甘肃省科技重大专项计划(2GS063-A43-013)
- 作品数：22 被引量：56H指数：5
- 相关作者：王艳华张德林付宝权才学鹏张燕丽更多>>
- 相关机构：中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学新疆农业大学更多>>
- 发文基金：甘肃省科技重大专项计划国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生天文地球更多>>
- 弓形虫代谢分泌抗原对猪IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α表达水平的影响
- 为了探索弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)免疫仔猪后,对机体白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA...
- 蔡志杰芦赟张燕丽曹丽艳王艳华付宝权李文卉张德林
- 文献传递
- 表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组活载体疫苗株的构建被引量：9
- 2008年
- 【目的】构建表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。【方法】克隆并改造TSOL18基因,构建重组质粒pYA3341-TSOL18,电转入鼠伤寒沙门氏菌终宿主菌株X4550,体外鉴定重组菌X4550(pYA3341-TSOL18)表达蛋白的免疫原性、稳定性、生长曲线、安全性和小鼠免疫试验进行评价。【结果】酶切鉴定和基因序列测定证实重组质粒构建成功;尿素-SDS-PAGE检测有目的蛋白条带,Western Blot证实该抗原具有免疫原性;重组菌株在体外营养选择压力下可稳定地携带重组质粒传代繁殖;蛋白的表达对重组菌株的生长基本没有影响;小鼠实验证实重组菌安全可靠,二免后ELISA检测产生抗体。【结论】成功构建了能稳定表达TSOL18蛋白的可口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(pYA3341-TSOL18)。
- 丁军涛陈晓宇骆学农王颖张少华刘斌郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴TSOL18减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因的克隆及表达
- 2009年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增出PRRSV甘肃株的核衣壳蛋白(N)基因,将N基因克隆至pGEM-T easy载体上,获得含N基因的阳性重组质粒pGEM-T easy-N.对质粒中的插入片段进行测序,应用DNAStar分析所测序列与GenBank中已登录的PRRSV毒株的同源性,再将其亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,得到重组表达载体pGEX-4T-1-N,转化E.coliBL21(DE3)细胞,用SDS-PAGE检测表达产物,并对其进行纯化.结果表明:PRRSV甘肃株N基因核甘酸序列与PRRSV-VR2332株的同源性为93.3%,与欧洲LV株的同源性为66.1%;构建的重组表达载体在大肠杆菌中获得了成功表达,表达产物为40ku的可溶性融合蛋白.
- 刘斌才学鹏郭爱疆贾万忠骆学农陈晓宇刘振勇丁军涛刘英
- 关键词：N基因
- 猪囊尾蚴DNA疫苗pVAX1/TSOL18的安全性评估被引量：1
- 2008年
- 目的探讨pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为DNA疫苗在小鼠体内的组织分布和生物安全性。方法将pVAX1/TSOL18重组质粒经肌肉注射免疫昆明系小鼠,免疫后在不同时间剖杀小鼠,分别采集心、肝、脾等组织样品,抽提gDNA,利用PCR技术分析pVAX1/TSOL18在组织内的分布及残留时间。同时,以PCR技术检测免疫动物粪便,分析pVAX1/TSOL18重组表达质粒在外界环境中的释放情况。结果免疫pVAX1/TSOL18重组表达质粒后1 d和5 d,在小鼠组织gDNA均扩增出目的片段,不同个体小鼠,扩增出目的片段的组织也不完全相同,但在血液中均扩增出了目的片段,d5较d1扩增出的目的片段明显变暗。免疫后15 d,仅在一只小鼠的血液中检测到TSOL18基因;免疫后30 d在所有动物组织中均未检测到重组表达质粒。同时,免疫1 d、5 d小鼠的粪便中均未检测到TSOL18基因。结论pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为疫苗对动物和环境是安全的。
- 刘斌才学鹏郭爱疆骆学农陈晓宇丁军涛刘英
- 关键词：猪囊尾蚴DNA疫苗安全性
- 弓形虫代谢分泌抗原对猪T细胞亚群的影响被引量：1
- 2009年
- 为了研究弓形虫代谢分泌抗原对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集仔猪外周血,用流式细胞仪对各试验组外周血中CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行检测,用IHA对抗弓形虫抗体水平做检测。结果显示,弓形虫代谢分泌抗原免疫仔猪后第4周,免疫组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞水平和特异性抗体效价与对照组相比均有大幅度升高;感染后第1周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值较感染前有不同程度降低,感染后第2周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值上升至免疫后水平,CD8+水平下降,感染后特异性抗体效价进一步升高。表明,弓形虫代谢分泌抗原能够提高仔猪外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞水平和特异性抗体水平。
- 蔡志杰王艳华付宝权李文卉芦赟张燕丽曹丽艳张德林
- 关键词：弓形虫T细胞亚群抗体水平
- 猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的表达及免疫原性分析被引量：2
- 2007年
- 本研究采用RT-PCR技术扩增猪带绦虫六钩蚴TSOL16免疫原基因,将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序;构建TSOL16基因的pGEX-4T-1原核表达载体,用IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE、Western blot分析;将所表达的蛋白免疫小鼠,经ELISA检测血清抗体验证其免疫原性。结果显示:所克隆的TSOL16基因片段长度为559bp,含有1个402bp的开放阅读框架,编码134个氨基酸,与已报道的猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因核苷酸序列同源性为99%;表达的融合蛋白大小为40Ku,并能被猪带绦虫六钩蚴阳性血清所识别;免疫小鼠在1周后即检测到血清抗体,第30d即达到较高水平,说明该融合蛋白具有较好的免疫原性。
- 马全英骆学农王颖丁军涛岳城景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴克隆免疫原性
- 弓形虫棒状蛋白2研究进展被引量：6
- 2008年
- 棒状蛋白2(ROP2)为弓形虫生活史各期均能分泌的抗原,具有高度的保守性和免疫反应性.综述了近年来关于ROP2分子生物学特征、免疫特性、疫苗的研究进展.
- 祁光宇张德林孙晓林付宝权王艳华苟惠天
- 关键词：弓形虫分子生物学特征免疫特性疫苗
- Tsol18基因密码子优化对其表达及重组蛋白免疫效果的影响被引量：5
- 2009年
- 定点突变猪带绦虫六钩蚴(oncosphere)Tsol18基因的4个碱基,并截去其N端16氨基酸信号肽的编码序列,构建pGEX-Tsol18-sp表达载体,IPTG诱导表达后进行产物的SDS-PAGE、Western blot及稳定性分析;取该基因修饰前、后所表达的重组蛋白免疫猪,以ELISA检测抗体水平,并通过屠宰检虫评价、比较免疫效果。结果显示:修饰后的Tsol18-sp基因共有7个碱基发生同义突变,表达产物主要是约38.7 ku的可溶性融合蛋白,在4℃保存2个月后约降解20.1%,能与猪带绦虫六钩蚴阳性血清反应;TSOL18和TSOL18-sp抗原免疫试验猪后均能诱导高水平抗体的产生,但TSOL18-sp抗原的保护率较TSOL18抗原有明显的提高(100%vs 20%)。表明Tsol18经修饰后,其重组表达产物的生物学活性和稳定性都有很大改善,可作为囊虫病免疫预防的候选抗原。
- 丁军涛骆学农王颖张少华陈晓宇郑亚东景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴基因修饰抗原性
- 猪带绦虫未知基因SLC10在毕赤酵母中的表达
- 2008年
- SLC10是以反式剪切引导序列为基础,通过RT-PCR从猪囊尾蚴中克隆到的一个未知基因。将猪囊尾蚴SLC10基因从重组克隆载体pGEM-SLC10扩增并酶切后,与相应酶切处理的毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-SLC10,转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切和测序鉴定,基因序列完全正确。纯化的重组质粒pPIC9K-SLC10用内切酶SacⅠ线性化,电转化毕赤酵母,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合;采用G418抗性梯度法筛选多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达;通过SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物,结果表明目的蛋白得到了表达,但不具有免疫反应性。
- 王颖骆学农郑亚东马全英丁军涛景志忠才学鹏
- 关键词：毕赤酵母
- 弓形虫代谢分泌抗原疫苗免疫猪T细胞亚群的影响
- 为了研究弓形虫代谢分泌抗原疫苗对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分...
- 蔡志杰王艳华付宝权李文卉芦赟曹丽艳张燕丽张德林
- 关键词：T细胞亚群抗体水平
- 文献传递
