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应用PCR技术鉴定猪源隐秘杆菌的感染被引量：1: 2013年; 隐秘杆菌（Arcanobacteriumpyogenes，A．pyogenes），又名化脓放线杆菌，是一种多形态、无运动性的革兰阳性杆菌。RamosⅢ根据16SrRNA基因进行系统进化分析后将其分类到隐秘杆菌属。; 禤雄标李军李军胡帅陈泽祥杨威许力干; 关键词：放线杆菌 16SRRNA基因系统进化

副猪嗜血杆菌广西分离株耐药性分析被引量：2: 2012年; 为了了解广西副猪嗜血杆菌(HPS)的耐药情况,试验应用纸片扩散法测定了2009年5月份至2011年3月份分离自广西壮族自治区南宁、桂林、玉林、钦州市65个猪场的31株副猪嗜血杆菌药物敏感性。结果表明:31株菌株对罗红霉素、多黏菌素B和链霉素的耐药率为58.1%、54.8%和51.6%;对头孢西丁、阿莫西林、氨苄西林、卡那霉素、阿米卡星、新霉素、环丙沙星、恩诺沙星的耐药率为16.1%～41.9%;对庆大霉素、氟苯尼考和头孢噻肟的耐药率只有6.5%、9.7%和9.7%。在31株HPS广西分离株中,只有1株菌株对14种抗菌药敏感,仅占3.2%;4株菌株只对1种抗菌药产生耐药性,占12.9%;其余26株菌株对2种以上抗菌药产生耐药性,占83.6%。; 谢宇舟李军禤雄标陈泽祥胡帅彭昊谢永平马春霞许力干潘艳杨威; 关键词：副猪嗜血杆菌耐药性抗菌药

副猪嗜血杆菌实时荧光PCR快速检测方法的建立和应用被引量：13: 2011年; [目的]建立一种快速准确定量检测副猪嗜血杆菌(HPS)的检测方法。[方法]根据GenBank公布的副猪嗜血杆菌16 S rRNA基因序列,选择其保守区域设计1对特异性引物。通过优化引物浓度和退火温度,建立快速定量检测副猪嗜血杆菌的实时荧光PCR方法,并评价了其特异性和稳定性。[结果]建立的实时荧光PCR方法最低检测限是50拷贝/μl,重复性好,变异系数均小于2%。该方法特异性强,只能检测副猪嗜血杆菌,不能检测到猪链球菌2型、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌DH5α和猪伤寒沙门氏菌。采用该方法对10份临床疑似HPS感染样本进行检测,其结果与细菌分离培养和常规PCR的结果一致。[结论]建立的实时荧光PCR方法快速、灵敏、特异、重复性高,可用于HPS感染的临床快速检测。; 李军谢宇舟禤雄标陈泽祥杨威马春霞胡帅彭昊许力干谢永平潘艳; 关键词：副猪嗜血杆菌实时荧光PCR RRNA

副猪嗜血杆菌血清4型全基因组序列草图测定与分析: 2014年; 本研究应用Illumina Hiseq 2000测序系统对副猪嗜血杆菌(HPS)血清4型gx033株进行全基因组序列测定,经过DNA文库构建、测序、数据过滤和组装,绘制了全基因组草图。全基因组草图显示,HPS血清4型的基因组大小为2 155 493 bp,G+C含量为39.79%,含有编码基因2 189个,基因总长度1 881 801 bp。基因功能注释表明,849个基因功能尚不明确,1 340个基因被分为能量产生和转化、转录和细胞周期调控等19个功能组。该HPS血清4型全基因组草图的绘制为HPS病的致病机制等研究提供依据。; 李军彭昊许力干禤雄标谢宇舟潘艳胡帅陈泽祥杨威马春霞; 关键词：副猪嗜血杆菌基因组序列

广西副猪嗜血杆菌病流行病学调查被引量：5: 2011年; 本研究于2009年5月至2010年11月调查了广西南宁、桂林、玉林、钦州4个市60个猪场发生副猪嗜血杆菌病的情况。采集病猪组织样品共86份进行副猪嗜血杆菌分离;对疑似菌株进行形态学观察、培养特性、生化特性和PCR鉴定;最终分离鉴定到26株副猪嗜血杆菌,分离率为30.2%;对分离菌株进行血清型鉴定、致病性和药敏试验。结果表明26株分离株中血清4型有5株,5型3株,9、11、13、14、15型各1株,有1株与2、9、10、11型血清均有凝集,其余12株未能鉴定出血清型。血清型5、13、14菌株和5个未能定型的菌株能引起小白鼠全部死亡,其他菌株对小白鼠致病性不强。药敏试验结果表明70%以上的菌株除对恩诺沙星和氟苯尼考高度敏感外,对其他药物敏感性不高。本调查结果将对广西副猪嗜血杆菌病的防治提供指导。; 禤雄标谢宇舟李军彭昊陈泽祥胡帅谢永平马春霞许力干杨威潘艳; 关键词：副猪嗜血杆菌流行病学调查

副猪嗜血杆菌病原检测及aroA基因PCR-RFLP分型被引量：1: 2011年; 本试验应用PCR方法及PCR-RFLP技术对aroA基因在副猪嗜血杆菌病原检测及基因分型中的作用进行探讨。以针对aroA基因的PCR引物成功检测出18株来自广西各地区猪场的副猪嗜血杆菌,敏感性检测结果表明,该PCR方法可检测的最低菌数为102个。对该18株副猪嗜血杆菌进行aroA基因的序列测定,并进行aroA基因的酶切位点分析,筛选出HindⅢ和FokⅠ两种限制性内切酶,利用PCR-RFLP技术对1株血清5型参考菌株与本研究中18株广西菌株aroA基因的完整编码序列进行HindⅢ和FokⅠ限制酶谱分析,结果显示可分为与毒力相关的3种谱型。本研究结果表明,应用PCR方法及PCR-RFLP技术对副猪嗜血杆菌进行检测分析有助于更好地研究副猪嗜血杆菌的生物学特性及aroA基因的功能。; 彭昊谢宇舟李军禤雄标马春霞胡帅杨威许力干谢永平陈泽祥潘艳; 关键词：副猪嗜血杆菌病原检测 PCR-RFLP

副猪嗜血杆菌血清5型与4型菌株的差异表达蛋白分析: 2015年; 为分析副猪嗜血杆菌血清5型与4型菌株的差异表达蛋白,本研究利用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术结合质谱分析,经过菌体蛋白提取、蛋白质酶解、i TRAQ标记、标记肽段的SCX分离、质谱分析、蛋白鉴定和生物信息学分析,共获得45 540张肽段谱图,含6 830个肽段,其中6 783个为特有肽段,分属于874个蛋白。对所获得的蛋白进行分析结果显示,副猪嗜血杆菌血清5型菌株与4型菌株相比,有99个蛋白的表达发生2倍以上的变化,其中表达上调的蛋白有86个,表达下调的蛋白有13个。根据COGs数据库将99个表达差异蛋白进行功能分类,分为能量产生和转化、离子转运、氨基酸转运和代谢、辅酶转运和代谢、糖转运和代谢、DNA复制和损伤修复、RNA加工和修饰、细胞外结构、细胞膜/壁形成、细胞运动性、转录后加工/分子伴侣、转录、翻译/核糖体结构及功能未知14类。本研究结果为副猪嗜血杆菌的后续研究奠定基础。; 李军谢宇舟彭昊禤雄标潘艳杨威胡帅马春霞许力干陈泽祥; 关键词：副猪嗜血杆菌血清型

副猪嗜血杆菌菌体蛋白的提取及蛋白质双向电泳方法建立被引量：1: 2017年; 为了建立副猪嗜血杆菌菌体蛋白的双向电泳方法,获得背景清晰、蛋白分辨率高的双向电泳图,对细菌裂解方法、蛋白上样量、IPG胶条选择等关键步骤进行优化。结果显示,采用超声(9.9 s/停顿9.9 s,200 W)冰浴破碎细菌,5 min后,裂解液溶解沉淀,4℃过夜裂解提取菌体蛋白,以0.6 mg菌体蛋白上在p H值3~10非线性IPG胶条上进行电泳,最后考马斯亮蓝G250染色,获得的蛋白质点清晰,效果最好,随机挑取14个蛋白点进行质谱鉴定,证实均为副猪嗜血杆菌菌体蛋白。; 谢宇舟李军冯世文彭昊潘艳禤雄标陈泽祥陈泽祥许力干; 关键词：副猪嗜血杆菌双向电泳菌体蛋白蛋白质组学

广西地区副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱分型研究被引量：1: 2011年; 为探讨肠道细菌基因间重复序列(ERIC)的聚合酶链反应(PCR)技术用于副猪嗜血杆菌基因分型的可行性,对分离自广西地区不同猪场的22株副猪嗜血杆菌进行ERIC-PCR指纹图谱分型研究。结果发现,22株分离株显示出12种指纹图谱,可以区分无法进行血清分型的菌株。表明ERIC-PCR可适用于对副猪嗜血杆菌进行分子流行病学调查及基因分型快速诊断。; 彭昊李军谢宇舟马春霞禤雄标胡帅杨威许力干谢永平陈泽祥潘艳; 关键词：副猪嗜血杆菌指纹图谱

应用PCR技术鉴定猪鼻支原体的感染被引量：2: 2011年; 2009年8月份至2010年6月份,广西贵港市、北流市和南宁市3个规模化猪场保育猪陆续出现体温升高、关节肿大、心包炎和腹腔炎等疑似副猪嗜血杆菌病症状,部分病猪发生死亡,为了研究其病原,试验应用PCR技术对病猪肺渗出物和关节液提取的DNA模板进行细菌16S rRNA基因的PCR扩增和测序。结果表明:引起广西省3个规模猪场出现疑似副猪嗜血杆菌病症状的病原是猪鼻支原体。; 禤雄标胡帅李军马春霞谢宇舟陈泽祥谢永平彭昊杨威许力干潘艳; 关键词：PCR PCR

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广西壮族自治区科技攻关计划(0993009-1)

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