国家自然科学基金(396302080)
- 作品数：9 被引量：74H指数：5
- 相关作者：林裕龙侯金林王战会骆抗先彭永正更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学南方医院南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PCR-RFLP检测HBeAg阴性preS1抗原阳性的HBV感染者前C区基因变异被引量：8
- 2006年
- 目的探讨HBeAg阴性的HBV感染者前S1（preS1）抗原阳性与前C区基因G1896A变异发生频率的关系。方法用荧光定量PCR检测64例HBeAg阴性HBV感染者血清HBVDNA，ELISA法检测preS1抗原，以错配聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）分析HBV前C区1896位点的基因变异。结果64例血清中preS1抗原阳性25例（39．1％），preS1抗原阴性39例（60．9％）；25例preS1阳性的标本中23例（92．0％）HBVDNA阳性（19例≥10^3copies／ml，4例为10^2copies／ml，2例为检测限以下），有21例（84．0％）发生1896位点变异；39例preS1抗原阴性的标本中11例（28．2％）HBVDNA为10^2～10^3 copies／ml、17例（43．6％）发生1896位点变异。preS1阳性与阴性患者1896位点变异率有显著性差异（P〈0．005）。结论HBeAg阴性的HBV感染者中，preS1抗原不受前C区基因变异的影响，可以更客观地反映HBV复制状态。
- 林裕龙兰萌龙国进莫炳强彭永正冯桂湘侯金林
- 关键词：前S1抗原基因变异限制性片段长度多态性
- HBV基因T1862突变真核表达载体的构建及在Cos7细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的研究ＨＢＶＴ１８６２变异的生物学意义。方法 采用分子生物学方法，构建 ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因ＥＢ病毒真核表达 载体，利用体外定点突变技术诱导前Ｃ／Ｃ基因Ｔ１８６２变异，经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ初筛并经测序终鉴定出阳性克隆后，以脂质体 介导方法将突变前后的重组质粒转染Ｃos７细胞，以 ＥＬＩＳＡ检测 ＨＢeＡg的表达量。结果 未突变的重组质粒可稳定表 达ＨＢｅＡｇ，突变后的重组质粒未能检测到ＨＢｅＡｇ表达。结论ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因１８６２点突变的真核表达载体的构建， 为体外研究该点突变引起ＨＢＶ的一系列生物学改变奠定基础。
- 林裕龙侯金林王战会阎丽周福元骆抗先
- 关键词：真核表达载体定点突变基因转染COS7细胞
- 不同类型乙型肝炎患者HBV基因型的分布被引量：9
- 2007年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)各种基因型在不同类型乙型肝炎患者中的分布。方法用PCR结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测56例HBV感染的肝癌、58例肝硬化、60例慢性乙型肝炎患者以及60例HBV无症状携带者血清HBV基因型。结果无症状携带者中B基因型为46.7%(28/60),C基因型为33.3%(20/60),D基因型为20.0%(12/60);慢性乙型肝炎组B基因型为41.7%(25/60),C基因型为36.7%(22/60),D基因型为21.7%(13/60);肝癌患者中B基因型为33.9%(19/56)、C基因型为60.7%(34/56)、D基因型为5.4%(3/56);肝硬化患者中B基因型为31.0%(18/58)、C基因型为63.8%(37/58),D基因型为3.5%(2/58)。结论在慢性乙型肝炎和无症状携带者中以B基因型为优势感染毒株,而肝硬化和肝癌患者则以C基因型为优势感染毒株。
- 林裕龙兰萌莫炳强彭永正冯桂湘侯金林
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型聚合酶链反应限制性片段长度多态性
- 乙型肝炎病毒前C信号肽酶裂解位点变异对HBeAg表达的影响被引量：20
- 2004年
- 目的 探讨乙型肝炎病毒前C信号肽酶裂解位点变异后乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)表达的改变。 方法 以聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)方法筛检前C信号肽酶裂解位点变异的病例 ,经PCR扩增出编码HBeAg的前C/C区基因并克隆于EB病毒真核表达载体 (EBO) ,以脂质体介导方法将变异株与野株分别转染HepG2细胞 ,利用SEAP报告系统监测转染效率 ,用酶联免疫吸附方法 (ELISA)和免疫印迹 (Westernblot)方法检测转染不同病毒株的细胞外和细胞内HBeAg的量。 结果 转染野株的细胞培养上清经ELISA方法可检测到HBeAg阳性 ;而转染变异株的细胞培养上清中HBeAg为阴性。培养细胞内部以Westernblot方法检测发现野株可表达三种蛋白 ,即HBeAg(分子量 170 0 0 )和两种HBeAg前体 (2 2 0 0 0和 2 5 0 0 0 ) ,而变异株只能检测到两种HBeAg前体 ,且变异株的HBeAg前体密度带明显比野株强。 结论 乙型肝炎病毒前C信号肽酶裂解位点变异后可能影响HBeAg的翻译后加工 ,导致大量的HBeAg前体在细胞中蓄积 ,这可能导致HBV感染者血清HBeAg阴性。
- 林裕龙彭永正冯桂湘侯金林
- 关键词：乙型肝炎病毒HBEAG
- 拉米夫定治疗中国乙型肝炎患者中发现YMDD耐药变异株被引量：8
- 2000年
- 为了监测拉米夫定临床治疗过程中耐药性的产生 ,更好地指导临床用药。采用 PCR产物克隆后测序的方法 ,对 2 0例服用拉米夫定病人进行随访观察 ,检测其体内乙型肝炎病毒 (HBV)聚合酶基因 (P gene) )酪氨酸 -蛋氨酸 -天门冬氨酸 -天门冬氨酸 (YMDD)区域变异情况 ,同时观察其 HBV DNA定量和肝功能指标变化。结果发现 ,1例病人在服用拉米夫定 9个月时出现 HBV YMDD变异株 ,并由混合感染逐渐进展为单一的变异株感染 ,出现耐药时伴有 HBV DNA定量反跳和 AL T的上升。表明拉米夫定长期治疗 (>6个月 )可能出现耐药 ,耐药变异株由弱势株逐渐演变为优势株 ,耐药出现时可伴有 HBV
- 孙剑侯金林王战会章廉骆抗先
- 关键词：拉米夫定乙型肝炎YMDD变异耐药性
- e抗原阴性重症乙型肝炎患者HBV前C区热点变异研究被引量：21
- 2001年
- 目的 研究ＨＢＶ信号肽区热点变异与重症乙型肝炎发生及转归的关系。方法 采用错配聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限 制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析方法检测６８例ＨＢｅＡｇ阴性的重症乙型肝炎病人（其中急性重肝６例、亚急性重肝３８ 例、慢性重肝２４例）及４４例慢性乙型肝炎患者的Ｔ１８６２、Ａ１８９６变异情况。结果 急性重肝的Ａ１８９６、Ｔ１８６２变异分别 为６６．７％（４／６）、０（０／６）；亚急性重肝４２．１％（１６／３８）、１５．８％（６／３８）；慢性重肝 ２５．０％（６／２４）、１６．７％（４／２４）；慢性肝炎 ４５．５％（２０／４４）、２．３％（１／４４）。重症乙型肝炎组与慢性肝炎组比较Ｔ１８６２变异率有显著差异（Ｐ＜０．０１），Ａ１８９６变异率无显 著差异（Ｐ>０．０５）。结论 提示Ｔ１８６２变异与乙型肝炎的重症化密切相关。而Ａ１８９６变异与乙型肝炎重症化进程是否有 关还不能确定。
- 林裕龙候金林王战会孙剑阎丽骆抗先
- 关键词：聚合酶链反应限制性片段长度多态性HBVE抗原
- 不同HBV感染者病毒前C区信号酶裂解位点变异的检测被引量：3
- 2001年
- 运用错配聚合酶链反应 (PCR)和限制性片段长度多态性 (RFLP)分析方法 ,检测乙型肝炎病毒(HBV)基因前C区信号酶裂解位点 (T186 2 )变异在重型乙型肝炎、乙型肝炎无症状携带者 (AsC)、乙型肝炎病毒感染后肝硬化 (LC)及慢性肝炎 (CH)病人中的发生率 ,以探讨T186 2变异在各组肝病中的临床意义。T186 2变异在 4组病人中的发生率分别为 :重型乙型肝炎 17.3% (9/ 5 2 ) ,AsC无一例变异 ,LC 2 .7% (1/ 37) ,CH 2 .3% (1/44 )。重型乙型肝炎病人T186 2变异率与AsC、LC和CH比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ,而AsC与LC、CH比较 ,T186 2变异差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。提示T186 2变异与乙型肝炎病毒引起的急性重症肝炎或慢性肝炎急性加重有关。
- 林裕龙柳青侯金林王战会阎丽孙剑郭亚兵骆抗先
- 关键词：乙型肝炎聚合酶链反应HBV限制性片段长度多态性
- HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及对HBeAg表达的影响被引量：3
- 2001年
- 采用分子生物学方法 ,设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV的Pre C/C片段 (1814～ 2 45 2 ) ,经酶切后连于EBO真核表达载体 ,利用定点突变技术分别对连接载体进行T186 2 ,A1896 ,A1899,A1896 +A1899点的定点诱变。经错配PCR RFLP和测序分析 ,确定突变的克隆。将突变前后的质粒以脂质体转染法转染HepG2细胞 ,检测不同点突变后HBeAg表达的改变。突变前后的质粒转染HepG2细胞经稳定表达 ,结果未突变的EBO PreC/C重组质粒HBeAg表达为强阳性 ,A1899突变的重组质粒HBeAg表达比未突变的重组质粒稍弱 ,而转染EBO空载体和T186 2 ,A1896 ,A1896 +A1899重组质粒突变体的细胞培养上清HBeAg均为阴性。
- 林裕龙侯金林王战会孙剑阎丽骆抗先
- 关键词：定点突变真核表达载体HBV
- PCR-RFLP检测肝癌和肝硬化患者乙型肝炎病毒基因型被引量：3
- 2004年
- 林裕龙柳青彭永正冯桂湘侯金林
- 关键词：PCR-RFLP肝癌乙型肝炎病毒基因型
