;蛋白质印迹法检测VEGF蛋白水平;MTT法检测各组细胞对多柔比星的半数抑制浓度(IC50值)。结果:K562/A02细胞VEGFmRNA表达水平显著高于敏感株K562细胞,差异有统计学意义(P<0.01),且VEGF蛋白水平也显著高于K562细胞;转染shRNA后,K562/A02细胞中VEGFmRNA水平出现不同程度下调,其中shRNA2组和shRNA3组与转染随机片段组比较差异有统计学意义(P<0.05),以shRNA3组下调最显著,并且VEGF蛋白水平也出现相应的下调;转染48 h后K562/A02细胞中MDR1,MRP1及topoⅡ的mRNA水平均出现不同程度下调,以shRNA3组下调最显著,分别下调(39.7±1.21)%,(29.1±0.97)%,(28.2±1.04)%,GST基因表达则无明显变化;阳性转染组细胞对多柔比星的敏感性明显增加,其中以shRNA3组最显著。结论:VEGFshRNA可以抑制K562/A02细胞VEGF基因与蛋白的表达,不同干扰片段的沉默效果不同,并增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,其机制可能与MDR1,MRP1及topoⅡ的表达下调有一定的关系。
方莉莉许文林陈琛房新建陈巧云李娟
关键词：RNA干扰K562/A02细胞多药耐药
Y-盒结合蛋白1短发夹环RNA真核表达载体的构建被引量：2
2007年
目的:构建Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein-1,YB-1)特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体。方法:采用人U6SnRNA启动子,分别把被9 bp序列间隔的19 bp长短的YB-1靶序列的反向重复序列,置于pGensil-1质粒载体中,构建成YB-1短发夹环RNA,产生重组质粒pGensil-1/U6/YBX11,pGensil-1/U6/YBX12及pGensil-1/U6/YBX13。分别用PstⅠ和SalⅠ酶切鉴定;并将经酶切鉴定正确后的重组质粒作测序分析。结果:YB-1的特异性shR-NA片段被成功克隆进pGensil-1质粒中,SalⅠ酶切鉴定可切出400 bp大小的片段,DNA测序分析显示,重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致。结论:成功构建了针对YB-1的特异性shRNA真核表达载体pGensil-1/U6/YBX11,pGensil-1/U6/YBX12及pGensil-1/U6/YBX13,为进一步研究其基因功能打下了基础。
周磊磊许文林秦茹娟唐华容沈慧玲
关键词：RNA干扰YB-1短发夹环RNA
MAPK／ERK信号通路调节K562细胞中mdr1基因的诱导性表达
2009年
目的观察多柔比星（doxombicin，DOX）诱导K562细胞mdr1基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）／细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路的作用，探讨mdr1基因的转录调控机制。方法多柔比星初始浓度为0．01μg/ml，诱导K562细胞24h后撤药继续培养至细胞状态恢复，加入多柔比星继续诱导24h，浓度增加为0．02μg/ml。依上述方法多柔比星浓度逐渐增加，直至0．05μg／ml。收集DOX浓度为0．01、0．03和0．05μg/ml时的细胞。RT—PCR检测mdrl基因表达，流式细胞仪检测mdrl基因编码的P糖蛋白（P—gP）的表达，Western blot检测ERK活化情况。MAPK的抑制剂PD98059预处理K562细胞1h后与多柔比星共同作用，逆转录（RT）-PCR和流式细胞仪分别检测mdr1基因和P—gP的表达情况。结果经多柔比星作用后K562细胞中ERK磷酸化增强，同时mdr1基因转录上调，及其蛋白产物P—gP的表达也增加，当多柔比星浓度为0．05μg／ml时两者的表达均增加了5倍之多。而用PD98059预处理细胞后能明显抑制多柔比星诱导mdr1基因转录和蛋白表达，多柔比星浓度为0．03μg/ml时PD98059对mdr1基因表达的抑制率为（74．1±0．11）％，多柔比星浓度为0．05μg/ml时抑制率为（70．2±0．14）％。结论多柔比星能够诱导K562细胞mdr1基因表达，同时激活MAPK／ERK信号通路，阻断ERK的活化能抑制mdr1基因的诱导性表达。
罗文娟许文林吕旭晶邱志远陈巧云王法春
关键词：丝裂原活化蛋白激酶细胞外信号调节MAP激酶类
CD44基因变异体对人乳腺癌细胞株MCF-7的侵袭作用被引量：4
2010年
目的探讨一种新的CD44基因变异体（CD44v17）对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭能力的影响及其机制。方法以人乳腺癌耐阿霉素细胞株（MCF-7／ADR）cDNA为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段，将其T．A克隆后，进行测序；构建CIM4v17质粒真核表达载体（pcDNA3．1-CD44v17）；应用脂质体转染法将pcDNA3．1-CD44v17转染入MCF-7细胞中，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）及明胶酶谱法测定转染细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMPO的表达；Transwell法检测CD44v17对MCF-7细胞的侵袭力；Western blot检测胞外信号调节蛋白激酶（ERK）及磷酸化蛋白激酶（p-ERK）变化。结果限制性内切酶消化证实，重组载体已正确克隆；DNA序列分析显示，CD44v17包含CD44基因1～4号外显子、16～17号外显子、18号外显子1～205位碱基（GeneBank NO．FJ216964）。MCF-7细胞转染pcDNA3．1-CD44v17后，CD44mRNA表达量和蛋白表达率分别为0．92±0．22和（70．0±2．5）％；透明质酸（HA）处理后，MMP-2mRNA表达量和蛋白活性分别为0．72±0．22和1．14±0．12，MMPOmRNA表达量和蛋白活性分别为0．85±0．19和1．23±0．25，细胞侵袭能力明显增加，侵袭细胞数目为352±33个／视野，而CD44单抗可以阻断这种作用；CD44单抗和促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路抑制剂预处理转染细胞后，显著阻断了p-ERK的表达。结论在MCF-7／ADR细胞中发现CD44v17，并成功克隆和建立pcDNA3．1-CD44v17；HA与CD44v17受体结合，通过CD44→ras→MAPK信号传导通路调节MMP-2和MMPO的表达，从而增加MCF-7细胞的侵袭力。
房新建许文林弓晋灵陈琛方莉莉陈巧云
关键词：基质金属蛋白酶-2基质金属蛋白酶-9肿瘤侵袭
汉防己甲素干预K562细胞mdr1基因表达的研究被引量：9
2008年
目的观察汉防己甲素（TTD）对阿霉素诱导的K562细胞mdr1基因表达的影响，并初步探讨其机制。方法采用MTT法观察TTD对K562细胞的毒性作用，以0．6 μg/ml阿霉素单独作用或0．6 μg/ml阿霉素联合不同浓度的TTD（0．5、1．0、2．0 μg/ml）作用于K562细胞，用RT—PCR法检测mdr1 mRNA、NF—κB mRNA水平，用流式细胞术检测P—gp的表达情况，用胞内罗丹明123（Rh0123）积聚试验检测P—gP的功能。结果空白对照K562细胞未见明显mdr1 mRNA及P-gP表达（水平分别为0．171±0．012、7．85±0．15），细胞内Rh0123平均荧光强度（反映P—gP功能）为711．9±63．6，NF—κB mRNA水平为0．783±0．090；0．6 μg／ml阿霉素作用24h后mdr1 mRNA、P—gP、NF—κB mRNA表达上调为0．428±0．012、73．68±1．84、1．075±0．047，细胞内Rh0123平均荧光强度下降为347．8±60．6（P值均〈0．05）；2．0 μg／ml TTD预作用24h再与0．6 μg／ml阿霉索联合作用24h能显著抑制阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P—gP表达及功能、NF—κB mRNA的上调（分别为0．148±0．006、7．18±0．38、799．7±45．8、0．627±0．098）（P〈0．05），而0．5、1．0 μg／ml TTD无明显影响。结论TTD以浓度依赖性的方式干预阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P—gP表达和P-gP功能的上调，其机制可能与TTD抑制了阿霉素诱导的NF—κB的表达有关。
吕旭晶许文林罗文娟王法春陈巧云
关键词：K562细胞汉防己甲素MDR1基因
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