贵阳市科学技术计划项目([2013103]19)
- 作品数：7 被引量：4H指数：2
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- 相关机构：贵州医科大学贵阳医学院南京医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 氯化消毒饮用水有机提取物对L-02肝细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对人肝细胞株(L-02)细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将L-02细胞分别于含0(对照)、0.312 5、0.625、1.25、2.5、5 L/ml氯化消毒饮用水有机提取物的培养基中暴露48 h。测定细胞中半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)与B细胞淋巴瘤2相关x基因(Bax)m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组比较,2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中caspase-3、Bax的m RNA及蛋白表达水平均较高,而0.625、1.25、2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中Bcl-2、PARP-1的m RNA及蛋白表达水平均较低(除0.625 L/ml组PARP-1蛋白外),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在本实验条件下,较高剂量的氯化消毒饮用水有机提取物暴露可上调L-02肝细胞中caspase-3与Bax基因,下调Bcl-2及PARP-1基因,促进细胞凋亡的发生。
- 杨光红桂晓玲岑延利张爱华敖云霞李骞王士然
- 关键词：饮用水有机提取物
- 氯化消毒饮用水有机提取物对大鼠肝脏芳香烃受体和相关基因表达的影响
- 2014年
- 目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对大鼠肝脏芳香烃受体(aryl hydrcarbon receptor,AhR)和相关基因表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将40只清洁级SD大鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组,每组10只,雌雄各半。采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒12周。采用实时荧光定量PCR法检测肝脏中Ah R、热休克蛋白(HSP90)、芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)和细胞色素1A2(CYP1A2)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测肝脏中AhR、HSP90、ARNT与CYP1A2蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组大鼠肝脏中HSP90的mRNA和蛋白表达水平均增高,20、80 L/kg组大鼠肝脏中AhR、ARNT与CYP1A2 mRNA和蛋白的表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在本实验条件下,氯化消毒饮用水有机提取物暴露可活化AhR通路。
- 桂晓玲岑延利杨光红张爱华敖云霞李骞王士然
- 关键词：有机提取物芳香烃受体热休克蛋白90
- 饮用水有机提取物致大鼠肝脏损伤中GSTs活性及其编码基因表达的变化被引量：1
- 2015年
- [目的]观察饮用水有机提取物对大鼠肝脏谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GSTs)活性及谷胱甘肽-S-转移酶A1(GSTA1)基因m RNA和蛋白表达的影响,探讨其在饮用水有机提取物肝脏损伤中作用。[方法]采用固相萃取法提取水样中有机污染物,50只SD大鼠随机分成5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(玉米油)和低、中、高3个染毒组(剂量分别为每天5、20、80 L/kg·bw),进行经口灌胃染毒12周。分光光度法检测GSTs的活性,实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法分别检测GSTA1基因的m RNA和蛋白质表达水平,同时检测肝功能各指标。[结果](1)大鼠肝脏GSTs酶活性:与空白对照、溶剂对照及低剂量组相比,中剂量[(50.66±5.62)U/mg蛋白]和高剂量组[(39.80±12.95)U/mg蛋白]的GSTs酶活性升高(P<0.05);与中剂量组相比,高剂量组GSTs的酶活性则明显降低(P<0.05)。(2)GSTA1的m RNA及蛋白表达水平:中、高剂量组高于空白对照组、溶剂对照及低剂量组(P<0.05);而与中剂量组相比,高剂量组GSTA1的m RNA表达水平下降(P<0.05)。Western blot检测结果显示,随染毒剂量的增加,GSTA1蛋白表达呈先升高后降低的趋势,与空白对照、溶剂对照及低剂量组比较,中、高剂量组的升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而与中剂量组比较,高剂量GSTA1的蛋白表达则下降(P<0.05)。(3)肝功能指标:与对照组比较,血清胆碱酯酶(CHE)在中、高剂量染毒组升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转换酶(AST)则仅在高剂量组升高(P<0.05)。总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)在高剂量组下降(P<0.05)。GSTA1蛋白表达、GSTs活性与染毒大鼠肝脏CHE水平均呈正相关关系(r=0.490 5,r=0.685 2;P<0.05)。[结论]在本实验条件下,饮用水有机提取物较高剂量染毒可上调大鼠肝脏GSTA1的m RNA及蛋白质表达水平,调控GSTs活性改变,从而导致大鼠肝细胞对毒物的易感�
- 杨光红桂晓玲岑延利张爱华敖云霞李骞王士然
- 关键词：饮用水有机提取物谷胱甘肽-S-转移酶肝脏毒性
- 饮用水有机提取物对正常人肝细胞凋亡及炎性因子的影响被引量：2
- 2015年
- 目的观察L02细胞经饮用水有机提取物染毒后所诱发的白介素6(interleukin 6,IL-6)和丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)及细胞凋亡的改变。方法采用固相萃取法提取饮用水中有机污染物。将取处于对数生长期的正常人肝(L02)细胞分别暴露于分别暴露于含终浓度0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0 L/ml有机提取物的培养液中暴露24、48、72 h,同时设溶剂对照(含0.1%DMSO培养液)和空白对照(培养液)。检测细胞凋亡率及细胞培养液上清中IL-6的含量和ALT的活力。结果与溶剂对照组比较,各剂量饮用水有机提取物染毒不同时间L02细胞的凋亡率均较高,除0.312 5、0.625 0 L/ml染毒24 h和0.312 5 L/ml染毒48 h组外,差异均有统计学意义(P<0.05);各剂量饮用水有机提取物染毒不同时间L02细胞培养液上清中IL-6的含量均较高,差异均有统计学意义(P<0.05);各剂量饮用水有机提取物染毒不同时间L02细胞培养液上清中ALT的活力均较高,除0.312 5、0.625 0 L/ml染毒24 h组外,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着饮用水有机提取物染毒剂量的升高和染毒时间的延长,L02细胞的凋亡率及细胞培养液上清中IL-6含量和ALT活力均呈上升趋势。结论在本实验条件下,饮用水有机污染物可剂量依赖性及时间依赖性地诱导L02细胞炎性因子IL-6的分泌,引发炎症反应,诱导细胞凋亡,从而导致肝细胞损伤。
- 岑延利杨光红桂晓玲张爱华李菲李传美
- 关键词：有机提取物白介素6丙氨酸氨基转移酶
- 核因子-κB信号通路在自来水有机提取物致L02细胞炎性损伤中的作用
- 2016年
- [目的]观察自来水有机提取物致正常人肝细胞株(L02细胞)炎性损伤中核因子-κB(NF-κB)信号通路的激活情况及其调控作用。[方法]采用固相萃取法提取自来水中的有机污染物。将L02细胞分别暴露于培养液(空白对照)、0.1%二甲基亚砜(溶剂对照)和0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0 L/m L自来水有机提取物中24、48、72 h。采用免疫印迹方法观察NF-κB信号通路的激活情况;并使用ELISA法测定细胞培养液上清中白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。[结果](1)L02细胞染毒24、48、72 h,细胞活力在各剂量组均明显降低(P<0.05)。(2)L02细胞染毒24、48、72 h,NF-κB抑制蛋白的表达水平在0.625 0 L/m L以上剂量组均明显降低(P<0.05);p65蛋白表达水平在染毒24、48 h时点,仅在1.250 0 L/m L以上剂量组明显升高(P<0.05),而在72 h时点,0.625 0 L/m L以上剂量组即明显升高(P<0.05)。(3)L02细胞染毒24、48 h后,0.625 0 L/m L以上处理组的IL-8水平均明显升高(P<0.05);而染毒72 h,低剂量组(0.312 5 L/m L)的IL-8水平即可升高明显(P<0.05);染毒24 h,1.250 0 L/m L以上处理组的TNF-α水平明显升高(P<0.05);而染毒48、72 h,TNF-α水平在0.625 0 L/m L以上处理组即升高明显(P<0.05)。与24 h染毒组比较,48、72 h各染毒组的IL-8与TNF-α水平均明显升高(P<0.05)。(4)IL-8、TNF-α水平与NF-κB抑制蛋白表达水平均呈负相关关系(r=-0.851 0、-0.818 0,P<0.05),与p65蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.816 0、0.865 0,P<0.05)。[结论]自来水有机提取物可剂量-依赖性及时间-依赖性地激活NF-κB信号通路,诱导IL-8及TNF-α的分泌,此可能为其诱发L02细胞炎性损伤的重要原因之一。
- 岑延利杨光红桂晓玲张爱华蒋涓
- 关键词：有机提取物核因子-ΚB白介素-8
- 双酚A对高电压激活钙通道亚型电流的影响
- 2015年
- 目的探讨双酚A对大鼠背根神经节神经元钙离子通道各亚型的影响。方法选择50只健康4~6周龄清洁级SD大鼠,采用Ⅰ型胶原酶(4 mg/L)和Ⅰ型胰蛋白酶(1.5 mg/L)消化法分离背根神经节(DRG)神经元,以L、N、P/Q型钙通道阻断剂硝苯地平(nifedipine,10μmol/L)、乙酸齐考诺肽(ω-conotoxin MVIIA,2μmol/L)、ω-芋螺毒素(ω-contoxin MVIIC,2μmol/L)预孵育神经元20 min,特异性阻断通道电流,记录电流前即时通过灌流系统加入10μmol/L BPA,采用全细胞膜片钳方法记录钙电流。结果双酚A对各亚型通道均有抑制作用,其中,以L型钙通道为主。阻断L型钙通道,10μmol/L BPA对钙电流的抑制率由(53.22±11.00)%降低至(14.02±5.51)%,差异有统计学意义(P<0.05);BPA使L型钙通道电流密度(p A/p F)峰值由-30.54±3.92减小到-20.7±3.92,差异有统计学意义(P<0.05)。阻断N、P/Q型钙通道,对钙电流的抑制率由(53.22±11.00)%分别降低至(26.90±12.33)%和(25.66±5.99)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论双酚主要通过抑制L钙通道亚型,抑制钙离子电流。
- 王文娟杨光红王军王强肖杭
- 关键词：双酚A钙电流膜片钳
- 钙稳态在DBP诱导胚胎大鼠皮层神经元凋亡中的作用
- 2016年
- [目的]研究钙稳态在邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导大鼠皮层神经元凋亡中的作用。[方法]取胚胎大鼠皮层神经元,用25、50、100 mg/L的DBP进行细胞染毒,同时用加入10μmol/L钙络合剂(BAPTA-AM)和上述各浓度的DBP进行细胞培养,检测各组细胞的凋亡率、细胞内钙浓度(Fluo-3/AM荧光强度)、活性氧浓度以及线粒体膜电位。[结果]25、50、100 mg/L DBP染毒组的神经元凋亡率[(12.27±0.93)%、(18.53±0.87)%、(27.63±1.06)%],荧光强度[(10 623±826)%、(14 815±732)%、(18 328±708)%],细胞内活性氧的发生率[(10.21±1.05)%、(29.23±1.35)%、(34.68±1.03)%]及神经元线粒体膜电位下降率[(30.71±1.81)%、(45.30±3.25)%、(53.00±4.29)%]均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着DBP染毒剂量的增加,上述各项指标均呈剂量-效应关系(r=0.977,r=0.970,r=0.962,r=0.914,均P<0.05);BAPTA-AM干预后,与DBP同剂量组比较皮层神经元凋亡率有所降低,荧光强度明显下降,线粒体膜电位下降率降低,细胞内活性氧的发生率降低(均P<0.05)。[结论]DBP可诱导大鼠皮层神经元凋亡,钙络合剂通过降低钙离子浓度,缓解DBP诱导的皮神经元的凋亡,表明钙稳态失衡促进DBP诱导的大鼠皮层神经元凋亡。
- 王文娟杨光红曾奇兵喻馨兰汪文云
- 关键词：皮层神经元钙稳态凋亡线粒体膜电位
